半仿生提取法提取、分离石榴皮中的单宁并测定其含量

半仿生提取法提取、分离石榴皮中的单宁并测定其含量 实验目的 学习并掌握石榴皮中提取、分离单宁及其含量测定的方法。 实验原理 单宁, 又名鞣酸, 单宁酸, 一般可分为缩合单宁和可水解单宁两类, 可水解单宁为葡萄糖的没食子酸酯, 可广泛用于医药、食品、皮革及印染工业, 由于它可使蛋白质絮凝沉淀, 因此大量用于啤酒及饮料的澄清。单宁在石榴皮中的含量也比较丰富，我国是石榴资源丰富的国家，我们应该充分的利用占石榴比重较大的石榴皮。半仿生提取法( 简称SBE法) 是将整体药物研究法与分子药物研究法相结合, 从生物药剂学的角度, 模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原理, 为经消化道给药中药制剂的一种新的提取。即将药料先用一定pH的酸水提取, 继以一定pH的碱水提取, 提取液分别过滤、浓缩, 制成制剂。从实验结果看, 半仿生提取是一种很好的天然产物活性成分提取方式。 实验试剂和器材 材料:石榴皮、单宁酸 试剂:pH为2.0的HCl 溶液、pH为7.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液、pH为8.3的碳酸氢钠-氢氧化钠缓冲溶液、蒸馏水、、饱和NaCO 溶液、F-D试剂(150mL水中加入钨酸钠20g, 磷钼酸4g及磷酸10mL, 回流2h, 冷却至室温, 并23 稀释至200mL)。 仪器:研钵、天枰、吸管、烧杯、水浴锅、离心机、离心管、试管、容量瓶、分光光度计 实验内容: 1、单宁的提取 准确称取准确称取5g石榴皮粉末, 分别用pH为2.0的HCl 溶液、pH为7.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液、pH为8.3的碳酸氢钠-氢氧化钠缓冲溶液各10mL, 60?水浴回流提取各1h后4500r/ min离心30min, 取清液,量体积后待测。 2、单宁曲线的绘制 单宁酸标准曲线的绘制,称取单宁酸50mg 于50mL容量瓶中, 加蒸馏水溶解并定容至刻度, 混匀。再用蒸馏水稀释10倍即为0. 1mg/ mL标准溶液。吸取单宁标准溶液0、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0和3. 5mL, 分别置于盛有6mL蒸馏水的10mL容量瓶中, 加F-D试剂0. 5mL 及饱和NaCO 溶液1mL, 加水稀释至10mL, 充分混合, 并于30min后23 在650nm处测定吸光度值。以吸取标准溶液体积为纵坐标, 吸光度为横坐标作图, 得到单宁标准曲线。 3、提取液中单宁含量的测定 吸取提取液1ml，F-D试剂0. 5mL 及饱和NaCO溶液1mL, 加水稀释至10mL，充分混合, 并于30min后在650nm23 处测定吸光度值。 4单宁含量计算 从标准曲线查得提取液中单宁的含量，便可粗略的求得每克石榴皮中的单宁的含量。 参考文献: [1] 陈国刚, 邓志祥, 江英, 张新华.葡萄梗中单宁的提取及含量测定. 1石河子大学食品学院, 新疆石河子832000; 2中储粮西安田家湾直属库, 陕西西安710043. [2] 黄绍华,严慧和,孙健.单宁的提取与纯化 .南昌大学食品科学与工程系, 江西南昌 330047. [3] 张国伟,易中周,矣辉,郭俊明.蒙自石榴皮中单宁的提取及其物性.红河学院化学系, 云南蒙自661100. [4] 陆晶晶,朱静,袁其朋.石榴皮单宁提取的研究.北京化工大学北京市生物加工过程重点实验室, 北京100029