亮丙瑞林硬脂酸纳米粒的制备及其理

亮丙瑞林硬脂酸纳米粒的制备及其理 海峡药学　2009年　第21卷第5期 3.1　处方筛选中发现,处方中加入的硬脂酸不仅起到了润滑剂的作用,还具有调节盐酸氨溴索释放的作用。可以在一定 程度上阻滞盐酸氨溴索的释放,与HPMC配合使用起到了较好的缓释作用。3.2　在工艺筛选中,由于HPMC不溶于水和95%乙醇,而溶于70%乙醇,若用水和95%乙醇做粘合剂,软材不宜成形,所得颗粒松散;而用70%乙醇作粘合剂,制得的颗粒硬度适合宜于压片,但整个制粒过程不宜操作时间过长,乙醇挥发而造成颗粒松散。 3.3　本品水溶液30h内吸光度无明显变化,能满足试验要求。3.4　通过相关性的研究确定了最佳溶出条件为:蓝法,溶出介质水,转速100r·min-1,建立了紫外-可见分光光度法作为盐酸氨溴索体外分析方法。 参考文献 〔1〕陆彬主编.药物新剂型与新技术〔M〕.北京:人民卫生出版社, 1998,357. 〔2〕国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)〔S〕.北京:化学 工业出版社,2005,560-563. 亮丙瑞林硬脂酸纳米粒的制备及其理化性质研究 杨向平＊,王维卫(浙江省人民医院杭州310024) 摘要:目的　制备亮丙瑞林硬脂酸纳米粒,并对其理化性质进行研究。方法　分别采用溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备硬脂酸固体脂质纳 米粒,并测定纳米粒形态、粒径、药物包封率和体外释放等理化性质。结果　溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备得到的硬脂酸纳米粒平均粒径 均在400nm左右,形态呈椭圆形。与溶剂扩散法相比,以乳化溶剂蒸发法制备的纳米粒,亮丙瑞林的药物包封率从28.0%提高到53.1%,体外释放2h的药物突释量显著下降,药物释放总维持时间在24h左右。结论　以乳化溶剂扩散法制备亮丙瑞林硬脂酸SLN,药物包封率高,药物突释量小,具有一定的亮丙瑞林口服给药开发前景。 关键词:亮丙瑞林;溶剂扩散法;乳化溶剂蒸发法;固体脂质纳米粒;理化性质 中图分类号:TQ460.4　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2009)-05-0022-03 Preparationandphysicochemicalpropertiesofleuprolidestearicacidnanoparticles YANGXiang-ping,WANGWei-wei(People′sHospitalofZhejiangProvince,Hangzhou310024,China)ABSTRACT:　OBJECTIVE　Toprepareleuprolide-loadedstearicacidnanoparticlesandinvestigatetheirphysic-ochemicalproperties.METHODS　Stearicacidnanoparticleswerepreparedbyemulsion-evaporationmethodandsolventdiffusionmethod,theirphysicochemicalpropertiessuchasmeandiameter,drugencapsulationefficiencyandinvitrodrugreleaseprofileswereresearched.RESULTS　Theaveragesizeofnanoparticlespreparedbysol-ventdiffusiontechniqueandemulsion-evaporationmethodwasabout400nm.Comparedwithsolventdiffusionmethod,thenanopartilesobtainedbyemulsion-evaporationmethodincreaseddrugentrapmentefficiencyfrom28.0%to53.1%,thenumberofdrugburstreleasewasdecreasedsignificantly.Thedrugreleasetimewasabout24h.CONCLUSION　Thenanopartilesobtainedbyemulsion-evaporationmethodexhibitedhigherdrugencapsu-lationefficiencyandlowerdrugburstreleaseratio,therefore,thestearicacidnanoparticlesmaybepotentiallyusedasoraldeliverysystemforleuprolide. Leuprolide;Solventdiffusionmethod;Emulsion-evaporationmethod;Solidlipidnanoparticles;Physicochemicalproper-KEYWORDS: ties ＊ 　　醋酸亮丙瑞林(leuprolide,LR)是一种由9个氨基酸组成 的强效促性激素释放激素的高活性衍生物,其氨基酸序列为: pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Arg-ProNHTt。醋酸亮丙瑞林口服给予大鼠和人后,由于酶降解以及生物膜的通透性差等原因〔1〕,血药浓度大多低于0.2ng·mL-1,口服无效〔2〕。口服给 作者简介:杨向平,女,本科,主管药师,从事医院药学的研究,电话:0571-87312093,E-mail:zhyfan917@sina.com StraitPharmaceuticalJournalVol21No.52009 药的剂型研究较少。 固体脂质纳米粒(SLN)是近年来正在发展的一种新型 〔3〕 给药系统。它作为药物载体综合了含药微乳和脂质体的优点,不仅可以提高药物的生物利用度,而且还具有缓释和靶向作用。本文以硬脂酸为载体,分别以溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备亮丙瑞林SLN,研究其粒径、形态、药物包封率及体外释放过程,为亮丙瑞林进一步的口服给药打下基础。1　材料与仪器1.1　材料　硬脂酸(stearicacid,上海化学试剂采购供应站);亮丙瑞林(1euprorelin,LR,深圳二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate,SDS,广州市化学试剂玻璃仪器批发部进口分装);磷酸(浙江新安化工基团股份有限公司);三乙胺(triethylamine,上海化学试剂采购供应五联化工厂);磷酸二氢钾(上海化学试剂总厂经贸公司);氢氧化钠(杭州化学试剂有限公司);盐酸(杭州化学试剂有限公司);甲醇、乙腈为色谱纯;乙醇、丙酮均为分析纯。1.2　仪器　高效液相色谱仪(1100series,Agilent,USA);微粒粒度与Zeta电位测定仪(3000HS,Malvern,UK);透射电子显微镜(TEAI10,PHILIPS,Dutch)高速离心机(3K30,Sig-ma,Germany);恒温振荡器(SHELLAB1227-2E,SHELLAB,USA);电子天平(BS110S,北京赛多利斯天平有限公司);恒温水浴锅(DK-8A,上海精宏实验设备有限公司);磁力加热搅拌器(85-2型,上海司乐仪器厂);漩涡振荡仪(XW-80A,上海医科大学仪器厂)。2　实验方法 2.1　亮丙瑞林硬脂酸纳米粒的制备　分别采用溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备亮丙瑞林硬脂酸纳米粒。 2.1.1　溶剂扩散法制备纳米粒:精密称取亮丙瑞林2.0mg、硬脂酸200mg,将药物和脂质置于丙酮2mL和无水乙醇2mL组成的有机相中,水浴70℃使完全溶解。以蒸馏水为分散相,置70℃水浴中。在400r·min-1机械搅拌条件下,将有机相注入40mL分散相中,搅拌5min,得亮丙瑞林硬脂酸纳米粒分散液。纳米粒分散液用0.1mol·L-1盐酸调pH至1.2,使纳米粒絮凝,25000r·min-1离心20min,分离得到纳米粒沉淀。 2.1.2　乳化溶剂蒸发法制备纳米粒:精密称取亮丙瑞林2.0mg、硬脂酸200mg,加入乙醇2mL,70℃水浴加热使药物和脂质溶解后,加入到10mL含2.5%(w/v)司盘80的液体石蜡溶液中,400w探头超声40次,形成O/O型的乳状液,在200r·min-1机械搅拌条件下,常温减压抽去乙醇,得到纳米粒液体石蜡分散液。纳米粒分散液20000r·min-1离心10min,所得沉淀以3mL石油醚分散,20000r·min-1离心10min,沉淀再以3mL石油醚分散,重复3次,除去液体石蜡。 2.2　纳米粒粒径的测定　取纳米粒沉淀适量,以0.2%SDS溶液分散,控制纳米粒脂质浓度0.1mg·mL,漩涡振荡3min,微粒粒度与Zeta电位测定仪测定纳米粒粒径。2.3　纳米粒形态观察　载药纳米粒分散液用蒸馏水稀释20倍,悬液滴于铜网上,室温放置至形成薄膜后透射电镜(TEM)观察形态。 图1　溶剂扩散法(A)和乳化溶剂蒸发法(B)制备得到的硬脂酸SLN的透射电镜照片 -1 2.4　纳米粒药物包封率测定 2.4.1　色谱条件:流动相:0.1M磷酸缓冲液(三乙胺调pH 至3.0):甲醇:乙腈=67:12:26;色谱柱为HypersilC18柱(150mm×3.9mm);检测波长:220nm;流速:1.0mL·min-1;进样量:20μL。2.4.2　标准曲线的制备:取亮丙瑞林5.0mg,精密称定,置25mL量瓶中,用流动相溶解并定容。精密移取上述溶液适量,用流动相稀释至药物终浓度为0.2μg·mL-1、0.6μg· -1-1-1-1-1mL、1μg·mL、5μg·mL、10μg·mL、20μg·mL、40μg·mL-1,用高效液相色谱法测定。2.4.3　纳米粒药物包封率测定:溶剂扩散法制备得到的纳米粒沉淀以25mL80%乙醇溶液(乙醇:水=4:1,v/v)分散,70℃水浴加热破坏脂质纳米粒,提取被包裹的药物,冷却至室温后,取纳米粒破坏液1mL,20000r·min-1离心10min,上清液以220nm油性微孔滤膜过滤,HPLC测定上清液中药物含量。 乳化溶剂蒸发法制备得到的纳米粒沉淀分散于10mL水中,漩涡振荡3min,以洗去未被包裹的药物,20000r·min离心10min,沉淀加25mL80%乙醇溶液,同法操作,测定药物的包封率。药物的包封率按下列计算: 纳米粒破坏液药物量 ×100%药物包封率(%)= 投料药物量 2.5　纳米粒药物体外释放测定　纳米粒沉淀加9mLpH6.80.2%SDS溶液分散,分成三等份,置37℃水浴恒温振荡器中恒温振荡,振荡频率为60次·min-1,间隔一定时间取出全部释放液。释放液20000r·min-1离心5min,上清液用孔径为220nm水性微孔滤膜过滤,HPLC法测定续滤液中的药物浓度。离心沉淀补加3mL新鲜的pH6.80.2%SDS溶液,手摇使纳米粒分散均匀,置于恒温振荡器中继续体外释放试验。3　结果与讨论3.1　纳米粒形态与粒径　以溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备得到的硬脂酸SLN的形态与粒径分别(见图1和1)。由图1可见,两种方法制备得到的纳米粒均呈椭圆形,平均粒径均在400nm左右,制备方法对纳米粒的粒径无显著性影响(P>0.05) 。 -1 海峡药学　2009年　第21卷第5期 表1　乳化溶剂蒸发法和溶剂扩散法制备得到的亮丙瑞林硬脂酸SLN的粒径与多分散系数(n=3) 制备方法溶剂扩散法乳化溶剂蒸发法 纳米粒粒径418.6±10.4a397.5±23.5 a 3.3　纳米粒药物体外释放　图2为溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备得到的亮丙瑞林硬脂酸SLN体外释放曲线。以溶 剂扩散法制备得到的硬脂酸SLN,亮丙瑞林在前2h的药物突释量为57.9%,12h药物的释放量达到91%,而以乳化溶剂蒸发法制备硬脂酸SLN,亮丙瑞林前2h的药物突释量减至13.3%,24小时的药物释放为85.3%。这种药物突释量小,药物释放在24h内的体外释放曲线,对于亮丙瑞林口服制剂的开发具有一定的前景。 总体上,以水性溶剂扩散法制备的纳米粒药物释放维持时间短于乳化溶剂蒸发法,可能与两种方法制备形成纳米粒的机制有关〔4〕。用溶剂扩散法制备SLN,当含有脂质的油相注入水相过程中,自发地形成小乳滴,随后油相迅速往水相扩散,析出SLN。在油相迅速往水相扩散的过程中,药物分子随同油相一起往水相迁移,导致包裹在纳米粒骨架内核区域的药物较少,因而药物释放维持时间相对短于乳化溶剂蒸发法制备得到纳米粒的药物释放维持时间。4　结论 溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备得到的硬脂酸SLN平均粒径均在400nm左右,形态呈椭圆形。与溶剂扩散法相比,乳化溶剂蒸发法制备得到的纳米粒药物包封率高,体外释放药物突释量小,释放维持时间在24h左右,对于亮丙瑞林口服制剂的开发具有一定的前景。 参考文献 〔1〕ZhengY,FuluMY,QiuY,etal.Enzymaticdegradationofleuprolide inratintestinalmucosalhomogenates〔J〕.PharmDevTechnol,1999,4(4):539-544. 〔2〕AdjeiP,SundbergD,MillerJ,etal.Bioavailabilityofleuprolideacetate followingnasalandinhalationdeliverytoratsandhealthyhumans〔J〕.PharmResI,1992,9(2):244-249. 〔3〕翁开敏,陈元俊,卢玉兰.纳米技术在药物研究中的应用〔J〕.中 国药房,2003,14(7):440. 多分散系数0.192±0.0320.398±0.053 a代表无显著性差异(P>0.05) 3.2　纳米粒药物包封率　采用溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备得到的纳米粒药物包封率见表2。与溶剂扩散法相比, 以乳化溶剂蒸发法制备得到的纳米粒亮丙瑞林药物包封率显著增高(P<0.05)。乳化溶剂蒸发法制备纳米粒,选择液体石蜡作为纳米粒的分散外相,相对于以水作为分散外相,液体石蜡减少了水溶性药物亮丙瑞林往外相扩散的趋势,较多的药物被包裹在纳米粒骨架中,因而具有提高的药物包封率。 表2　溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备得到的硬脂酸SLN亮丙瑞林药物包封率(n=3) 制备方法溶剂扩散法乳化溶剂蒸发法 a代表显著性差异(P<0.05 ) 药物包封率(%)28.0±2.5 a 53.1±4.4a 图2　溶剂扩散法和乳化溶剂蒸发法制备得到的亮丙瑞林硬脂酸SLN的体外释放曲线 〔4〕Hu,FQ,JiangSP,DuYZ,etal.Preparationandcharacterizationof stearicacidnanostructuredlipidcarriersbysolventdiffusionmethodinanaqueoussystem〔J〕.ColloidsSurfBBiointerfaces,2005,45(3-4):167-173. 一种抗菌中药挥发油软膏的制备 陈向丽,赵颖飞(浙江乐清市中医院药剂科乐清325600) 摘要:目的　研制一种抗菌中药挥发油软膏的制备并对其体外抗菌活性进行研究。方法　采用水蒸气蒸馏法提取莪术、肉桂、大蒜、艾叶四种中药的挥发油,并通过乳化方法制备得到o/w软膏,并进行体外抗菌试验探讨。结果　该软膏细腻,稳定,涂抹分散性较好,体外抗菌实验表明具有一定的抗菌活性。结论　该软膏剂制备工艺可行,性质稳定,具有一定的抗菌效用。 软膏;中药挥发油;抗菌关键词: 中图分类号:TQ460.6　文献标识码:A　文章编号:1006-3765(2009)-05-0024-02 作者简介:陈向丽,女(1969-)。主管药师,联系电话:0577-62551250-8017