关节内注射川芎嗪对兔膝关节软骨退变的影响

关节内注射川芎嗪对兔膝关节软骨退变的影响 关节内注射川芎嗪对兔膝关节软骨退变的影响 【关键词】 关节腔注药 摘要: 目的 观察川芎嗪关节腔内注射对骨关节炎过程中软骨退变的保护作用，探讨川芎嗪关节腔注射治疗骨关节炎的应用前景。方法 健康成熟新西兰大白兔26只，设立 正常组、模型组、对照组和实验组。模型组、对照组及实验组建立骨关节炎模型。对照组与实验组分别关节腔注射地塞米松0.3mL和川芎嗪0.3mL。每周一次。在模型建立6周和9周时各组分别处死一半动物，去除关节炎模型，取材进行大体标本 病理学观察，并经光镜和透射电镜观察膝关节软骨的病理变化。结果 在6和9周 时，实验组的大体标本软骨损伤分级明显优于其他3组;Mankin软骨组织学评分 与上述两组相比，有非常显着性差异(P0.01);电镜超微结构观察其病理改变明显轻于对照组和模型组。对照组大体标本软骨损伤分级与模型组基本相同;Mankin 软 骨组织学评分与模型组比较无显着性差异(P0.05);电镜超微结构观察对照组与模型组在细胞形态、细胞内细胞器改变等方面相似。结论 关节腔内注射川芎嗪能减轻 兔膝关节炎模型的关节软骨退变程度，并可促进软骨的自身修复;激素关节腔内注 射对损伤软骨的修复作用不明显。 关键词: 骨关节炎;川芎嗪;关节腔注药 The effect of intraarticular ligustrazine injection on degenerative cartilage of the rabbits knee ABSTRACT: Objective To observe the effects of ligustrazine intraarticular injection on cartilage degeneration in OA. To estimate and discuss the vistas of clinical application with ligustrazine intraarticular injection. Methods 26 New Zealand white rabbits were randomly divided into 4 groups, 2 rabbits in normal group, 8 rabbits in model, control and experimental group, respectively. OA animal model was established in rabbits by the way of fixing right posterior knee joint with plaster cast in strecthing state in model, control and experimental group. 0.3mL ligustrazine intraarticular injection was carried out once a week in experimental group. 0.3mL dexamethasone in the same way was made in control group. At 6 week and 9 weeks later, optic and electron microscopic examinations were conducted to observe the pathological changes of articular cartilage of the knee of these animals. Results There was a significant difference in Mankin scale between experimental group and 3 other groups(P0.01). The articular cartilage changes of ultrastructure with the transmission electron microscope observation was better than 3 other groups. There was no significant difference in Mankin scale between control group and model group(P0.05), and between these 2 groups the electro microscopic observation was similar. Conclusion Intraarticular injection of ligustrazine can alleviate degeneration and promote selfreparation of articular cartilage. Method of intraarticular injection of cortisocteroid has no reparation effect on OA cartilage degeneration. KEY WORDS: osteoarthritis; ligustrazine; intraarticular injection 骨性关节炎(osteoarthritis, OA)是一种严重影响患者生活质量和工作的常见病、多发病，系关节软骨的退变和继发性骨质增生所致的 一种慢性骨关节病。膝关节OA发病率最高。由于其病因病理尚不完全清楚，因 此，OA治疗成为临床治疗的难题之一。近年来，陆续有采用中药关节腔注射治疗 膝骨关节炎的报道，而许多基础研究也表明川芎嗪有很好的防治关节软骨退变的作 用，有望成为治疗骨关节炎的有效方法之一。 1 材料与方法 1.1 材料 实验动物: 健康成熟新西兰大白兔26只，体质量2.5-3.0kg，雌雄不限，由西安交通大学实验动物中心提供。实验仪器: 日本日立H600透射式电子显微镜，LKBV型超薄切片机，奥林巴斯光学显微镜。 1.2 方法 26只动物随机分为4组，正常组2只动物(观察双侧后肢正常关节软骨)，其余3组为模型组、实验组及对照组，每组各8只动物。采用膝关节制动建立模型的方法[1]建立骨关节炎模型。将3组动物右膝关节用长腿管型石膏固定于完全伸直位，关节制动。正常组动物不予任何处理，正常喂养，观察软骨正常形态。模型组仅行关节固定，不作其他处理，评价造模方法，并与实验组、对照组比较。实验组和对照组所固定的膝关节前部石膏开窗作为关节腔注药部位。骨关节炎模型建立后，实验组关节腔注射川芎嗪0.3mL，每周一次;对照组关节腔注射地塞米松0.3mL，每周一次。在6周时，分别取各组半数动物，采用空气栓塞法处死，打开关节腔进行大体标本观察，去股骨内、外髁全层软骨进行光镜和透射电镜观察。9周时，分别处死各组剩余的半数动物，以同样的方法进行处理观察。 大体标本观察: 按软骨损伤分级法将软骨退变程度分为: 0级正常;?级关节软骨变为黄白色，光泽差，表面仍较平滑;?级在?级的基 础上出现溃疡改变，溃疡未及全层;?级软骨全层破坏，软骨下骨暴露。 将取出的股骨髁软骨标本行常规固定，脱钙，石蜡包埋，切片，HE染色，在光学显微镜(OM)下观察。依据改良Mankin法中的结构、细胞以及潮线的完整性进行OA评分。 电镜(EM)观察: 软骨组织样品取出后，固定48h，脱钙2周，乙醇梯度脱水，乙醇醋酸双氧铀块染2h或过夜;环氧树脂Epon812浸透、包埋，聚合后作半超薄切片(1-2μm)，美兰染色后光学显微镜下定位，超薄切片(50-70nm)，醋酸铀、柠檬酸铅染色后，透射式电子显微镜下进行超微结构观察并拍照。 1.3 统计学处理 实验数据以均数?差(?s)表示，两组间比较用t检验，以P0.05为差异有显着性。 2 结果 2.1 大体标本观察 4组动物膝关节腔均无感染。各组软骨组织损伤分级见表1。 表1 各组软骨组织损伤分级(略) Table 1 The grades of cartilage tissue injury in each group 2.2 普通光学显微镜观察 正常组: 软骨表面光滑，软骨细胞排列规则，层次清楚，潮线完整;基质染色均匀(图1a)。模型组: 软骨表面裂隙明显，局部有缺损，软骨细胞排列紊乱，软骨细胞减少，并见灶性溶解、坏死;潮线多数消失，血管自软骨下骨长入软骨钙化层。软骨厚度变薄，基质异染性增强(图1b)。实验组: 软骨表面局部有滑膜被覆，纤维组织轻度增生，软骨细胞增生、肥大，排列稍紊乱，潮线模糊，有毛细血管增生，基质异染性不明显(图1c)。对照组: 软骨表面粗糙不平，有裂隙，局部有缺损，软骨细胞排列紊乱，软骨厚度变薄，潮线多数消失，基质有异染性(图1d)。各组动物软骨组织Mankin评分见表2。 表2 各组动物软骨组织Mankin评分(略) Table 2 The Mankin grades of cartilage tissue in each group 2.3 透射电镜观察 正常组: 软骨细胞基本正常，细胞核略圆核内染色质分布均匀;细胞内可见到大量的粗面内质网，线粒体细长，游离核糖体、高尔基体及糖原颗粒可见到;细胞表面有一些短小的绒毛样突起伸向细胞周围的陷窝，其周围的基质中含有许多纤细的胶原纤维(图2a)。模型组: 大部分软骨细胞明显肿胀，细胞表面的突起减少;细胞核形状不规则，核内染色质边集，电子密度增加;细胞质内多数细胞器溶解、消失，仅存的少量线粒体明显肿胀，内质网扩张成池样;细胞周围的胶原纤维减少，排列紊乱(图2b)。实验组: 软骨细胞大部分正常，细胞呈椭圆形或梭形，细胞核内异染色质轻度边集，细胞内粗面内质网丰富，池内充满细颗粒样物质，线粒体轻度肿胀;细胞表面有较多的突起，细胞周围胶原纤维排列规则(图2c)。对照组: 大部分软骨细胞呈退化改变，梭形细胞较少，细胞肿胀，表面有少量的突起;细胞核形状不规则，核内染色质边集，电子密度增加;线粒体明显肿胀，内质网扩张成池样(图2d)。