纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证方案及报告_1655227276

纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证及_1655227276 纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数方法 验证方案及报告 文件编号:**VP*****-* 文件类别:验证 ***********公司 验证方案批准 方案起草 签名 日期 质量管理部 方案审核 签名 日期 QC负责人 QA负责人 质量管理部负责人 方案批准 签名 日期 验证领导小组负责人 总经理 2 验证小组人员名单 组长 姓名 职务/职称 部门 成员 姓名 职务/职称 部门 3 目录 1、引言 ……………………………………………………….5 2、验证参与部门及责任……………………………………….5 3、验证方法…………………………………………………….5 文件要求……………………………………………………6 菌种…………………………………………………………6 菌液制备……………………………………………………7 验证方法……………………………………………………7 验证结果……………………………………………………8 4、结果判断……………………………………………………10 5、验证结论及评价……………………………………………11 6、验证报告批准书……………………………………………12 4 1.引言 1.1 概述 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及原料、辅料受微生物污染程度的方法。 、酵母菌数及控制菌检查。当建立药品的微生物限度检检查项目包括细菌数、霉菌数 查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证和控制菌检查方法的验证。 进行上述验证前，应首先对验证过程中使用的仪器、仪表及微生物限度检查的环境 进行验证。 微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域 进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 除另有规定外，细菌培养温度为30-35?;霉菌、酵母菌培养温度为23-28?;控制 菌培养温度为35-37?。 1.2验证目的 确认所采用的方法适合于纯化水的细菌数、霉菌数、酵母菌数的测定。 3验证执行的文件 1. 超净工作台操作规程 微生物限度检查法 培养箱标准操作规程 热压灭菌锅标准操作规程 2. 验证参与部门及责任 序号 部门 职责 1 质量管理部 起草验证方案、组织实施验证 2 设备工程部 仪器仪表校验 3 质量管理部 设备、仪器操作，菌数的测定及结果判断 3.验证方法: 3.1文件要求 所需文件 内容 编号 存放地点 仪器仪表校验合格证 质检中心万级空气净化系统验证报告 超净工作台验证报告 5 培养箱验证报告 热风循环干燥箱验证报告 热压灭菌锅验证报告 检查人: 日 期: 3(2菌种 验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代(从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。 菌种类别 传代次数 菌种保藏现状 大肠埃希菌[CMCC (B)44 102] 金黄色葡萄球菌[CMCC (B)26 003] 枯草芽孢杆菌[CMCC (B)63 501] 白色念珠菌[CMCC (F)98 001] 黑曲霉[CMCC (F)98 003] 确认人: 日期: 3(3菌液制备 3(3(1分别取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许，各接种至5ml营养肉汤培养基中，在36???培养18-24小时，取均匀培养物1ml用0.9%无菌 7氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:10,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 3(3(2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养24-48小时，取均匀培 7养物1ml用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释至1:10,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 3(3(3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5-7天，加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液1mL(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液按10倍递增稀释 7至1:10,制成每1ml含菌数为50~100cfu的菌悬液。 制备人: 日期: 3(4验证方法 验证试验分四组，进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 6 3(4(1试验组 取纯化水原液1ml和50~100 cfu试验菌加至100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，摇匀，过滤。滤膜菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养48小时或72小时，测定其菌数。 (4(2菌液组 取上述试验菌液，方法同试验组，测定其加入的试验菌菌数。 3 3(4(3供试品对照组取纯化水原液1ml，方法同试验组，按菌落计数方法测定其本底菌数。 (4(4稀释剂对照组为考察供试液制备过程对微生物的影响程度，用稀释液替代供试液，3 加入上述试验菌液，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。 3(4(5阴性对照取稀释液pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液100ml,过滤。方法同试验组，按菌落计数方法测定其菌数。阴性对照应无菌生长。 试验组平均菌落数,供试品对照组平均菌落数，100%3(4(6试验组菌的回收率= 菌液组的平均菌落数 稀释剂对照组的平均菌落数，100%3(4(7稀释剂对照组的菌回收率= 菌液组的平均菌落数 3(5验证结果 7 细菌、霉菌、酵母菌的计数验证的测定结果(一): 检测日期: 年 月 日至 年 月 日 供试品 稀释剂 菌类 试验所用菌种 测定项目 试验组 菌液组 阴性对照 对照组 对照组 样1菌落数 样2菌落数 大肠埃希菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 细菌 金黄色葡萄球菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 枯草芽孢杆菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 霉菌 白色念珠菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 酵 样2菌落数 母 黑曲霉 平均菌落数 菌 / / / 菌回收率 检测人: 复核人: 8 细菌、霉菌、酵母菌的计数验证的测定结果(二): 检测日期: 年 月 日至 年 月 日 供试品 稀释剂 菌类 试验所用菌种 测定项目 试验组 菌液组 阴性对照 对照组 对照组 样1菌落数 样2菌落数 大肠埃希菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 细菌 金黄色葡萄球菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 枯草芽孢杆菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 霉菌 白色念珠菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 酵 样2菌落数 母 黑曲霉 平均菌落数 菌 / / / 菌回收率 检测人: 复核人: 9 细菌、霉菌、酵母菌的计数验证的测定结果(三): 检测日期: 年 月 日至 年 月 日 供试品 稀释剂 菌类 试验所用菌种 测定项目 试验组 菌液组 阴性对照 对照组 对照组 样1菌落数 样2菌落数 大肠埃希菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 细菌 金黄色葡萄球菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 枯草芽孢杆菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 样2菌落数 霉菌 白色念珠菌 平均菌落数 / / / 菌回收率 样1菌落数 酵 样2菌落数 母 黑曲霉 平均菌落数 菌 / / / 菌回收率 检测人: 复核人: 10 4(结果判断 4(1稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%。 4(2若试验组的菌回收率均不低于70%，则可按该供试液制备方法和菌落计数法测定供试品的细菌、霉菌、酵母菌数;若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应建立新的方法，消除供试品的抑菌活性，并重新验证。 结论: 确认人: 日期: 5(再验证:若原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 11 6.验证结论及评价报告 1、是否按规程内容完成，如未按规程进行 理由: 批准人: 2、主要试验结果: 项目 标准 验证结果 是否符合规定 1(稀释剂对照组的菌回收率 均应不低于70%。 2(若试验组的菌回收率均不 低于70%，则可按该供试 液制备方法和菌落计数法 测定供试品的细菌、霉菌、 酵母菌数;若任一次试验 中试验组的菌回收率低于 70%，应建立新的方法， 消除供试品的抑菌活性， 并重新验证。 3、结果的、建议 报告人: 年 月 日 4、会签 重要试验结果是否完整: 完整 欠缺 不合格 试验结果可靠性: 可靠 尚需重试 评价结果: 合格 不合格 会签人: 验证小组负责人: 年 月 日 12 7、验证报告书批准 验证项目名称 细菌、霉菌及酵母菌计数方验证方案及报告 确认所采用的方法适合于纯化水的细菌数、霉菌数、酵母菌数 验证目的 的测定。 验证方案及验证报告编号 **VP*****-* 该验证项目及验证报告已经审核无误，予以批准。特此证明。 本验证项目有效期 自 年 月 日至 年 月 日止。 验证管理部门负责人签字: 年 月 日 企业盖章 13