乙型肝炎病毒表面抗原试剂盒性能验证方案

                        乙型肝炎病毒面抗原试剂盒性能验证 人：                  时间 ： 批准人：                    时间： 宿迁市中医院检验科 目 录 一、 系统信息 二、 验证目的 三、 检测原理 四、 验证过程 五、 验证结果 六、 验证结论 七、 参考文献 八、 附件 一、系统信息 ● 项目名称：乙型肝炎病毒表面抗原（酶联免疫法） ● 设备名称及型号：AutoBio phomo酶标仪/Anthos fluido洗扳机  ● 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）  批号：201610402    有效期：20171024  厂商：上海科华生物股份有限公司  ● 质控品名称：康彻思坦HBsAg质控品 0.2IU/ml              批号：201611007    有效期：20181121  厂商：北京康彻思坦生物技术有限公司        二、验证目的 验证HBsAg检测性能是否满足临床要求。 三、检测原理 采用抗－HBs包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗－HBs-HRP，当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗－HBs结合并与抗－HBs-HRP结合形成抗－HBs-HBsAg-抗－HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。 四、验证过程 4.1 批内精密度 选择康彻思坦HBsAg 0.2IU/ml浓度质控品，在一批检测内，重复检测10次（孔），计算所得S/CO值的均值和SD，计算批内CV%。 判断结论：批内精密度变异CV%应≤15%。 4.2 检测结果符合率 4.2.1 按要求选择样品进行验证 选取至少40例样本，结果为阴性和阳性的样品各20例，按常规样本检测程序进行检测，结果按下列公式进行计算，得到阴/阳结果符合率： 敏感性：被测试剂盒测定真阳性数/(真阳性数+假阴性数)*100% 特异性：被测试剂盒测定真阴性数/（真阴性数+假阳性数）*100% 符合率：被测试剂盒测定（真阳性数+真阴性数）/（真阳性数+假阴性数+真阴性数+假阳性数）*100% 4.2.2 结果判断：敏感性=100%；特异性=100%；符合率=100% 4.3 检出限验证 4.3.1 选取一个已知浓度的定值质控，按原倍、1:1 、1:2 、1:3、1：4、1：5……等稀释倍数进行稀释，将稀释后的系列样本按常规样本的检测程序进行检测，寻求S/CO最接近1但大于1的稀释度。如果稀释样本S/CO结果大于1，则继续增加稀释倍数做检测。将S/CO结果接近1的稀释度的样本作20次重复测试，如果95%以上的结果都大于1，则可将该稀释度对应样本的浓度当做检出限浓度。 4.3.2、 根据上述系列样本中结果为阳性时最大稀释倍数计算其检出限，具体公式如下： 检出限=原始样本浓度/结果为阳性时的最大稀释倍数 五、验证结果 验证指标 验证结果 判断标准/ 厂商声明 判定结果 （Y/N） 精密度(CV) 11.13% ≤15% Y 敏感性 100% 100% Y 特异性 100% 100% Y 符合率 100% 100% Y 检出限 0.1IU/ml 0.1IU/ml Y 六、 验证结论 本室HBsAg检测项目精密度、敏感性、特异性、符合率、检出限均可接受，符合临床需求。 七、参考文献 CNAS-CL39：《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》。 八、附件 1、HBsAg定性项目性能验证记录 2、实验原始数据 HBsAg定性项目性能验证记录 检验科免疫组-感染检测依据CNAS-CL39：《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》对医学实验室检测系统性能评价的相关要求，对HBsAg定性项目的性能评价主要从以下几个方面进行：精密度、敏感性、特异性、符合率、检出限等。具体结果如下： 1 精密度 精密度，以康彻思坦0.2IU/ml质控品进行评价，在一个批次内连续检测10次。计算其均值、标准差及变异系数，以不超过15%为判断依据。 精密度验证试验数据 项目名称 HBsAg 检测设备/编号 AutoBio phomo酶标仪/Anthos fluido洗扳机 检测试剂/批号 科华试剂/201610402 样品/批号 康彻思坦0.2IU/ml质控品/201611007 检测方法 酶联免疫吸附法 样品：康彻思坦0.2IU/ml质控品 测定次数 测定结果（S/CO值） 测定次数 测定结果（S/CO值） 1 2.140 6 2.320 2 2.050 7 2.010 3 2.040 8       2.040 4 2.020 9 1.980 5 2.040 10 1.940 均值：2.058            SD：0.105              CV：5.10％ 判断标准：CV≤15% 重复性精密度验证结果：  ■满足要求              □不满足要求 结论：本室所检测项目HBsAg重复性精密度均在允许范围内，可接受。 2 敏感性 敏感性以用雅培化学发光确认的20份阳性样品进行评价，记录其结果，以阳性结果的百分比作为评价标准。 样品 编号 雅培化学发光测定结果（IU/ml） 科华测定结果 （S/CO值） 样品 编号 雅培化学发光测定结果（IU/ml） 科华测定结果 （S/CO值） 1 60.93 25.066 11 7567.62 25.554 2 173.09 25.446 12 637.51 24.826 3 28579.4 20.678 13 11.46 20.818 4 2902.25 23.628 14 93964 14.488 5 8611.15 24.033 15 3537.88 28.240 6 412.66 25.992 16 11011.59 25.149 7 8403.34 23.107 17 49.11 25.612 8 2399.85 26.074 18 2370.75 26.917 9 19148.74 22.893 19 3180.94 26.868 10 2466.6 25.843 20 2262.11 28.760 敏感性：被测试剂盒测定真阳性数/(真阳性数+假阴性数)*100%=100% 敏感性验证结果：        ■满足要求              □不满足要求 3 特异性 特异性以用雅培化学发光确认的20份阴性样品进行评价，记录其结果，以阴性结果的百分比作为评价标准。 样品编号 雅培化学发光测定结果（IU/ml） 科华测定结果 （S/CO值） 样品编号 雅培化学发光测定结果（IU/ml） 科华测定结果 （S/CO值） 1 0.000 0.091 11 0.000 0.107 2 0.000 0.124 12 0.000 0.256 3 0.000 0.116 13 0.000 0.058 4 0.000 0.107 14 0.000 0.058 5 0.000 0.017 15 0.000 0.289 6 0.000 0.008 16 0.000 0.107 7 0.000 0.066 17 0.000 0.000 8 0.000 0.025 18 0.000 0.149 9 0.000 0.165 19 0.01 0.000 10 0.000 0.157 20 0.01 0.017 特异性：被测试剂盒测定真阴性数/（真阴性数+假阳性数）*100%=100% 特异性验证结果：      ■满足要求              □不满足要求 4符合率     符合率：被测试剂盒测定（真阳性数+真阴性数）/（真阳性数+假阴性数+真阴性数+假阳性数）*100%=100% 符合率验证结果：      ■满足要求              □不满足要求 5检出限     材料：康彻思坦0.2IU/ml HBsAg质控品。 结果：拟以1:1作为目标稀释度，以此稀释度样本做20次重复性检测，所得S/CO值均大于1。根据稀释度计算其浓度为0.1IU/ml，故将此浓度作为检出限浓度。 数据： 稀释比例 S/CO 平均 结果判断 原 倍 2.140 2.050 2.040 2.08 Y 1:1 1.240 1.160 1.050 1.15 Y 1:2 0.71 0.69 0.64 0.68 Y 1:1稀释度重复20次S/COV结果如下： 编号 S/COV值 编号 S/COV值 1 1.240 11 1.200 2 1.160 12 1.090 3 1.050 13 1.280 4 1.100 14 1.360 5 1.010 15 1.070 6 1.030 16 1.430 7 1.160 17 1.150 8 1.190 18 1.040 9 1.040 19 1.090 10 1.020 20 1.080