眼针疗法对急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型血清中TNF

眼针疗法对急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型血清中TNF 第五届全国免疫学术会议汇编组》中也有记载: “人参出上党，辽东者最佳，……高丽、新罗又次之。”,,,,,年清?陆垣的《人参谱》中称: „„今日参价十倍黄金，一百五六十倍自金(银)……乃世人非辽参不服。”?可见在历史上辽参是上品人参，声誉之高远超过吉林人参和朝鲜的高丽参。本实验采用科学的方法更有力的证明了辽宁人参对淋巴细胞增殖能力的影响相似，对，,一,的影响高于吉林和朝鲜人参。 眼针疗法对急性局灶性脑缺血再灌注大鼠模型血清中 ,,,—,含量影响 任平关洪全马贤德 (辽宁中医药大学，辽宁沈阳,,,,,,) 脑血管病是指脑血管破裂出血或血栓形成，引起的以脑部出血性或缺血性损伤症状为主要临床现的一组疾病，又称脑血管意外或脑卒中，中医成为脑中风。该病常见于中年以上人群的急性发作，严重者可发生意识障碍和肢体瘫痪，是目前造成人类死亡和残疾的主要疾病。近年来眼针在治疗缺血性脑血管病收到了一定的疗效，但机理尚不明确，本文将试从,,,,,角度探讨眼针治疗缺血性脑病的机制。 研究表明炎症反应是脑缺血再灌注损伤的重要原因…。,,,,,是重要的炎症反应因子之一叫，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，有多种生物学作用，在缺血性脑病中可作用于血管内皮细胞，损伤内皮细胞或导致血管功能紊乱，使血管损伤和血栓形成，造成组织或器官局部血流阻断而发生出血、缺氧坏死。,,,—,在缺血性脑损伤中表达增强口,。许多学者通过实验证实应用,,,,,拮抗剂能够有效的抑制其对脑组织的损伤作用，已达到治疗急性缺血性脑血管病的目的。,实验和方法,(,实验动物及分组 采用,,,级雄性,,,,,,大鼠,,只，体重,,,?,,,，由北京维通利华实验动物公司提供(实验开始前一周购进，在,,,级动物室中适应性饲养一周，自由饮水饮食。随机分为三组:假手术组(,,只)、缺血再灌注模型组(,,只)、眼针治疗组(,,只)。各组按脑缺血再灌后,,，,,,，,,,三个时间点再分为三组，每组,,只。,,,—,酶联免疫吸附法检测试剂盒由美国,,,公司提供。,(,实验动物模型制备 参照,,,,,法，采用改良的血管内栓线技术制备大鼠急性局灶性脑缺血再灌注模型?。在室温(,,?)条件下，,,,水合氯醛(,,,,,,,,,)腹腔麻醉，消毒颈部皮肤，沿颈正中线做一长度约,;,的切口，仔细钝性分离暴露出右侧颈总动(,;,)、右颈外动脉(,,,)和右颈内动脉(，,,)。在,,,远端距,,,分叉,,,处结扎,,,。再用电凝器在结扎点远心端电凝,,,，用眼科手术剪在结扎点和电凝点之间剪断,,,。然后将,,,向鼠尾方向牵拉，使,,,和，,,成,条直线。动脉夹夹闭,,,近心端和，,,远心端，在,,,结扎点前端剪一“,”形小口，缓慢将栓塞线经,,,插入，,,，打开，,,远心端的动脉夹。根据栓塞线上的标记，判断栓塞线插入的深度。当,,,分叉进入栓塞线,(,;,处标记，在“,”形切口近心端结扎,,,，使栓塞线和,,,固定在一起。剪断各结扎点上的手术线，消毒并逐层缝合切口，将栓塞线多余的部分缝合在创口之间，暴露于皮外。栓塞,,后，缓慢拨出尼龙线进行再灌注。,,,动物模型筛选方法 ,, 中国免疫学会中医药免疫分会 参考,,,,,,,,法?,对每组动物进行评分。据其症状严重程度分,级，共,,分。具体评分方法如下:?,级无神经系统功能损伤记,分;?,级提起大鼠尾部，大鼠离地一尺左右，左侧前肢内旋内收记,分;?,级置大鼠于地面观察其行走，大鼠向左侧旋转记,分:?,级置大鼠于地面观察其行走，大鼠向左侧倾倒记,分;?,级大鼠不能自发行走记,分。神经功能障 碍评分为,、,、,分的模型大鼠方可纳入实验组，其余弃掉。，,眼针取穴 根据人体眼针穴位分区方法，取双眼肝、肾、上焦、下焦四区进行针刺。针刺手法:采用眼眶外平刺，首先用酒精消毒，用,(,寸,,号针灸针与皮肤呈,,度角缓慢进针至皮下。针刺时间:对眼针治疗组大鼠产生再灌注,,,,,,后给予眼针治疗。,(,标本采集 实验结束后，各组大鼠均采取腹主动脉采血法进行血清标本采集，无菌采集腹主动脉血液,,,，放于促凝管中，室温放置,,，低温离心机,,,,转,分，离心,,分钟，用移液器吸取上清，放于,,管中，一,,?冻存，待用。,(,指标检测 采用酶联免疫吸附法(,,，,,法)检测血清中,,,—,的含量。,，,统计学方法 数据以均数?差(,?,)表示，采用,,,,，,(,统计软件的单因素方差分析进行统计处理。,结果 结果见表,。观察,组结果表明，大鼠再灌注,小时后，血清,,卜,含量升高达到峰值，至,,小时、,,小时,,,,,含量有所下降但仍维持在较高水平，将,组与,组、,组进行比较，均有统计学意义(,,,(,,);观察,组结果表明，大鼠再灌注,小时、,,小时、,,小时后，血清,,,—,含量均明显升高，将,组与,组进行比较，有统计学意义(,((,(,,)，将,组与,组进行比较，结果表明再灌注,小时、,,小时、,,小时后大鼠血清,,,,,含量显著降低，表明眼针治疗能够有效拮抗,,,,,的生成，进而减轻炎症反应程度和脑组织损伤程度。 表,各组大鼠血清中,,,,,含量(,,,,,) 注:缺血再灌注模型组与眼针治疗组、假手术组比较„,,,(,,， 眼针治疗组与假手术组比较。,,,(,,(,讨论 当机体发生脑缺血再灌注后，能够引起局部炎症反应，从而刺激,,,,,大量分泌。,,,,,通过进一步诱发和促进炎症反应、细胞毒性、凝血及细胞凋亡等加剧局部脑组织损伤。,,卜,作为重要的炎症反应因子，与脑损伤程度成正相关，其过度的表达能够加重脑损伤的程度。,,,,等,,,,年发现感染相关脑缺血的,,,—,及其可溶性受体浓度提高，而,,,,,可以促进血管细胞黏附分子(,,,, ,,)的功能，抑制血栓调节索，并且减少内皮细胞产生纤溶酶原激活抑制物，可以认为,,,,,是一种炎症诱发血栓形成过程中的重要中介物质?】。中医理论认为多有体虚，脏腑功能减退，气血运行不畅，瘀血阻滞所致。眼针疗法具有开窍醒脑、活血化瘀的作用。 本实验结果表明:大鼠脑缺血后，,小时到,,小时时间段内，血清中,,,,,含量维持在较高水平， ,, 第五届全国免疫学术会议论文汇编但,,小时以前增加速度更快。眼针治疗组,,,,模型大鼠血清中,,,—,含量明显低于缺血再灌注组，表明眼针治疗可以降低脑缺血再灌注损伤后,,,,,含量，减少由,,,—,引起的炎症反应、组织损伤及凝血等现象的发生。起到保护脑组织的作用。 麻杏石甘汤对,型流感病毒感染小鼠的免疫保护作用 李玲„，卢芳国,(，熊兴耀,，伍参荣„何迎春,，朱应武,，张薇,张波, (,(湖南中医药大学，湖南长沙,,,,,,; ,(湖南农业大学，湖南长沙，,, ,,,,) 流感病毒(,,,,,,,,, ,,,,,)有,(甲)、,(乙)、,(丙)三型，,型流感病毒是人、禽、猪、马等多种动物流行性感冒(流感)的主要病原体。流感属中医学时行感冒范畴，主要病因为外感风热毒邪，内袭于肺，基本病机为痰热壅肺、肺气失宣。治疗当紧扣热毒、气郁、痰浊这三个基本环节。麻杏石甘汤来自《伤寒论》，是辛凉解表剂的代表方，也是治疗感冒，支气管炎，大叶性肺炎等呼吸道感染的良方,?。前期研究结果表明:该方体外能通过直接杀伤 病毒、干预病毒吸附、抑制病毒增殖、保护宿主细胞、抑制宿主细胞凋亡等而发挥抗流感病毒作用幢喇。为探讨麻杏石甘汤体内抗流感病毒作用及其机理，我们在前期研究基础上检测了该方对流感病毒感染小鼠的免疫保护作用，本文对其结果进行了分析报告。,材料与方法,(,实验材料,(,(,药物麻杏石甘汤组方及其煎剂的制备方法参考国家中医药管理局统一组织编审的普通高等教育中医药类规划教材《:方剂学》。药材购自湖南中医药大学中医专家门诊部，煎剂浓缩至含,,生药,,,的药液。利巴韦林片由江西江仁药业有限公司生产，批号:,,,,,,,，规格:每片,(,,。抗病毒颗粒由四川光大制药有限公司生产，批号:,,,,,,,,,，规格:每袋,,,。,(,(,病毒株 ,型流感病毒小鼠肺适应株(,,,,,,,,,)由湖南师范大学病毒研究室陈则教授惠赠。经，, ,〕龄鸡胚尿囊腔接种培养传代，微量血凝试验滴定病毒效价，血凝效价,:,,,以上者可供试验用。正式试验前测定小鼠病毒半数致死量(,风。)驯，正式试验用,,个单位的,，,(,, ,,?)的病毒液。,(,(,动物,，?,,，,周,,,,,;,，鼠,,只，体重,,,,,，雌雄各半，由湖南中医药大学实验动物中心代购。,(,(,实验仪器超净工作台，微量加样器，麻醉缸，电子天平，,,型实验动物洁净饲养柜，精密轮转切片机(,,,,,,，德国,,，,,)，电热恒温干燥箱(上海新苗医疗器械,,,,,,,,型)，光学扫描显微镜，,,,,;;,,,,,,摄像头(,,，,,)，图像分析软件(,,,,; ,,,,,;,, ,(,)。,(,(,试剂免疫组化小鼠，,,,、,,,(,多克隆抗体(一抗)、,,,,,,抗试剂盒，,,,显色试剂盒，苏木素、多聚赖氨酸(武汉博士德生物工程有限公司)、,,,缓冲液、蒸馏水、中性树胶。,(,方法,(,(,制备模型实验动物适应性饲养,”,天后称重，除正常对照组动物外，其余动物均制备成感染。，基金项目,湖南省自然科学基金重点项目(项目批准号:,,,,,,,,):湖南省科技计划项目(,,,,,,,,,,) ,作者简介,李玲(,,,,?)，女，湖南望城人，硕士研究生，主要从事中医药抗感染性疾病的免疫学机理研究。 ，通讯作者,木卢芳国(,,,,,)，女，湖南浏阳人，教授，硕士生导师，从事中医药抗感染性疾病的免疫学机理研究，,,,,,,,,,,,,,,:,—,,,,(,螫～?如,,女,:蘸～,墨】;超～～～。