医学毕业论文宁夏回族hlaa，b，drb1基因座遗传多态性和单倍型分析

医学毕业宁夏回族hlaa，b，drb1基因座遗传多态性和单倍型分析 X X 大学 毕业论文 宁夏回族HLAA，B，DRB1基因座遗传多态性和单倍型分 析 姓 名:__________ 2014年6月25日 宁夏回族，B，DRB1基因座遗传多态性和单倍型分析 作者:沈春梅 朱波峰 刘孟黎 张华东 李生斌 【摘要】 目的: 研究宁夏回族自治区地区回族人群，B，DRB1基因座的等位基因及其组成的单倍型频率分布特征. : 采集宁夏回族122名无关健康个体静脉血，应用聚合酶链反应序列特异性引物方法对其，B和DRB1 基因座进行基因分型. 直接计数法统计基因频率，采用最大数学预期值算法计算HLA单体型频率. 结果: 122 名宁夏回族个体的，B，DRB1基因座分别检出14，29，13个等位基因. 高频等位基因分别为; ;;，;;; ， ;;; 高频单倍型分别为; ; ; ; ; ; ; ; 结论: 宁夏回族自治区回族人群HLA基因座的等位基因和单倍型具有较高的遗传多态性. 在该民族具有极强的连锁不平衡. 【关键词】 宁夏回族;HLA抗原;单倍型频率;遗传多态性 0引言 人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)系统位于6p21.3，是目前所知人类基因组中多态性最高、最为复杂的免疫遗传系统, 其研究已广泛应用于器官移植配型以及疾病相关性研究等领域. 由于HLA基因座具有高度的遗传多态性, 在不同种族、民族、不同地域的人群中, 其等位基因和单倍型的频率存在差异, 因此对于民族起源、进化、迁徙、融合等人类群体遗传学研究具有重要意义, 并且在法医学个体识别中也发挥着重要的作用,1-4,. 我们采用聚合酶链反应序列特异性引物方法(polymerase chain reaction sequence specific primers, 对宁夏回族自治区回族人群，B和DRB1基因座进行分析研究. 1和方法 1.1材料宁夏回族自治区122名健康、无血缘关系的回族个体, 其个体3代以上无与其他民族个体通婚史. 采集其外周血各2 mL, EDTA抗凝，B，DRB1 分型试剂(美国公司，美国GT公司)型PCR仪. 1.2方法 1.2.1基因组DNA制备采用盐析法提取基因组DNA, DNA浓度为50,80 ng/L, 纯度为1.6,1.8. ，B和DRB1基因座基因分型按，B，DRB1 分型试剂说明进行分型. 对模棱两可的结果采用第二家试剂进行分型，仍不出结果的进行测序分型. 遵循WHO下属HLA系统命名委员会规定,按标准HLA命名法则低分辨判读等位基因, 分析分别得出，B和DRB1基因座基因型,并按HLA命名委员会公布的HLA 等位基因与其表型对应关系将等位基因型转化为相应的表现型. 平衡检验采用χ2方法做吻合度检验,通过Arlequin 3.11软件计算χ2和P值, 检验水准设为0.05. 统计学处理:应用直接计数法统计，B，DRB1基因座基因频率. 采用最大数学预期值算法(expectation maximization, EM), 通过Arlequin 3.11软件计算HLA单体型频率，以频率大于1/1.5N (N为量)为观察到有意义单倍型,5,. 依文献,6,计算两基因座连锁不平衡参数，依文献,7,报道有意义两基因座单倍型正连锁不平衡参数. 不同民族基因座数据源自文献,3-4,8-11,，用Nei,12,方法以基因座基因频率数据计算不同民族间的遗传距离，将遗传距离导入Mega3.1软件, 根据邻接法构建 系统发生树. 2结果 ，B和DRB1等位基因频率分布在122名回族个体中基因座中共检出14个等位基因,基因频率分布在0.004,0.299之间(表1), 其中高频等位基因分别为，A*11 (GF=0.197)，A*24 (GF=0.176); 基因座共检出29个等位基因, 基因频率分布在0.004,0.111之间, 其中高频等位基因分别为，B*46( GF=0.0984)，B*13 (GF=0.082); 基因座共检出13个等位基因, 基因频率在0.0164,0.1393之间,其中高频等位基因分别为 (GF=0.1393)，DRB1*09 (GF=0.1311)，DRB1*07 (GF=0.1066). 平衡检验通过Arlequin 3.11软件进行，B和DRB1的吻和度检验, 其相应P值分别为0.9073，0.0800和0.3742. 表明本研究的回族群体的基因分布符合berg平衡定律. 表1宁夏回族，B，DRB1基因座等位基因频率 ，B，DRB1单倍型频率及连锁不平衡参数可观察到163种HLA 单倍型, 占单倍型理论总数的40.15%(163/406); 可观察到206种HLA 单倍型, 占单倍型理论总数的54.64%(206/377);可观察到588种 单倍型, 占单倍型理论总数的11.14%(588/5278). 观察到50，56，49种，，有意义的单倍型，表2为部分高频单倍型(HF?1.5%). 有39条单倍型和52条 单倍型正连锁不平衡, 其中 具有极强的连锁不平衡(表3). 2.4聚类分析从系统发生树(图1)可见，回族与汉族的遗传距离最近，这两个民族先聚为一类后，再和蒙古族、维吾尔族、藏族、鄂温克族等少数民族聚为一大类.表2宁夏回族HLA常见单倍型及其频率(HF?1.5%)表3宁夏回族常见HLA单倍型及其连锁不平衡参数 3讨论 我们运用技术方法对宁夏回族人群的，B，DRB1基因多态性进行分析，B，DRB1基因座分别检出14，29，13个等位基因基因座个体识别力为0.948, 多态信息含量为0.81,非父排除率为0.652; 基因座个体识别力为0.985, 多态信息含量为0.94, 非父排除率 为0.917; 基因座个体识别力为0.975, 多态信息含量为0.89, 非父排除率为0.816. 研究结果显示该民族的HLA基因座具有较高的遗传多态性. 以江西、广东、安徽、湖北汉族为南方汉族的代表,13-16,，以山东、甘肃、新疆、河南汉族为北方汉族的代表,17-18,，比较宁夏回族与不同地区汉族HLA基因座高频基因及基因频率的差异，其中基因座的高频基因及基因频率相差不大;基因座中高频等位基因与不同地区汉族均有显著性差异; 基因座中DRB1*07 (GF=0.1066)与南方汉族差异较大. 我们共观察到50种有意义的单倍型, 高频单倍型依次为 ，， ;观察到56种有意义单倍型, 高频单倍型依次为， ， ; 观察到49种DRB1有意义单倍型,高频单倍型依次为， ， (HF=2.38%). 但因缺乏其他民族HLA基因座单倍型的资料，尚无法运用单倍型进行民族起源与进化的研究. 连锁不平衡是HLA系统的遗传特征之一, HLA在不同种族中分布的差异，除表现在基因频率方面外，还表现在具有显著连锁不平衡的单倍型方面. 在本研究中(HF=0.82%, RLD=99.99%)， (HF=2.46%, RLD=99.99%)(HF=1.72%, RLD=99.99%), (HF=0.80%, RLD=99.99%)在宁夏回族具有极强的连锁不平衡. 其中，与南方汉族(江西汉族、安徽汉族),13-14,、北方汉族(山东汉族),17,、北美高加索人、北美黑人,19,相比均具有显著性差异. 我们用不同民族的基因座等位基因频率数据构建系统发生树，显示回族与汉族具有较近的遗传关系，我们认为这与历史上回族的形成有关. 我们的结果从分子生物学的角度印证了回族在形成独立民族的过程中与汉族发生大量的交融. 我们的结果表明宁夏回族人群HLA基因座的等位基因和单体型 具有较高的遗传多态性,而且具有自身特点. 研究回族人群HLA单倍型资料为了 解该民族的遗传背景、进化、起源提供帮助, 同时也丰富了中华民族的基因信息 资源. 鉴于HLA单倍型遗传的特点，而目前国内少数民族HLA研究缺乏单倍型 资料的现状，研究国内少数民族HLA基因座及单倍型多态性将是我们今后工作 的重点. 【参考文献】 ,1, Shankarkumar U, Sridharan B, Pitchappan RM. 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