浅析微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用

浅析微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用 摘要：新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病（haemolytic disease of the newborn），简称HDN。在我国，因ABO血型不合引起的新生儿溶血病较为常见，Rh血型不合引起的新生儿溶血病次之。新生儿溶血病严重时，可出现核黄疸，导致智力发育不全、脑瘫等后遗症。新生儿溶血病是严重影响新生儿健康的疾病。采用微柱凝胶技术对新生儿溶血病诊断的三项试验(直接抗球蛋白试验、抗体放散试验、血清游离抗体试验)的快速检出，更有利于临床及时对患儿的诊断和治疗。 关键词： 微柱凝胶技术 新生儿溶血病 血清学检测 微柱凝胶技术（microcolumn get Immunoassay）是目前国内外血型血清学检查方法之一。其设计理论先进，具有操作简单迅速、标本用量少、结果易判断、敏感性高和特异性强的优点。 1 材料与方法 1.1 试剂与仪器 试剂：DianaGeL coombs卡（每卡含8个微柱孔管），每个微柱孔管含低离子强度缓冲液（LISS）浸泡中的微粒筛，加上多价抗人球蛋白（兔多克隆抗IG和单克隆抗C3d克隆12011.D10）。 标准红细胞：0.8%O型筛查细胞（）批号：8004801 801001 801101 801201 900201 900101 900301 900401。0.8%A型细胞0.8%B型细胞 批号：8001801 8001901 8007801 8002501 900201 901001 900501 900601 901001。 Diasnvstic Grifols S.A卡：用于ABO、Rh血型、直接抗球蛋白试验，批号：50040101 60010101 80010201 80010301 80030101 80060201。 DianaGeL Coombs卡（抗人球卡）批号：80080101 80420101 80750101 81180101 81380101 81470101。 仪器：专用的Diana Fuag 离心机和Diana孵育器。 以上试剂和仪器均为GRIFULS公司产品，由沈阳麦迪卡尔有限公司提供。 1.2 来源 2007年1月-2009年5月住在我院新生儿科患儿（母亲是O型，患儿是A型或B型）出生后1-3天皮肤巩膜黄染，血红蛋白降低，血清胆红素高于正常值，对患儿采集EDTA抗凝血3毫升共541份标本，实验室对所送标本必须在接到后24小内检查完毕。 1.3实验方法 1.3.1 标本处理 取患儿EDTA抗凝血3毫升，将血浆分离，剩余红细胞经0.9%生理盐水洗涤4遍后，取压积红细胞5微升加入Diana稀释液2（低离子介质液）500微升中制成1%红细胞悬液。剩余的压积红细胞加入和压积红细胞一倍的生理盐水，经56℃水浴（手拿试管不断在水中轻轻震动10分钟），拿出保温离心提取粉红色上清（放散液）备用。 1.3.2 取Dignostic Grifols.SA微柱凝胶卡一张，各孔加入患儿1%红细胞悬液50微升，放入Diana Fuge 离心机离心10分钟，观察结果。 1.3.3 取Diana GeL coombs卡一张，拿出6孔分别标识ABO、ABO，按标识的血型分别在各孔中加入0.8%A型红细胞、0.8%B型红细胞和0.8%O型红细胞（等量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ O型红细胞混合液）50微升。前3孔各加入患儿血浆50微升(游离抗体试验)，后3孔各加入患儿红细胞放散液50微升（抗体放散试验）。置Diana孵育器15分钟后，放Diana Fuge专用离心机离心10分钟，按照微柱凝胶卡式法的三项试验说明书判读结果。 1.4实验室新生儿溶血病诊断标准 三项试验同时阳性或放散试验阳性可确诊为新生儿溶血病。若直抗试验和游离试验1项或2项阳性者，可判断为疑似新生儿溶血病。 2 结果 3 讨论 目前，在我国诊断新生儿溶血病的实验室检查主要是三项试验（直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、放散试验），直接抗球蛋白试验主要检测新生儿红细胞是否被来自母亲IgG抗A（B）所致敏；游离抗体试验是患儿血清的IgG抗A（B）来自母亲，如果新生儿血清中发现与其红细胞不配合的IgG抗A(B)时，表明婴儿体内有抗体，可能受害；放散试验采用的是试管抗球蛋白技术和微柱凝胶技术，用放散液与标准ABO型红细胞反应，（与O型红细胞反应视做阴性对照）均无凝集者，表明未查出抗体，A型新生儿红细胞放散液只与标准A型红细胞凝集，表明放散液检出抗-A，而B型新生儿红细胞放散液只与标准B型红细胞凝集，表明放散液检出抗-B，而A型新生儿红细胞放散液与标准B型红细胞凝集或B型新生儿红细胞放散液与标准A型红细胞凝集,表明放散液中检出抗-A，B。我们采用微柱凝胶技术对我院541例母婴血型不合且有严重的新生儿黄疸或高胆红素血症患儿的血标本进行了三项试验，结果表明：ABO母婴血型不合新生儿溶血病（HDN）171例，其中OA115例，OB56例。ABO溶血病因红细胞的抗体结合较少，直接抗球蛋白试验常为阴性或弱阳性，血清游离抗体阳性，抗体释放试验阳性。Rh溶血病直接抗球蛋白试验强阳性，游离抗体强阳性，抗体释放试验强阳性。我院新生儿科对溶血