天花粉的真伪鉴别及定量分析研究进展

广东药学院学报 JournalofGuangdongPharmaceuticalCollegeJun．2010．26(3) 天花粉的真伪鉴别及定量分析研究进展 孙俊英，郭庆梅，王鹏，周凤琴 (山东中医药大学药学院，山东济南250355) 摘要：对天花粉近十几年来在性状、显微、理化等方面的真伪鉴别，DNA分子标记、蛋白质等现代鉴别技 术的应用，以及天花粉的定量分析研究文献进行了综述，为市售商品天花粉的外观性状和内在质量的鉴 定研究提供资料参考。 关键词：天花粉；真伪鉴别；定量分析 中图分类号：R284．1文献标识码：A doi：10．3969／j．issn．1006—8783．2010．03．027 文章编号：1006—8783(2010)03-0322—04 AreviewonidentificationandquantitativeanalysisofTrichosanthisradix SUNJun—ying，GUOQing·mei，WANGPeng，ZHOUFeng—qin (SchoolofPharmacy，ShandongUnivers豇yofTraditionalChineseMedicine，．矗nan，Shandong250355， China) Abstract：LiteraturesaboutTrichosanthisradixonfeatures，microscopicidentification，physicochemical identification，applicationofmodernidentificationtechnologiessuchasDNAmolecularmarkersand protein，quantitativeanalysis，and80on，inthepastdecadewereanalyzedandsummarizedtoprovide referencesforidentifyingthephysicochemicalappearanceandinherentqualityofcommerciallyavailable trichosanthisradix． Keywords：Trichosanthisrad／x；identification；quantitativeanalysis 天花粉系葫芦科植物栝楼Trichosantheskirilowii Maxim或双边栝楼ZrosthorniiHerms的干燥根，具 有清热生津，消肿排脓的功效⋯。现代研究表明， 天花粉具有终止妊娠、抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力 等药理作用旧J，是临床常用中药之一。近期市场调 查发现，商品天花粉时有伪品及混淆品出现，不仅扰 乱了市场流通领域，湖北栝楼根等伪品带来的恶心、 呕吐副反应还严重危及人类健康。但目前天花粉的 国家的制定并不完善⋯，尚缺乏有效的监管指 标。为准确鉴定市售商品的外观性状和内在质量， 作者对近十多年来天花粉的真伪鉴别和定量分析研 收稿Et期：20lO—04一19 作者简介：孙俊英(1985一)，女，硕士研究生，从事中药质量 控制与资源研究，Email：jtmyingtem@163．corn；通 讯作者：郭庆梅(1968一)。女，博士，教授，硕士生 导师，从事中药质量控制与资源研究，Email： qmguo@sina．como 究现状进行了综述，并对其质量标准的制定提．出了 建议。 l天花粉的真伪鉴别 1．1性状鉴别 中药材的性状鉴别通常通过观察药材表面、色 泽、断面的粉性与纤维性、质地、气味等方面进行。 文献[1]记载，正品天花粉表面黄白色或淡棕黄色， 有纵皱纹、凹陷的横长皮孔或残留黄棕色栓皮；断面 富粉性，黄色的木质部导管稀疏，呈放射状；味微苦。 叶永菁等人【3。91发现并列表区别了天花粉混伪品的 性状特征。长萼栝楼(ZsinopunctataC．Y．Chenget Yueh)根：味咸而苦；湖北栝楼(zhupehensisC．Y． ChengetYueh)根：皮孔突起，粉性差，纤维较多，横 切面导管排列呈菊花状，味极苦；南方栝楼(Z damiaoshanensisC．Y．ChengetYueh)根：强粉性，横 切面黄色木质部导管稀疏，味苦、微涩；王瓜(r 万方数据 第3期 孙俊英，等．天花粉的真伪鉴别及定量分析研究进展 323 cucumeroidesMaxim)根：纺锤形，2—9个呈簇生状， 断面洁白或黄白色，粉性，味稍苦涩；异叶马瓞儿 [Melothriaheterophylla(Lour．)Cogn]根：断面类白 色，较疏松有空隙，味淡转味苦；木鳖[Momordica cochinchinensis(Lour．)Spreng]根：表面有细皱纹，纤 维性，有同心环状筋脉点，味苦；木薯(Manihot esculentaCrantz)根：近边缘处有环纹，中央部位有细 木心；番薯[Ipomoeabatata(L．)Lam．]根：味甘，嚼 之具特异番薯味；粉防己：断面车轮状纹理。另有同 名异物的葫芦科茅瓜根：具少数椭圆形横长皮孔与 明显的筋脉孔；罗汉果根：圆形皮孔，断面纤维较多， 略带香气味稍苦涩；萝蘼科飞来鹤根：可见淡环状皮 孔痕，灰黄色断面；防己科散血薯根：块根扁圆形，表 面棕褐色，味苦有麻舌感。 1．2显微鉴别 天花粉主要显微特征有木栓细胞、石细胞、淀粉 粒⋯等。正品天花粉栓内层有断续排列的石细胞 环带，韧皮部较窄，木质部宽广，导管3～10列成群； 粉末中淀粉粒甚多，具缘纹孔导管大而紧密，石细胞 黄绿色。而长萼栝楼根有异型维管束，无石细胞，淀 粉粒较少∞1；木鳖根木纤维中有晶鞘纤维及分隔纤 维【7’；异叶马瓞儿根中央有星状初生木质部。叫；湖 北栝楼根淀粉粒极少，无石细胞，纤维多，薄壁细胞 含草酸钙棱晶旧o；茅瓜根与木鳖根木质部排列呈近 二岐状旧1；飞来鹤根韧皮部有石细胞，外侧有多层 横向颓废筛管层纹；番薯粉末中散在草酸钙砂晶，具 网纹导管一j。 1．3理化鉴别 1．3．1薄层鉴别 刘训红¨¨采用TLC法发现伪品湖北栝楼根与 正品天花粉相比，薄层斑点差异性明显，第3个斑点 毋值较大，第四个斑点毋值较小。姚三桃等¨2o对 天花粉醇提液薄层与全波长锯齿扫描发现，在230 nm处正品天花粉(栝楼和双边栝楼根)及南方栝楼 根未见明显吸收峰，而湖北括楼根及异叶马瓞儿 根在此处有葫芦素B的吸收峰，说明其中含葫芦 素B，正品及南方栝楼根中不存在葫芦素B或含量 在4／100000以下。刘莉等¨列发现正品天花粉中 含瓜氨酸和丙氨酸，而湖北栝楼根不含丙氨酸。 1．3．2紫外光谱鉴别 紫外光谱研究发现¨1。，天花粉的乙醇溶液最大 吸收在213nm处，而湖北栝楼根则拥有221、266 nm两个最大吸收。在(231±2)、(243±2)、(269± 2)nm处的二阶导数光谱可以明显区分天花粉、山 药与粉葛根¨引。高捷等¨纠发现，伪品长萼瓜蒌根 的水及乙醇溶液在272nm波长处均有最大吸收，而 天花粉(栝楼和双边栝楼根)在此波长处均无吸收。 1．4 DNA分子标记技术鉴别 黄璐琦等¨钊采用RAPD技术对天花粉药材及 其类似品(包括13个种和3个变种)进行了研究， 通过聚类分析，将其分为3大类，天花粉(栝楼和双 边栝楼根)分在了第1类，而伪品及混淆品分别被 分在第2、3类，为天花粉药材的鉴别提供了1种新 。崔光红等Ⅲ1在RAPD方法基础上，对其引物 和退火温度进行了改进，创建了锚定引物扩增多态 性DNA[anchoredprimeramplificationpolymorphism DNA，APAPD]技术，发现天花粉的特征带为560， 960bp，而伪品湖北栝楼根与长萼栝楼根为686， 800，938，1260bp；木鳖根为770，1373bp；异叶马 瓞儿根为673，786，919，1189bp；王瓜根为865，129 6，2118，2669bp，可以准确鉴别天花粉药材及其伪 品。 1．5蛋白质鉴别 蛋白质的组成及含量的不同，其蛋白黏度也有 一定差异。刘训红等⋯1比较了天花粉与湖北栝楼 根的蛋白黏度，二者分别为1．19和1．15，蛋白黏度 具有显著差异(P<0．01)。徐银芬∞1用NaOH溶解 天花粉生理盐水溶液与三氯乙酸生成的白色沉淀， 滴加CuSO。溶液，根据生成蓝色沉淀的性质区分天 花粉与粉防己。肽图谱分析也是鉴定天花粉蛋白 (trichosanthin，TCS)的重要手段，喻志强等用反相高 效液相色谱(RP-HPLC)法和基质辅助激光解析电 离飞行时间质谱(MALDI．TOF．MS)法¨8|，毛细管区 带电泳(CZE)法u钊分别分析了TCS标准晶胰酶酶 解肽段，得到了TCS胰酶酶解肽段的MALDI．TOF— MS图谱及CZE电泳图谱，可以根据天花粉蛋白样 品肽图谱与之的差别快速鉴别天花粉蛋白的真伪。 2定量分析研究现状 天花粉的主要成分有天花粉蛋白、天花粉凝集 素、多糖、氨基酸、微量元素、毒性成分葫芦素B、重 金属、皂苷、甾醇、萜类、脂肪酸等，一些学者围绕天 花粉化学成分的定量分析开展了研究工作。 2．1蛋白质的含量测定 冯成强等Ⅲ1采用蛋白质免疫技术建立了竞争 酶联免疫吸附试验法，检测了天花粉中的TCS含 量，以10ng为最低检测限，结果在天花粉中其质量 分数为1．35—29．07mg·g～，伪品未检出。 万方数据 324 广东药学院学报 第26卷 2．2多糖的研究 ? 鲁建江等B川采用脱脂：水提醇沉等方法提取得 到天花粉多糖，测定其在100～600nm范围内的最 大吸光度，以苯酚·硫酸比色法测得天花粉多糖质量 分数为0．8409％，平均回收率为97．8％，RSD= 1．96％(n=5)。黄晓兰等陋。将天花粉多糖水解，用 HPLC色谱法分析了天花粉多糖水解产物，结果天 花粉多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖、葡萄 糖、半乳糖6种单糖组成，并结合GC．MS分析，各单 糖的质量比依次为：2．10：13．29：24．14：7．24：21．23 ：31．95。 2．3瓜氨酸的含量测定 杨玉琴等旧1采用薄层扫描法分析不同产地天 花粉中瓜氨酸含量，结果质量分数为0．2564％一3． 6364％，以贵阳5年生天花粉含量最高，并认为瓜 氨酸含量随栝楼生长周期的增长而增高。岳瑞 等Ⅲo于As500nm、AR670nm采用双波长扫描法测 定天花粉中的瓜氨酸含量，以外标两点法计算，瓜氨 酸质量分数为6．O％～9．5％。 2．4微量元素的含量测定 夏侯国论等∞1将天花粉经微波消解，采用空 气．乙炔火焰原子吸收法测定微量元素Fe、Cu、zn、 Mn、Ca的含量，发现Ca含量最高，质量分数达866． 11斗g·g～，Mn最低，为2．68峭·g～，Fe为69．92 峭。g～，Cu为3．5lag·g一，Zn为12．32峭·g～。 2．5葫芦素B的测定 现代药理实验表明，葫芦素B为毒性成分，能 够引起恶心呕吐等不良反应。彭朝霞等汹j采用 50％(体积分数)甲醇提取，HPLC法测定5个不同 产地天花粉及其混伪品的葫芦素B含量。发现天 花粉及其伪品中均含有葫芦素B，以水城产伪品栝 楼根(未说明具体属种)中葫芦素B含量最高，质量 分数达2358mg·100g～，而天花粉的仅为0．210 mg·100g～，前者为后者的10000倍，据推测这是 伪品天花粉极苦的重要原因。 2．6重金属及砷盐的测定 曹敏等口列对不同产地天花粉中重金属铅及砷 盐进行比较，所有样品重金属含量均低于2斗m01． L～，砷盐含量在1—5I止mol·L一不等，差异较大， 为更好地控制天花粉质量，也需对其中毒性成分砷 盐含量进行限制。 2．7农残量测定 LOUJ等Ⅲ1用丙酮提取天花粉，利用GC分析 有机磷农药在中药材天花粉中的残留量。结果以 0．0020～0．0165ng为检测限，共检测到氧化乐果、 甲胺磷、敌百虫、乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷、对硫 磷、亚胺硫磷8种有机磷农药在天花粉中残存。 综上所述，目前天花粉的鉴别多集中在性状、显 微、薄层鉴别方面，虽已有紫外光谱法、DNA分子标 记技术和蛋白质鉴别等多种方法应用于天花粉的鉴 别，但其专属性和准确性仍有待提高。2010年版 《中国药典》一部[天花粉]项只对其进行了性状、显 微、薄层鉴别，“含量测定”项下只增加了其水分、灰 分、浸出物的测定。建议鉴别项中增加其主要成分 TCS的鉴别方法，并在现有实验研究基础上，出 衡量天花粉内在质量的指标性成分以及其规范的含 量测定方法，加强对天花粉质量的控制。 另外，葫芦素B是目前常见天花粉伪品湖北栝 楼根的重要成分，且含量较高，而在正品天花粉中含 量甚微；砷盐在不同来源天花粉中的含量差异亦较 大。故建议在天花粉质量控制的国家标准中增加葫 芦素B和砷盐的毒性限量标准，从根本上保证药材 的安全性。 参考文献： [1]中国药典委员会．中华人民共和国药典：2010年版一部 [M]．北京：中国医药科技出版社，2010：52—53． [2]SHAWPC，CHANWL，YEUNGHW，甜耐．Minireview： trichosanthinaproteinwithmultiplepharmacological properties[J]．Ufe弧，1994，55(4)：253—262． [3]叶永菁．天花粉正品、习用品与混淆品的鉴别[J]．海峡 药学，2001，13(1)：48． [4]刘从华．常用中药及其易混品的性状鉴别[J]．时珍国医 国药，2004，I(9)：647—648． [5]徐银芬．粉防己与天花粉的鉴别[J]．时珍国医国药， 2002，13(10)：621． [6]赵秀丽，董静．八对易混淆中药饮片的快速鉴别[J]．实 用医技杂志，2002，9(4)：278． [7]楼之岑，秦波．常用中药材品种整理和质量研究北方编 第3册[M]．北京：北京大学医学出版社，2003：690— 695． [8]荫少民，黄颖雅．中药天花粉类的商品鉴别研究[J]．临 床医学工程，2010，17(2)：114—116． [9]刘川玉，唐建红．天花粉正品与常见伪品的鉴别[J]．华 夏医学，2009，22(4)：707—708． [10]季龙宝，袁瑶．天花粉及其伪品的鉴别[J]．基层中药杂 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欧洲国家提交申请。Almirall公司将负责Sativex在欧洲的销售(不包括英国)。 (http：／／www．ehemdrug．conl姚立新供稿) 万方数据 天花粉的真伪鉴别及定量分析研究进展 作者： 孙俊英， 郭庆梅， 王鹏， 周凤琴， SUN Jun-ying， GUO Qing-mei， WANG Peng， ZHOU Feng-qin 作者单位： 山东中医药大学,药学院,山东,济南,250355 刊名： 广东药学院学报 英文刊名： JOURNAL OF GUANGDONG PHARMACEUTICAL COLLEGE 年，卷(期)： 2010,26(3) 参考文献(28条) 1.中国药典委员会 中华人民共和国药典:2010年版一部 2010 2.SHAW P C;CHAN W L;YEUNG H W Minireview:trichosanthin a protein with multiple pharmacological properties 1994(04) 3.叶永菁 天花粉正品、习用品与混淆品的鉴别[期刊]-海峡药学 2001(01) 4.刘从华 常用中药及其易混品的性状鉴别[期刊论文]-时珍国医国药 2004(09) 5.徐银芬 粉防己与天花粉的鉴别[期刊论文]-时珍国医国药 2002(10) 6.赵秀丽;董静 八对易混淆中药饮片的快速鉴别[期刊论文]-实用医技杂志 2002(04) 7.楼之岑;秦波 常用中药材品种整理和质量研究北方编第3册 2003 8.荫少民;黄颖雅 中药天花粉类的商品鉴别研究[期刊论文]-临床医学工程 2010(02) 9.刘川玉;唐建红 天花粉正品与常见伪品的鉴别[期刊论文]-华夏医学 2009(04) 10.季龙宝;袁瑶 天花粉及其伪品的鉴别[期刊论文]-基层中药杂志 2001(06) 11.刘训红 天花粉及其混伪品苦花粉的理化鉴别 2000(05) 12.姚三桃;王苔琴 天花粉商品的理化鉴别 1992(04) 13.刘莉;孟庆辉 天花粉与相似品的薄层色谱鉴别 2001(02) 14.张丽华;王玉芹;王红艳 二阶导数光谱法在中药材天花粉、山药、粉葛鉴别方面的应用[期刊论文]-沈阳药学院 学报 1994(02) 15.高捷;方琳;沃联群 天花粉与混淆品长萼栝楼的紫外光谱鉴定[期刊论文]-中医药学刊 2005(08) 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2001,13(z1) 3. 杨玉琴.张丽艳.李健.周萍.YANG Yu-qin.ZHANG Li-yan.LI Jian.ZHOU Ping 不同产地天花粉药材中瓜氨酸的含 量测定[期刊论文]-时珍国医国药2009,20(6) 4. 周凤琴.郭庆梅.ZHOU Fengqin.GUO Qingmei 中药鉴定学的学习方法与技巧[期刊论文]-药学教育2008,24(3) 5. 夏侯国论.刘丽华.李银保.XIAHou Guo-lun.LIU Li-hua.LI Yin-bao 微波消解-火焰原子吸收法测定天花粉中的 微量元素[期刊论文]-赣南医学院学报2009,29(3) 6. 陈颖.董孝刚.孟丽.孙海燕.曹银萍.Chen Ying.Dong Xiaogang.Men Li.Sun Haiyan.Cao Yinping 天花粉中总三 萜皂苷的含量分析[期刊论文]-中国野生植物资源2010,29(4) 7. 王海英.刘旭东 天花粉抗肿瘤研究进展[期刊论文]-国医论坛2005,20(1) 8. 郑萍.晏媛 天花粉不良反应综述[期刊论文]-时珍国医国药1999,10(2) 9. 郭庆梅.周凤琴.李建秀.Guo Qingmei.Zhou Fengqin.Li Jianxiu 山东3种金星蕨科植物的比较解剖[期刊论文]- 山东师范大学学报（自然科学版）2007,22(2) 10. 郭庆梅.周凤琴.王汝新.Guo Qingmei.Zhou Fengqin.Wang Ruxin 山东产木贼科草药形态解剖学的研究[期刊论 文]-中草药2000,31(9) 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_guangdyxyxb201003027.aspx