重组人白细胞介素-4说明书

重组人白细胞介素-4说明书 上海创未生物技术有限公司 IL-4是一种由辅助性T细胞(Th细胞)产生的细胞因子，能作用于体内的多种免疫活性细胞包括B细胞、T细胞、巨噬细胞等，增强IgE介导的体液免疫和杀伤细胞的杀伤能力。当其与GM-CSF共同使用后，可以诱导单个核细胞分化为树突状细胞(Dendritic Cells, DC)。 本产品系采用原核表达纯化工艺生产的重组人白细胞介素-4(Recombinant Human Interleukin-4, rhIL-4)，分子量为14.9kD，包含129个氨基酸。 主要技术指标 [批号] 20090615 [规格] 10μg/支 [纯度] 采用SDS-PAGE及HPLC分析，纯度大于98%，内毒素含量低于0.01ng/μg蛋白 [性状] 本产品为白色冻干粉剂，每支含添加剂甘露醇、人血白蛋白，可溶于水及其它常用的缓冲液中; [保存] 常温保存3个月，4-8?保存期大于12个月， -20?保存期大于24月; 6[活性] 采用TF-1细胞，其生物学活性，比活性大于5×10U/mg，ED小于500.2ng/ml; [用途] 本产品为重组细胞因子制剂，可用于实验研究及树突状细胞的诱导培养。 (一) 重组人IL,4的SDS,PAGE纯度鉴定 按常规方法制备5,浓缩胶及15%分离胶。重组IL,4样品加等体积2×上样缓冲液，与分子量Marker一起，煮沸加热5min后，以微量注射器上样。以200V电压恒压电泳1h。凝胶经银染后采用扫描仪扫描，并采用ImageMster Total lab分析软件计算纯度分析。 分析结果显示，重组人IL,4的SDS,PAGE电泳纯度大于98%。 94 KD 67 KD 43.5 KD 31 KD 20.1 KD 14.4 KD Lane 1 10ul IL-4, Lane 2 5ul IL-4, Lane 3 Marker 图1 重组人IL,4 SDS,PAGE纯度鉴定结果 (二) 重组人IL,4的生物学活性及比活性测定 取足量处于对数生长期TF,1细胞培养物。1200rpm离心5min后，不含血清的1640培养--------2 5基调整细胞浓度为1×10 /ml，置37?备用。将待测样品在体外稀释到100ng/ml浓度后，在0.1KD 板内进行10倍稀释。每孔加入50μl细胞悬液，37?，5%CO条件下培养24小时后，每孔加2 3 入1uCi的同位素H,TdR，继续培养6小时后，收集细胞进行掺入同位素检测。 1 0.9 0.8 0.7 0.6OD570 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 00.010.1110 IL-4 concentration (ng/ml) 3图 3 重组人IL,4对TF,1H,TdR掺入的量效反应曲线 3TF,1细胞增殖试验H-TdR掺入试验结果表明，重组IL,4的ED50,0.2ng/ml, 其比活性 6,5×10 U/mg。 (三) 重组人IL,4内毒素含量测定结果 采用鲎试剂半定量测定法，其检测灵敏度达0.5Eu/ml以下。检测结果表明，重组IL,4 6样品内毒素,0.5EU/50ug，按LPS比活性1×10 EU/mg计算，该制品内毒素含量,0.01ng/ug