复方益母草颗粒的薄层色谱鉴别

● 2009 2 Vol.19 No.2 ●Pharmacy Today 复方益母草颗粒为医院中药复方制 剂，由益母草、黄芪、延胡索、当归等药材 制成，具有行气活血、袪瘀止痛的功效，用 于血瘀所致的月经不调、痛经、经闭、产后 腹痛或恶露不尽，临床应用多年，疗效确 切。为控制该制剂的质量，本实验通过研 究，采用薄层色谱法对制剂中的益母草、 黄芪、延胡索进行了定性鉴别，建立了一 套针对该制剂的薄层色谱鉴别方法，该方 法专属性强、重现性好、灵敏度高，可作为 该制剂的质量控制标准。 1 仪器与试药 1.1 仪器 定量毛细管；101-2SA型电热鼓风干 燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）； ZF-20D暗箱式紫外分析仪（上海顾村电 光仪器厂）；HN1006B超声清洁器（广州 华南超声设备厂）；RE-52A 旋转蒸发仪 （上海雅荣生化设备仪器有限公司）。 1.2 试药 复方益母草颗粒 （批号分别为 060308、060906、061205，广州市红十字会 医院制）；益母草、延胡索药材［购自广州 采芝林药业有限公司，经专家鉴定：益母 草为唇形科植物益母草 （Leourus ja ponicus Houtt.）的干燥地上部分、延胡索 为罂粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥块茎］；黄芪药材（批号 974-9201，中国药品生物制品检定所）、盐 酸水苏碱对照品（批号 110712-200508， 中国药品生物制品检定所）、延胡索乙素 对照品（批号 110726-200409，中国药品 生物制品检定所）；硅胶 G （批号 20061059，青岛海洋化工厂）；水为纯化 水，其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 益母草的鉴别 取本品 10 g，加乙醇 30 ml，超声处理 30 min，滤过，滤液浓缩至约 5 ml，加于活 性炭－氧化铝柱（活性炭 0.5 g；中性氧化铝 100～200 目，2 g；内径 10 mm）上，用乙醇 30 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇 0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取益母 复方益母草颗粒的薄层色谱鉴别 廖 巍 1，王小英 2 （1.广州市红十字会医院药剂科，广东 广州 510220；2.广东药学院，广东 广州 510224） 摘要：目的建立复方益母草颗粒中主要成分的薄层色谱鉴别方法，为研究该复方制剂的质量标准奠定基础。方法采用薄层色谱分析 方法对该制剂中的益母草、黄芪、延胡索等药材进行定性鉴别。结果各供试品色谱中，在与各自对照品色谱相同的位置上，显相同颜 色的斑点，阴性对照无干扰。结论该鉴别方法专属性强、重现性好、灵敏度高，可作为该复方制剂的质量控制方法之一。 关键词：复方益母草颗粒；益母草；黄芪；延胡索；薄层色谱法 中图分类号：R284.1 文献标识码： 文章编号：1673-4610(2009)02-0044-03 Identification of Compound Herba Leonuri Particle by TLC LIAO Wei1, WANG Xiao-ying2 (1.Department of Pharmacy, Guangzhou Red Cross Hospital, Guangzhou, Guangdong 510220，China; 2. Guangdong Parmacy University, Guangzhou, Guangdong 510224，China) Ab s t ra c t：Ob je c t ive To set up the thin -layer chromatogram differentiation method of the principal ingredients in compound Herba Leonuri particle, and to establish the foundation for the quality control stander. Me t h o d s The TLC method was adopted to distinguish the Herba Leonuri, Rhizoma Corydalis, and Radix Astragali in this drug. Results The characteristic spots on the chromatogram of the preparation were corresponding to the ones of contrast product, and the negative contrast had no disturbance. Con c lu s io n This method has good specialization, reproducibility, and sensitivity. It can be used for the quality control of Compound Herba Leonuri particle. Ke y w o rd s : Compound Herba Leonuri particle; Herba Leonuri; Rhizoma Corydalis; Radix Astragali; TLC 作者简介：廖 巍（1970-），女，本科，主管药师，主要从事医院制剂检验工作。E-mail：iama_cat@163.com 44 ● 2009年 2月第 19卷第 2期 ● 今日药学 草药材 3 g，缺益母草的阴性样品 10 g，同 法制成益母草对照药材溶液与阴性对照溶 液。再取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每 1ml含 5mg的溶液，作为对照品溶液。 按薄层色谱法（《中国药典》2005年 版一部附录 VIB）试验，分别吸取对照品 溶液、对照药材溶液、供试品溶液、阴性对 照溶液各 5 μl，点于同一薄层板上，以正 丁醇-盐酸-水（4︰1︰0.5）为展开剂，展 开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，在 105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱 中，在与对照品色谱相同的位置上，显相 同的橙红色斑点，而阴性对照色谱无此斑 点（见图 1）。 2.2 黄芪的鉴别 取本品 10 g，研细，加乙醇 30 ml，超 声处理 20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加 0.3％氢氧化钠溶液 15 ml使溶解，滤过， 滤液用稀盐酸调节 pH值至 5～6，用乙酸 乙酯 15 ml振摇提取，分取乙酸乙酯液， 用铺有无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸 干。残渣加乙酸乙酯 1 ml使溶解，作为供 试品溶液。另取黄芪药材 2 g，缺黄芪的阴 性样品 10 g，按上述方法制成黄芪对照药 材溶液和阴性对照溶液。 按薄层色谱法（中国药典 2005年版 一部附录 VIB）试验，吸取供试品溶液，对 照药材溶液，阴性对照溶液各 4 μl，分别 点于同一薄层板上，以氯仿－甲醇（10︰1） 为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中 熏 15 min后移至 365 nm紫外灯下观察， 供试品色谱中，在与对照药材色谱相同的 位置上，显相同亮绿色和淡绿色两个荧光 斑点，而阴性对照色谱与对照药材色谱相 同位置上无相应的荧光斑点（见图 2）。 2.3 延胡索的鉴别 取本品 10 g，研细，加甲醇 50 ml，超声 处理 30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10 ml使溶解，用浓氨试液调节 pH至碱性，用 乙醚振摇提取 3次，每次 10 ml，合并乙醚 液，蒸干，残渣加甲醇 1 ml使溶解，作为供 试品溶液。另取延胡索药材 1g，缺延胡索的 阴性样品 10 g，按上述提取方法制成延胡 索对照药材溶液和阴性对照溶液。再取延 胡索乙素对照品，加甲醇制成每 1 ml含 0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。 按薄层色谱法（中国药典 2005年版 一部附录 VIB）试验，分别吸取供试品溶液 4 μl、延胡索乙素对照品溶液及对照药材 溶液各 3 μl、阴性对照溶液 4 μl，点于同一 薄层板上，以甲苯－丙酮（9︰2）为展开剂， 展开，取出，晾干，置碘缸中 3 min后取出 挥干板上吸附的碘，置 365 nm紫外灯下 观察，供试品色谱中，在与对照药材色谱 相应的位置上，显相同的黄色斑点，而阴 性对照色谱无此斑点（见图 3）。 3 讨论 3.1 盐酸水苏碱具有兴奋子宫的作用[1]，为 该制剂中益母草的特有活性成分；黄芪皂 苷具抗氧化作用[2]，为该制剂中黄芪的特征 活性成分；延胡索乙素具有镇痛作用[3]，为 该制剂中延胡索的特征活性成分，因此，通 过这几种活性成分的检出，可控制该制剂 的质量。 本实验曾根据《中国药典》2000年版 一部益母草含量测定项中的方法提取水 苏碱，但展开后得到的色谱图，斑点的颜色 与形状模糊，斑点间的分离度不理想，效果 较差；后用《中国药典》2005年版一部益母 草鉴别项中柱层析的方法进行分离，样品 得到较好的纯化，薄层展开斑点的分离效 果好，显色清晰，获得了较满意的结果，但 缺点是费时较长。 本实验将《中国药典》2005年版一部中 黄芪的鉴别方法加以改进，将原来的“取黄 芪粉末 2g，加乙醇 30ml，加热回流 20min”改 为“取黄芪粉末 2g，加乙醇 30ml，超声处理 20min”，所得样品仅需点样 4μl，即可得到明 亮清晰的荧光斑点，而药典方法需点样10μl。 因此，本实验将黄芪的提取步骤由“加热回流” 改为“超声处理”，不仅简化了操作，而且提 高了提取效率。 （收稿日期：2008-07-21） 1.盐酸水苏碱对照品 2.益母草对照药材 3～5.各批供试品 （060308、060906、061205） 6.阴性对照样品 图 1 益母草的薄层鉴别色谱图（日光） 1.黄芪对照药材 2～4.各批供试品（060308、060906、 061205） 5.阴性对照品 图 2 黄芪的薄层鉴别色谱图 （365 nm紫外光下） 1.延胡索乙素对照品； 2.延胡索对照药材； 3～5.各批供试品（060308、060906、 061205） 6.阴性对照品 图 3 延胡索的薄层鉴别色谱图 （365 nm紫外光下） （下转第 35页） 45 ● 2009年 2月第 19卷第 2期 ● 今日药学 参考文献 1 耿秋菊,刘文娟等．薄层色谱法测 定益母草药材姬雪礼中盐酸水苏碱 含量的方法研究. 中华实用中西医 杂志,2005,18(1):138-139. 2 周光友,郑丽娟．黄芪皂苷对过氧 化氢诱导的肺泡上皮细胞凋亡的作 用 [J]. 泰山医学院学报,2007,28(1): 27-28. 3赵翡翠，赵小琴，李永和．醋制延胡索 中延胡索乙素含量及镇痛作用的对 比研究.新疆中医药,2007,25(2):34-36. 4 中华人民共和国药典委员会. 中国 药典（2005版第一部）[S].北京:化学 工业出版社,2005，94,203-204,212. 全的抗精神分裂症药物且奥氮平持续疗 效更长，不良反应更低的结论（A 级证 据）。马长林等[8]通过奥氮平与利培酮治 疗首发精神分裂症对照研究发现奥氮平 和利培酮对首发精神分裂症均有良好的 治疗作用，且奥氮平组锥体外系反应和便 秘发生率低于利培酮，而体质量增加发生 率高于利培酮组。两组不良反应经处理后 或随着用药时间的延长，症状逐渐减轻或 消失，不良反应轻微均能耐受（A级证 据）。根据这些证据可以得出：奥氮平对于 精神分裂症包括首发精神分裂症的治疗 均有与利培酮相当的疗效，且证实奥氮平 克服了传统 D2受体阻断剂锥体外系不良 反应发生率高的缺点。 4.5 奥氮平和富马酸喹硫平用于儿童 首发性精神分裂症的疗效比较 李东等[9]的奥氮平和富马酸喹硫平 （思瑞康）治疗儿童首发精神分裂症对照 研究发现，奥氮平对精神分裂症阳性症状 的疗效优于富马酸喹硫平,两组不良反应 相对轻。 4.6 奥氮平长期治疗的疗效观察 张红霞等 [10]对奥氮平治疗首发精神 分裂症的 1年随访发现，奥氮平长期治疗 对首发精神分裂症有效，但也存在体重增 加等不良反应。 4.7 奥氮平的剂量与疗程 虽然本次循证未找到大样本的随机、 前瞻、安慰剂对照多中心的临床试验结果， 但大量的小样本研究表明：奥氮平初始剂 量为 2.5～5 mg/d，在 1～2周内增至 5～20 mg/d，经过 8周的治疗，可以取得较好的 抗精神分裂症疗效且副作用较少。因此建 议奥氮平的使用初始剂量为 2.5～5 mg/d， 在 1～2周内增加到 10～15 mg/d，视疗效情 况进行调整。疗效好的可以进行长期的维 持治疗。 4.8 奥氮平的不良反应 奥氮平的不良反应较少，程度较轻， 病人能够耐受。罗诚等[11]的研究发现奥氮 平在治疗 8周时，甘油三酯、胆固醇升高， 到 52周时不再明显继续升高，高密度脂 蛋白（HDL）在第 8周降低，而在 52周时又 有所回升，体质量较治疗前显著增加（A级 证据）。提示奥氮平在用于精神分裂症治 疗时，应注意它对血脂的影响。其他常见 的副作用有：嗜睡、便秘、口干、静坐不能、 震颤、活动减退、头晕、视物模糊等[10]。 5 证据的应用 根据门诊病人提出的问题可以判断， 这些病人未接触过奥氮平，只是通过某种 渠道知道有奥氮平这种药物。回答问题 时，可明确告知该药物是一种新型的非典 型抗精神病药，对难治性精神分裂症、老年 性精神病、少儿的首发性精神病、对精神分 裂症患者认知控制等有较好的疗效，不良反 应轻，一般病人能够耐受，故病人的依从性 较好，可用以长期的维持治疗等。 参考文献 1王艳君.奥氮平与氯氮平治疗难治性 精神分裂症的对照研究.实用药物与 临床, 2007, 10(6):348-349. 2唐振坤,陈德彩,孟宪礼.奥氮平与氯 氮平治疗难治性精神分裂症对照研 究 . 中国民康医学 , 2007, 19 (12): 1021-1022. 3王晓英,王宏刚,王勇,等.氯氮平合 并无抽搐电痉挛与奥氮平治疗难治 性精神分裂症对照研究. 大家健康, 2007, 6(2):6-7. 4王丽莉.奥氮平治疗老年期精神分裂 症对照研究. 天津药学, 2007, 19(6): 42-44. 5季卫东, 方文莉,郭田友,等.奥氮 平对精神分裂症患者认知控制的 影响. 临床心身疾病杂志, 2007, 13 (6):481-483. 6许小梅,王翠敏,李喜波.奥氮平与 利培酮治疗精神分裂症对照研究. 临床精神医学杂志 , 2007, 17 (5): 335-336. 7杨永新.奥氮平与利培酮治疗精神 分裂症对照研究. 中国民康医学, 2007, 19(9):749, 767. 8马长林,帅畅,杨晓丽.奥氮平与利 培酮治疗首发精神分裂症对照研 究.新疆医学, 2007, 37: 33-34. 9李东,常秀华,赵洪宇.奥氮平和思瑞 康治疗儿童首发精神分裂症对照研 究.中国民康医学,2007,19(9): 762,770. 10张红霞,江开达,沈晓玲,等.奥氮 平治疗首发精神分裂症 1 年随访. 中国神经精神疾病杂志 . 2007. 33 (8): 459-462. 11罗诚,杨俊伟,任继平.奥氮平对精 神分裂症患者血脂影响对照研究. 临床精神医学杂志 , 2007, l7 (6): 401-402. (收稿日期：2008-11-19) （上接第 45页） 35