贾第虫病的实验室诊断

贾第虫病的实验室诊断 中 国 人 兽 共 患 病 杂 志 /--/，() - IampquotJquot K’GDA ’L M’’’JquotJ quotquot amp’ quotquot) quotquot quot 文章编号: ( quot 贾第虫病的实验室诊断 谢 毅 郭兰英 宋 琳 喻方敏 李 恒 中图分类号: 文献标识码:- ( 由 贾 第 虫 quotquot )是 一 种 鞭 毛 虫， 列 文?虎 克 率。( quotquotquotamp’quot)发现于 年，作为人类一种重要的病 原 现在用于贾第 虫 镜 检 的 染 色 法 通 常 是 FGEampG’lt 染 色 〔〕 〔， 体， 贾第虫直至最近 - 年才被认识 。贾第虫目前发现存 (三原染色)或改良的抗酸染色 /〕 。三原染色既可用新鲜 在于 - 多种动物体内，虽然它的分类还存在争议，但多数学 粪便，也可用 9gt 固定的粪便，对厚涂片使用此方法比苏木 ( 者认为贾 第 虫 分 为 三 大 类。其 中 的 蓝 氏 贾 第 虫 quotquot 素更易观察，且试剂可反复使用。在固定和染色理想的标本 amp’ampquot) ( 又称十二指肠贾第虫 . ampquot- )或小肠贾第虫 中，背景是蓝绿色，虫体的细胞质和染色质呈紫红色。( . quot/-/quotampquot- )主要寄生于人类和哺乳动物的小肠， ， 可引 新鲜样本观察到的包囊呈现典型的卵(椭)圆形， 吸收不良为临床现的肠道寄生虫病—— 成熟的包一般长 起以腹痛、腹泻、 — 囊可看到有四个核， 1 lt， 未成熟的包囊有两 〔/〕 贾第虫病 ( 0quotquot-quot- )。由于在旅游者中发病率较高，又 个核;而滋养体则为梨形。 FGEampG’lt 染色后看到的滋养体呈 称旅游者腹泻。贾第虫病呈世界性分布，多见于环境卫生 典型梨状，有两个泡状核，位于轴柱的两侧，核内各有一个大 差、医疗水平低的地区。发展中国家的儿童感染此病非常普 核仁，四周有空隙，使并列的双核构成独特的脸形，而鞭毛则 遍 〔0〕 在发达国家此病也常发生于 1 岁及 /- 1 - 岁这两 ， 极少在染色的标本中出现。固定后的标本染色、镜检，可见 〔〕 个年龄段 。在发展中国家，贾第虫病占腹泻病人的 /-2 虫体外有晕轮，这主要是福尔马林固定造成细胞质收缩所 左右，比例从 32 1 02 不等 〔3〕 ;在发达国家这一比例在 02 致。 〔0， 1 42 之间 〕 。在美国，贾第虫是两种最常见的胃肠道原 贾第虫病患者的水样稀便多为滋养体阳性，而糊状或块 虫之一，感染率估计占人口的 /2 1 32 〔4〕 。美国、加拿大、 状粪便可能仅含有包囊。贾第虫的排出有间歇性，且包囊数 澳大利亚、新西兰、英国、瑞典都曾因水源污染引起贾第虫病 量的变化与临床症状无关，同时由于抗生素、灌肠剂、钡餐的 〔〕 暴发流行。我国的感染率约为 - . 2 1 /-2 ， 早期的贾 使用可造成原虫在粪便中消失。所以粪便镜检应在这些干 第虫病诊断报告出现在 55 年 月 〔5〕 。由于此病的临床症 扰因素停用 3 1 -6 后进行，推荐的检查方法是每 个病人 状类似于一般的肠炎、细菌性痢疾、消化不良，故易误诊、误 取 0 次样本，每个样本之间的间隔为 /6。这样做检测的灵 治，造成病程由急性转为慢性。因此积极开展此病的诊断， 敏度可达 5-2 ，而只取单份样本检测的灵敏度只有 3-2 1 〔0， 对其防治有着重要的意义。同时，由于贾第虫的包囊对外界 4-2 〕 。 抵抗力强，在冷水、温水中可存活 1 0 个月，在含 - . 32 氯 十二指肠活组织及十二指肠引流液的检查 在贾第虫 〔-〕 的水中可存活 / 1 06 ， 因此如何有效地对水源进行监测也 病患者的小肠活组织中可见到贾第虫的包囊和滋养体。由 于此方法的创伤性高于任何一种检测方法，所以仅用于已完 是摆在我们面前的一个课。本文仅就有关贾第虫病的实 成其它检测却仍存疑问或小肠结构需要检查的情况。十二 验室诊断方法作一介绍。 〔〕 指肠引流液检查报道的灵敏度在 -2 1 -2 之间 ; H’D 贾第虫的实验室诊断可分为形态学 检查、免疫学检测、 ( 取 等 55-) /5/ 份病人的多次粪便和十二指肠引流液进行 基因检测。 镜检，实验结果显示检测粪便的灵敏度为 402 ，而十二指肠 ( 形态学 7 8 9)检测 〔〕 引流液的灵敏度仅为 2 。十二指肠活组织检查是最灵 它是病原体检查最传统和常见的方法，也是目前贾第虫 敏的检测方法，但极少用于诊断。 病确诊的依据。检测对象主要为粪便，其次是十二指肠引流 形态学检查的优点:成本低，结果直观，可同时检测多种 液，还有十二指肠活组织。 病原体。主要缺点是: 标本的收集、 quot 处理、固定、染色要求 粪便镜检 国外多数实验室在进行粪便的形态学检测 严格。能够进行寄生虫形态学分辨的显微镜观察专家人 通常将样本分为几部分， 时， 一部分新鲜样本被用于检测滋 数有限。 养体和包囊，滋养体由于只存在于新鲜的水样标本中，且分 免疫学检测 解快，故检测滋养体，操作要迅速。标本先以 3-- : 离心 近年来国外已经建立了贾第虫病的多种免疫学检测方 -lt，取沉淀用生理盐水涂片、镜检。还有一部分样本既可 法。这些方法一般具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作 ( 先固定在聚乙烯醇 9gt， 然后染色、镜 方便、能批量生产、多份标本可同时检中， ’ABCADAE’amp’A) 测的特点。免疫学诊 检;又可放在福尔马林中固定、浓集，再查看有无贾第虫滋养 〔-， 断方法有许多，主要有直接免疫荧光法，酶免吸附法等。但 体和包囊 〕 。此外也可用生理盐水漂浮法或饱和硫酸锌 万方数据 离心漂浮法对标本进行浓集，浓集目的是提高诊断的检出 作者单位:华美生物工程公司(洛阳，4--0) 中 国 人 患 病 杂 志 ，D() ampS014I4 X6H8172 65 c6616I4I根据这些方法检测兽 共 对象不同，可分为两大类，即检测抗原和 无商品试剂盒。一项研究显示使用 ampP 检测粪便中贾 段，检测抗体。 第虫， 虫 体 的 浓 度 低 至 个 Q 2 时 仍 可 检 测 为 阳 当 〔C〕quot 检测抗原 一般检测的贾第虫包囊囊壁抗原为 quot 性 。这个研究同时还指出在有症状、怀疑为贾第虫病的 〔〕和 amp’ 。 患者中，ampP 与形态学检测、:quot 检测的符合率为 gt 。quotquot 直接免疫荧光抗体法 ) 用荧光标记贾第虫的 ( 在对水源的监测方面，由于 ampP 具有高度的敏感性和特异单克隆抗体，检测粪便中的包囊囊壁抗原。用于免疫荧光抗 性，因此很有发展前景。体检测的标本如果没有特别说明，一般采用传统的福尔马林 在目前，贾第虫的实验室诊断比较困难。形态学检查作 以沉淀浓集法， - . 离心 /01， 滴 2) 取 ( 沉淀均匀 为主要的诊断方法，正逐步被免疫学诊断所取代。免疫学诊散布于经 345261 处理的载玻片的孔中，风干后用甲醇固定。 断当前还不能完全替代传统的形态学检查，但是它对确认贾78907 :quot 等 lt) ( ( 报道说用此法检测 份粪便标本 第虫的感染非常有用，并为形态学检查提供了很好的补充， 〔〕 同时又具有更高的灵敏度。国外一些实验室在检测单上已份阳性， 份阴性) 特异性、敏感度均达到 gt 。该方法有较高的敏感性、特异性、重现性，但实验结果需用荧光显 把两种方法都列出，要求两种方法彼此独立操作;在检测费微镜观察，限制了方法的广泛使用，此外，结果判定需要有一 用上，免疫学诊断和形态学检查也基本相同。 ampP 作为检定经验的工作人员。 测诊断技术，在水源、环境、食品的监测中前景广阔。quotquot 酶免吸附法 :quot) 运用双抗体夹心法， ( 在载体 参考文献(如微孔板、上 硝酸纤维素膜等)包被贾第虫的多抗和单抗， E R7IS 3，T48801.M61 ， 4M :6I61IOU ， 72J VN480/41M72 SH/71并用配对的单抗或多抗做酶或染料标记，主要检测粪便中的 〔 E 01549M061I W0MS quotquot amp’ampquot X〕 X 1549M 0I， : Dlt， ( ) ltF G DF E贾第虫包囊囊壁抗原。使用硝酸纤维素膜作载体能在一个 〔 E A4U48 J quotquot 7I 71 68.710I/ A 〕E 1:3S6/NI61 Pamp，检测装置中同时检测几种病原体，同时所需的结果判读时间 P4U162YI61 X， ( J :U/Z48U X 4YI) quotquot 586/ /6249H24I M6 Y0短。 747I4， 〔A〕 ’72201.568YJ J F， G F J ampK 01M E C 用于酶免吸附法检测的粪便标本可以是新鲜或冻融的， 〔 C E 78MS01. AX J quotquotquot 7I 7 Y0I47I4 A 〕E 01:3S6/NI61 Pamp，也可以是经福尔马林、A 或 quot 固定的，而经浓集或 B P4U162YI61 X， ( :U/Z48U X 4YIJ )quotquot 586/ /6249H24I M6 Y0固定的标本不适易使用 :quot 法检测。 747I4， 〔A〕 ’72201.568YJ J ， G Clt J ampK 01M E 有文献报道使用酶免法检测贾第虫的阳性率高于形态 F E 27117.71 J quotquot 07.16I0I，92010972 96H8I4 71Y 4N0Y4/0626.U 〔lt〕学检测 Cgt 个 酶 ; 别 报 道， 免 法 的 灵 敏 度 和 特 异 性 达 〔X〕 84_04W N0Y4/062 1549M， E : ， () G J 〔D〕Dgt 和 gt ;在另一个研究中，使用 amp6268 amp 试剂的 〔 E : E (4Y) A4U48 J 〔〕I27/ J quotquotquot 01 Y4_426N01. 96H1M804I A〕 1 灵敏度和特异性均达 gt ;还有报道，酶免法的灵敏度 TH/71 787I0M09 0I47I4I，B: J C，quotquotquot 2I4_048 I904194在 E Fgt G gt ，特异性在 lt E Dgt G gt 〔〕 。 HZ2J ，/IM48Y7/，3S4 R4MS48271YI， C ， G E quotHI71 J quot ( ) J 等报道 KLquot3 07.16IM09I 公司新 E ‘H011 P’ J 3S4 4N0Y4/0626.U 65 X〕 quot6HMS A4Y， MS4 10M4Y 01M4IM0172 N787IM04I 65 0/N68M7194 01 〔 quotM7M4I E KH22， : lt， G C J面世的 3807.4 N787I0M4 N7142 酶免试剂盒在一个 O0M 能同时检 lt E 7NNHI ，:H1Y.841 P X8， 4M XH8714O ， 72J 1M4IM0172 N787I0M0I/测贾第虫、隐孢子虫、溶组织阿米巴三种病原体，并可单人份 01 MS4 10M4Y quotM7M4I: 〔X〕 / X 386N HNY7M4 61 7 961M01H01. N86Z24/ E进行检测，整个过程仅需 /01。检测了 C 份标本，其中 A4Y TU.， : F， ()lt G ltC J 〔〕测定贾第虫的灵敏度和特异性均为 gt ; ( 78907 ) D E 倪语星，洪秀华， 〔 姜昌斌 E 现代病原学检验与临床实践 A〕 上 E在另一份报告中也显示 3807.4 N787I0M4 N7142 酶免试剂盒的 海:上海科学技术文献出版社， .