睾酮（Testosterone）

睾酮（Testosterone） Testosterone 睾酮(Testosterone) 酶免疫检测试剂盒 96人份 一、用途 3(兔抗—睾酮试剂(粉红色):7mL; 定量检测人血清或血浆中总的睾酮的浓度。 4(睾酮—HRP酶联试剂(蓝色):12mL; 5(睾酮对照品1:液体，0.5mL，备用; 二、概述及检测原理 6(睾酮对照品2:液体，0.5mL，备用; 睾酮(17β—羟雄甾--4—烯一3一酮)是一个19碳的类固7(TMB试剂(一步):1lmL; 醇，在C—4和C—5之间有一个不饱和键，酮基在C—3上，8(终止液(1N HCL):11mL.。 羟基在C—17的β位上。该类固醇激素分子量为288.4。 睾酮是分泌到血液中最重要的雄激素。在男性，主要由四、自备材料 睾丸莱迪氏细胞(间质细胞)分泌;在女性，大约50,循环的1(精密加样器:10µL，50µL，100µL和1.0mL; 睾酮从外周雄烯二酮衍生而来，约25,来源于卵巢，25,来2(可处理的加样器尖头; 源于肾上腺。 3(蒸馏水或去离子水; 睾酮负责第二男性性征发育，它的检测有助于评价性4(涡旋混合器; 功能/发育减退的状况。 5(吸水纸或纸巾; 在女性，高水平的睾酮一般见于多毛症、男性化、多6(线性坐标纸; 囊卵、卵巢肿瘤、肾上腺瘤和肾上腺增生。 7(酶标仪。 在男性，高水平的睾酮与下丘脑垂体单元疾病、睾丸 瘤、先天性肾上腺增生和前列腺癌有关。 *警示与注意 低水平睾酮可见于患者下列疾病:肾上腺机能减退， 本试剂盒中的试剂可能存在生物危险成分或其他传染克莱恩费尔综合症(先天性睾丸发育不全症、睾丸小、细精管性因子。因此，必须把所有的人血液制品、包括患者样品看纤维化和玻璃样化，机能损害和介质细胞凝集及尿促性腺激作潜在的感染源。必须按照有关生物危险安全指导或规定(例素增加性染色体异常。)睾丸摘除术后、隐睾症、酶缺陷及某如:美国疾病控制中心/国家健康研究所手册:“微生物和生些自身免疫疾病。 物医学实验室的生物安全”(1984)来处理。 本方法的原理是在兔抗睾酮总量不变的情况下检测样 品中的睾酮与睾酮—HRP酶联试剂之间的竞争结合。在温育五、样品的收集和制备 时，羊抗兔IgG包被的微孔与10µL睾酮品、对照品、1(样品无须特殊的预先处理。 患者样品、100µL睾酮—HRP酶联试剂和50µL兔抗睾酮2(血清样品在2~8?可保存24小时;要保存更长时间必须37~?温育90分钟。在温育期间，HRP标记的睾酮结合的量在-10?或更低温度下冷冻。禁止使用明显溶血、脂血的样品。 与标准品、样品或定性的对照血清中内源性睾酮对特异性睾3(检测中，不要使用含有叠氮化钠的标本。 酮抗体结合部位的量相竞争。这样，结合到微孔上的睾酮— HRP的量进一步减少，因为样品中的睾酮浓度在增加，然后六、试剂盒的保存和对仪器的要求 弃去未结合的睾酮—HRP并洗涤微孔，加入HO/TMB，室 未启封的试剂盒必须保存在2~8?下;微孔板在有干燥22 温温育20分钟，显色，再加1N HCL终止反应并在450nm剂的密封袋中保存以使其在潮湿空气中的暴露降低到最低处测量光密度值，睾酮—HRP的量与样品中睾酮的量呈反比程度。已启封的试剂盒在上述保存条件下在失效期之前保持例关系并与所形成的颜色的深浅成一定比例，通过标准品浓稳定。酶标仪谱宽?10nm，光密度值(O.D.)在450nm波长测度对吸收值标绘出标准曲线。样品和与标准品一同操作的对量范围在0~3之间。 照品中睾酮的浓度可以从标准曲线上计算出来。 七、试剂的制备 三、试剂盒组成 1(使用之前，全部试剂必须达到室温(18~25?)。 1(羊抗兔IgG包被的微孔:96孔，1块; 2(预计睾酮浓度超过18ng/mL的样品可通过稀释来定量检2(睾酮参照标准品:0，0.1，0.5，2.0，6.0，18.0ng/mL，测。 液体，0.5mL/瓶，备用; 第1页 共2页 Testosterone 八、检测步骤 注意:上述标准曲线仅用于说明，不能用于计算未知样品。1(将所需的微孔固定在支架上。建议:标准品、样品和对每个实验室必须在每次检测中用自己的数据建立标准曲线。 照品按双份设置。 2(吸取10µL标准品、样品和对照品到相应的微孔中。 十、预期的正常值 3(吸取100µL睾酮—HRP酶联试剂到上述每个微孔中。 每个实验室应在患者人群的基础上建立自己的正常值4(向每个微孔中加入50µL兔抗—睾酮试剂，充分混合30范围。本试剂盒制造商随机地选择患者以外的临床实验标秒钟。完全混合至关重要。 本，检测结果如下: 5(37?温育90分钟。 男性:前、后青春期 0.1~0.2ng/mL 6(弃去温育混合液，用蒸馏水或去离子水洗板5次(请勿用 成年人 3.0~10.0 ng/mL 自来水洗板)。每次冲洗之后都要将微孔中残余水滴在吸水 女性:前、后青春期 0.1~0.2 ng/mL 纸或纸巾上扣干。 卵泡期 0.2~0.8 ng/mL 7(向每个微孔中加入100µL TMB试剂，轻轻混合10秒钟。 月经期 0.2~0.8 ng/mL 8(室温(18~25?)温育20分钟。 绝经期 0.08~0.35ng/mL 9(把100µL终止液加入到每个微孔中以终止反应。 10(轻轻混合30秒钟。此步对确保蓝色全部变为黄色至关十一、试剂盒特性 重要。 1(敏感性:本试剂盒睾酮最低检出量为0.05 ng/mL。 211(用酶标仪在15分钟内于450nm处阅读吸收值。 (特异性:下为几个内源性和药物性的类固醇激素的交 叉反应数据。 九、结果计算 观察到的睾酮浓度 1(计算出每份参照标准品、对照品和样品的平均吸收值交叉反应性: ———————— ×100% 类固醇浓度 (A450)。 2(建立标准曲线。在坐标纸上标绘出每份标准品的平均吸 类固醇 交叉反应性 收值和与其对应的浓度值(ng/mL)的点。吸收值在纵坐标上睾 酮 100% (Y轴)，浓度值(ng/mL)在横坐标上(X轴)。 脱氧睾酮 0.86% 3(从标准曲线上，使用每份样品的平均吸收值确定相应的 雄烯二酮 0.89% 睾酮浓度值(ng/mL)。 雄 酮 1.0% 4(从稀释的样品获得的值，在计算中要通过稀释因子进一 17β雌二醇 0.05% 步换算。 孕 酮 <0.05% 表雄酮 <0.05% Testosterone(ng/mL) Absorbance(450nm) 17-OH-孕酮 <0.05% 0 3.096 雌三醇 <0.05% 0.1 2.700 皮质醇 <0.05% 0.5 2.185 硫酸脱氢表雄酮(DHEA-SulpHate) <0(05% 2.0 1.709 6.0 1.105 十二、检测步骤的限制性因素 18.0 0.516 1(要得到可靠的、重要性的结果，就要完全读懂说明并 按其要求进行检测，坚持的实验室操作。 42(洗涤步骤是关键。不适当的洗涤会导致精确度不足，吸 收值读数假性升高。 3 3(对于医生来说，采用本试剂盒获得的结果必须作为用其2它诊断方法得到的信息的辅助资料来利用。 1 注册证号:国食药监械(进)字2006第3401373号 0产品标准号:YZB/USA 0641-2006 Absorbance (450 nm)生产厂商:美国BC公司 05101520 Conc. of Tes.t (ng/mL) 第2页 共2页