益生菌的发展历程

益生菌的发展历程 1857年 法国微生物学家巴斯德研究了牛奶的变酸过程。他把鲜牛奶和酸牛奶分别放在显微镜下观察，发现它们都含有同样的一些极小的生物——乳酸菌，而酸牛奶中的乳酸菌的数量远比鲜牛奶中的多。这一发现说明，牛奶变酸与这些乳酸菌的活动密切相关。 1878年 李斯特(Lister)首次从酸败的牛奶中分离出乳酸乳球菌。 1892年 德国妇产科医生Doderlein在研究**时提出产乳酸的微生物对宿主--人有益。 1899年 法国巴黎儿童医院的蒂赛(Henry Tissier）,蒂赛率先从健康母乳喂养的婴儿粪便中分离了第一株菌种双歧杆菌（当时称为分叉杆菌），他发现双岐杆菌与婴儿患腹泻的频率及营养都有关系。 1900-1901年 Moro，Beijerinck和Cahn各自研究了肠道中的乳酸菌。丹麦人奥拉一严森(OrIa—JerlSerl)首次对乳酸菌进行了分类。 1905年 保加利亚科学家斯塔门·戈里戈罗夫第一次发现并从酸奶中分离了“保加利亚乳酸杆菌”，同时向世界宣传保加利亚酸奶。 1908年 俄国科学家诺贝尔奖获得者伊力亚.梅契尼科夫（Elie Metchnikoff）正式提出了“酸奶长寿”理论。通过对保加利亚人的饮食**惯进行研究、他发现长寿人群有着经常饮用含有益生菌的发酵牛奶的传统。他在其著作「延年益寿」(Prolongation of Life)中系统的阐述了自己的观点和发现。 1915年 Daviel Newman首次利用乳酸菌临床治疗膀胱感染。 1917年 德国Alfred Nissle教授从第一次世界大战士兵的粪便中一株大肠杆菌。这名士兵在一次严重的志贺氏菌大爆发中没有发生小肠炎。在抗生素还没有被发现的那个时代，Nissle利用这株菌在治疗肠道感染疾病（由沙门氏菌和志贺氏菌）取得可观成果。这株大肠杆菌现仍然在使用，它是为数不多的非乳酸菌益生菌。 1919年 怀着对巴尔干半岛有益酸奶和巴斯德研究所微生物研究成果的极大兴趣，伊萨克·卡拉索在西班牙巴塞罗那创立了公司(达能前身)。而且他常常召集许多博士医生到工厂讨论酸奶的益处。 1920年 Rettger证明梅契尼科夫所说的保加利亚细菌（保加利亚乳杆菌）不能在人体的肠道中存活。发酵食品和梅契尼科夫的学说受到怀疑（在那时）。 1922年 Rettger和Cheplin报道了嗜酸乳杆菌酸奶所具有的临床功效，特别是对消化的功能性。 1930年 医学博士代田稔博士在日本京都帝国大学（现在的京都大学）医学部的微生物学研究室首次成功地分离出来自人体肠道的乳酸杆菌，并经过强化培养，使它能活着到达肠内。这种菌后来引用代田博士的名字，取名为Lactobacillus casei strain shirota。这就是后来被称为养乐多菌的益生菌。 1935年 乳酸菌饮料[养乐多]问世，益生菌开始走向产业化。 1945年 无菌动物模型和悉生动物模型建立。 1954年 Vergio引入与抗生素或其它抗菌剂相对的术语“Probiot-ika”，提出抗生素和其它抗菌剂对肠道菌群有害而“Probiotika”对肠道菌群有利。 1957年 Gordon等人在《柳叶刀(The Lancet)》提出了有效的乳杆菌疗法标准：乳杆菌应该没有致病性，能够在肠道中生长，当活菌数量达到107-109时，明显具有有益菌群的作用。同时德国柏林自由大学的Haenel教授研究了厌氧菌的培养方法，提出“肠道厌氧菌占绝对优势”的理论。日本学者光岗知足(Tomotari Mitsuoka)开始了肠内菌群的研究，最后建立了肠内菌群分析的经典方法和对肠道菌群作出了全面分析。 1962年 Bogdanov从保加利亚乳杆菌中分离出了3种具有抗癌活性的糖肽，首次报道了乳酸菌的抗肿瘤作用。 1965年 Lilly D. M.和Stillwell R. H.在《科学》杂志上发的“益生菌—由微生物产生的生长促进因素”中最先使用益生菌Probiotic这个定义来描述一种微生物对其他微生物促进生长的作用。 1970年 沃斯(Woese)、奥森（Olsen）等提出16s rRNA寡核苷酸序列分析法来对菌进行鉴定。构建了现已被确认的全生命系统进化树，越来越多的细菌依据16SrDNA被正确分类或重分类，给乳酸菌的鉴定和肠内菌群分析带来极大方便。 1971年 Sperti用益生菌（Probiotic）描述刺激微生物生长的组织提取物。 1974年 Paker将益生菌定义为对肠道微生物平衡有利的菌物。 1977年 微生态学（Microecology）由德国人Volker Rush首先提出。他在赫尔本建立了微生态学研究所，并从事对双歧杆菌、乳杆菌、大肠杆菌等活菌作生态疗法的研究与应用。Gilliland对肠道乳杆菌的降低胆固醇作用进行了研究，提出了乳酸菌在生长过程中通过降解胆盐促进胆固醇的分解代谢，从而降低胆固醇含量的观点。 中国的微生态学研究开始。自中国微生物学会人畜共患病病原学专业委员会下属的正常菌群学组的成立.1988年2月15日中华预防医学会微生态学分会的成立有了学术组织。1988年《中国微生态学杂志》创刊。80年代初大连医科大学康白教授首先研制成功促菌生（蜡杆芽胞杆菌）。 1983年 由美国Tufts大学两名美国教授Sherwood Gorbach和Barry Goldin从健康人体分离出了LGG（鼠李糖乳杆菌），并于1985年获得专利。LGG菌种具有活性强、耐胃酸的特点，能够在肠道中定殖长达两周。 1988年 丹麦的汉森中心实验室生产出超浓缩的直投式酸奶发酵剂。 直投式酸奶发酵剂(Directed Vat Set, DVS)是指一系列高度浓缩和标准化的冷冻干燥发酵剂菌种，可直接加入到热处理的原料乳中进行发酵，而无需对其进行活化、扩培等其它预处理工作。直投式酸奶发酵剂的活菌数一般为1010 - 1012 CFU/g。 1989年 英国福勒博士(Dr.Roy Fuller)将益生菌定义为：益生菌是额外补充的活性微生物，能改善肠道菌群的平衡而对宿主的健康有益。他所强调的益生菌的功效和益处必须经过临床验证的。 1989年 1989年美国食品和药品管理局（FDA）以及美国饲料监察协会（AAFCO）公布了40余种"可直接饲喂且通常认为安全的微生物"菌种名单，共42种：黑曲霉（Aspergillus niger）；米曲霉(Aspergillus oryzae)；凝结牙孢杆菌(Bacillus coagulans)；迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)；地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）；短小芽孢杆菌(Bacillus Pumilus)；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；嗜淀粉拟杆菌(Bacteroides amylophilus)；多毛拟杆菌（Bacteroides capillosus）；栖瘤胃拟杆菌(Bacteroides ruminicola)；产琥珀酸拟杆菌(Bacteroides succinogenes)；青春双岐杆菌(Bifidobacterium adolescentis)；动物双岐杆菌(Bifidobacterium animalis)；两岐双岐杆菌(Bifidobacterium difidum)；婴儿双岐杆菌(Bifidobacterium infantis)；长双岐杆菌(Bifidobacterium Longum)；嗜热双岐杆菌(Bifidobacterium therm ophilum)；嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)；短乳杆菌(Lactobacillus brevis)；保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)；干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)；纤维二糖乳杆菌(Lactobacillus helveticus)；弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)；德氏乳杆菌(Lactobacillus delbriickii)；发酵乳杆菌(Lactobacillus fermenti)；瑞士乳杆菌(Leuconostos mesenteroides)；乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)；胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)；罗氏乳杆菌(Lactobacillus renteril)；肠膜明串珠菌(Leuconostos mesenteroides)；乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)；啤酒片球菌(Pediococcus cerevisiae)；戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)；费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)；谢氏丙酸杆菌(Propionibacterium shermanii)；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；乳脂链球菌(Streptococcus lactis)；双醋酸乳链球菌(Strepttococcus diacetylactis)；粪链球菌(Streptococcus faecalis)；中链球菌(Streptococcus intermendius)；乳链球菌（Streptococcus lactis）；嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)； 1992年 我国学者张箎教授对世界第五长寿区——我国广西巴马地区百岁以上老人体内的双歧杆菌进行了系统的研究，也发现长寿老人体内的双歧杆菌比普通老人要多得多。同时中医药微生态学建立。杨景云等学者开始对我国的传统中药与微生态关系进行了系统的研究。 1992年 Havennar对定义进行了扩展，解释为一种单一的或混合的活的微生物培养物，应用于人或动物，通过改善固有菌群的性质对寄主产生有益的影响。 1995年 吉布森(Gibson)把能在大肠中调整菌群的食品称为益生元。 1996-1999年 欧共体启动益生菌类食品的营养功能示范项目PROBDEMO CT96-1028（Demonstration of Nutritional functionality of Probiotic Foods, PROBDEMO, FAIR CT96-1028），历时4年，1999年底完成，是欧共体第五次框架项目的预研，旨在提供科学依据以支持益生菌类食品等微生态制剂工业界的要求。微生态制剂作为功能性食品在欧洲地区以至全世界越来越流行，通过本项目的研究、讨论，为欧共体第五次框架项目在“健康与食品，Health and Food ”领域的立项提供基础。 PROBDEMO CT96-1028项目研究结果表明，益生菌产品不仅在临床上对儿童及**具有治疗作用，而且对健康人群及疾病患者也具有预防保健作用。主要对**的胃肠功能平衡及胃肠道疾病具有治疗作用、对免疫系统具有激活作用，也对儿童的过敏性疾病具有预防作用。 1998年 Guarner & Schaafsma给出了更通俗的定义：益生菌是活的微生物，当摄入足够量时，能给予宿主健康作用。 1999年 Tannock作了总结：细菌是人体（还有高级动物和昆虫）中正常居住者。其中胃肠道中发现超过400多种细菌。 1999年 1999年6月我国农业部第105号文件发布的《允许使用的饲料添加剂品种目录》：干酪乳杆菌，植物乳杆菌，粪链球菌，屎链球菌，乳酸片球菌，枯草芽孢杆菌，纳豆芽孢杆菌，嗜酸乳杆菌，乳链球菌，啤酒酵母菌，产朊假丝酵母，沼泽红假单胞菌共计12种。 2001年 2001年10月1日-10月4日世界粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)专家咨询会就食品中益生菌的健康及营养特性评价问题在阿根廷科尔多瓦召开会议。会议认为有必要建立评价食品用益生菌的系统指南、标准和方法以确定其健康声称。 FAO/WHO也对益生菌做了如下定义：通过摄取适当的量、对食用者的身体健康能发挥有效作用的活菌。 FAO/WHO组成的专家联合顾问团强烈建议用分子生物学的手段鉴定益生菌。并推荐益生菌存放于国际性菌物保藏中心。 具体的步骤是：先做表型鉴定，再做基因鉴定。基因鉴定的方法有DNA/DNA杂交，16S RNA序列分析或其它国际上认可的方法。然后到RDP(ribosomal data base project，www.cme.msu.edu/RDP/)上验证鉴定结果。 2001年3月 我国首次规定了益生菌的定义：益生菌菌种必须是人体正常菌群的成员,可以利用其活菌、死菌及其代谢产物。就保健品类益生菌生产与管理作出了，并列出了可用于保健食品的益生菌菌种名单：两岐双岐杆菌 Bifidobacterium bifidum，婴儿双岐杆菌 B. infantis，长双岐杆菌 B. longum，短双岐杆菌 B. breve ，青春双岐杆菌 B. adolescentis，保加利亚乳杆菌 Lactobacillus. Bulgaricus，嗜酸乳杆菌 L. acidophilus，干酪乳杆菌干酪亚种 L. Casei subsp. Casei，嗜热链球菌 Streptococcus thermophilus 2001年 法国完成第一株乳酸菌即乳酸乳球菌IL1403的全基因组测序。 2002年 微生物学教授Savage宣布：正常菌群是人体的第十大系统——微生态系统。 2002年 4月30日-5月1日在加拿大安大略省伦敦市FAO/WHO联合专家工作组起草了《食品中益生菌的评价指南》(《Guidelines for the Evaluation of Probiotic in Food 》) 2002年 欧洲食品与饲料菌种协会（EFFCA）定义益生菌为活的微生物，通过摄入足够数量，对宿主产生一种或多种特殊且经论证的功能性健康益处。 2003年3月 我国卫生部84号文件批准罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）为可用于保健食品的益生菌菌种，使可用于保健食品的益生菌菌种增加到10种。 2003年 2003年农业部第318号公告中,允许使用的微生物有：地衣芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌，两歧双歧杆菌，粪肠球菌，屎肠球菌，乳酸肠球菌，嗜酸乳杆菌，干酪乳杆菌，乳酸乳杆菌，植物乳杆菌，乳酸片球菌，戊糖片球菌，产朊假丝酵母，酿酒酵母，沼泽红假单胞菌共计14种。（同时规定1999年7月26日公告第105号发布的《允许使用的饲料添加剂品种目录》即日起废止。） 2005年 美国北卡罗来纳州立大学Dobrogosz 和Versalovic教授提出了免疫益生菌的概念（Immunoprobiotics）。 2006年 意大利M. Del Pianoa等认为益生菌应该定义为一定程度上能耐受胃液，胆汁和胰脏分泌物而黏附于肠道上皮细胞并在肠道中定殖的一类活的微生物。提出从粪便中分离的“益生菌”有可能多数是浮游菌，而非黏附菌。 2007年 继食盐中加碘、酱油中加铁、食用油中加维生素A和面粉中加维生素B1之后，作为公众营养改善项目，从2007年4月1日起，我国国家发改委公众营养与发展中心将陆续组织在乳制品、婴幼儿食品、饮料、糖果、烘焙食品、休闲食品等各类食品中添加益生菌。 2007年 美国《科学》杂志预测：人类共生微生物的研究将可能是国际科学研究在2008年取得突破的7个重要领域之一。12月9～10日，英、美、法、中等国科学家在美酝酿成立“人类微生物组国际研究联盟(IHMC)”，计划2008年4月联合启动“人类元基因组计划”，开始对人类元基因组的全面研究。这项被称为“第二人类基因组计划”的项目将对人体内所有共生的微生物群落进行测序和功能分析，其序列测定工作量至少相当于10个人类基因组计划，并有可能发现超过100万个新的基因，最终在新药研发、药物毒性控制和个体化用药等方面实现突破性进展。 2008年 荷兰乌得勒支大学医学中心研究者在柳叶刀杂志上报道了益生菌可能会引起重症急性胰腺炎患者的肠道致命性局部缺血危险。随后，国际益生菌及益生元科学协会(ISAPP)很快发表声明指出：第一，没有任何直接证据显示这些病人的死亡和益生菌直接相关;第二，试验组和对照组病人的病情轻重、治疗条件等参数都未知，因此两组数据就目前而言不具可比性。荷兰肠道健康与疾病联盟(Gutflora)也声明，试验中所使用的益生菌和在美国、欧洲销售的食品所使用的益生菌并不一样。长期以来的科学试验都显示，正规的益生菌及其制品对人体是非常有益的。 2008年4月 国际益生菌协会（The International Probiotics Association,IPA)于4月11日在美国芝加哥召开了首届IPA国际大会，IPA为争论不休的益生菌产品标签计划制定了标准，这些标识主要包括：（1）在产品失效时确保有最低数量的菌落形成单位（CFU）；（2）有储存指示；（3）有包装批号或产品代码；（4）对益生菌清楚地识别，其中包括菌株（优先列出）或者至少以外界普遍认可的术语列明属种，如果用商品名称来识别益生菌，那么实际的属种也应该包含在产品标签上；（5）生产厂家的所有联系信息，或者在产品标签空间有限的情况下，至少列明厂家的网址；（6）建议用量的说明（供动物使用的益生菌补充剂应该列明其所针对的动物种类）。 2008年5月 由内蒙古农业大学“乳品生物技术与”教育部重点实验室主持进行的的益生菌Lb. casei Zhang的全基因组序列测定和图谱绘制于18日全部完成，并向Genbank提交。这是我国第1个完成的乳酸菌基因全序列的测定。 2009年5月 TNO将建立微生态菌群研究中心(MEC)。MEC将提供分析含有复杂微生物菌群样品的服务。消费者将从代替低通量的传统培养方法和分子检测方法的专门以DNA芯片为基础的诊断中获益。 MEC将提供高通量、清晰的数据和有竞争的成本分析。 2009年5月 继国家“九五”、“十五”都将益生菌研究列为重大科研项目后，2009年5月11日科技部再次将益生菌的研究“乳酸菌资源库建设及益生菌发酵剂和制剂产业化示范”重点项目课题”列入“十一五”科技项目。 2009年11月 2009年11月，来自英国、意大利、爱尔兰、比利时、法国、西班牙、瑞士7个欧洲国家的9个胃肠病、微生物、营养学和儿科专家，以英国雷丁大学（University of Reading）Ian Rowland教授为**组成了专家委员会，根据益生菌的研究开发、临床应用和市场消费等现状，达成一致意见，形成了“益生菌科学最新共识”的专题。该报告在益生菌临床应用效果方面的主要意见是：一、益生菌治疗腹泻被广泛研究，其临床应用效果最为突出。二、临床研究表明，某些益生菌能够缩短呼吸道感染时间，减轻诸如发烧、鼻炎、腹泻等症状。三、专家普遍认为，益生菌可全面改善IBS症状，缓解胃肠道功能性紊乱，例如缓解胃胀、腹痛等，从而减轻胃肠道的不舒服感觉。四、此外，专家们共同赞成的益生菌有益健康的作用包括：在幽门螺杆菌感染的治疗中，益生菌作为辅助治疗显示出令人鼓舞的效果；从生物学角度考虑，益生菌可以预防**和**感染，不过后者的效果不如前者的好；益生菌可能有利于减少结肠癌风险。 2010年3月 2010年3月4日，世界权威科学期刊《自然》发表文章指出，在多国科学家的通力合作和艰辛努力下，人类已经测定出人肠道微生物的基因目录，这对人类来说，无论是对微生物和疾病的认识上，还是对人体健康和保健的认识上都具有里程碑式的意义。Nature. 2010 Mar 4;464(7285):59-65. 2010年4月 继国家2001,2003年发布保健品中益生菌名单后，4月28日卫生部办公厅发布可用于食品的菌种名单，共计21种。 双歧杆菌 青春双歧杆菌Bifidobacterium adolescentis 动物双歧杆菌（乳双歧杆菌）Bifidobacterium animalis（Bifidobacterium lactis） 两歧双歧杆菌Bifidobacterium bifidum 短双歧杆菌Bifidobacterium breve 婴儿双歧杆菌Bifidobacterium infantis 长双歧杆菌Bifidobacterium longum 乳杆菌 嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus 干酪乳杆菌Lactobacillus casei 卷曲乳杆菌Lactobacillus crispatus 德氏乳杆菌保加利亚亚种（保加利亚乳杆菌）Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus（Lactobacillus bulgaricus） 德氏乳杆菌乳亚种Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis 发酵乳杆菌Lactobacillus fermentium 格氏乳杆菌Lactobacillus gasseri 瑞士乳杆菌Lactobacillus helveticus 约氏乳杆菌Lactobacillus johnsonii 副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei 植物乳杆菌Lactobacillus plantarum 罗伊氏乳杆菌Lactobacillus reuteri 鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus 唾液乳杆菌Lactobacillus salivarius 链球菌 嗜热链球菌Streptococcus thermophilus 粪链球菌Streptococcus faecalis 芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis 2011年1月2011年1月18日，卫生部根据《中华人民共和国食品安全法》和《新资源食品管理办法》的规 定，现批准翅果油和β-羟基-β-甲基丁酸钙作为新资源食品，将乳酸乳球菌乳酸亚种、乳酸乳球 菌乳脂亚种和乳酸乳球菌双乙酰亚种列入我部于2010年4月印发的《可用于食品的菌种名单》（卫 办监督发〔2010〕65号）。可用于食品的菌种由21种增加到24种。