构建Wistar大鼠蛛网膜下腔出血模型

Chin J Nerv Ment Dis Vo1．38．No．3 March 2012 改良“二次枕大池注血法”构建 Wistar大鼠蛛网 膜下腔出血模型☆ 马朝晖 李贵福 罗望池 黄燕” 李铁林 【摘要】 目的 大鼠“二次枕大池注血法”构建蛛网膜下腔出血模型的经验体会。方法 通过对“二次 枕大池注血法”进行步骤简化及改良：①省去穿刺环枕膜、抽取脑脊液步骤；②不必完全显露环枕膜。通过断头 取脑后直接观察判断建模是否成功。结果 术中死亡大 鼠 14只，成功复制蛛网膜下腔出血模型大鼠 120只 (89．6％)。术后 35只模型大鼠出现意识改变 、肢体偏瘫等神经功能缺损症状(29％)。结论 改良的“二次枕大池 注血”法建蛛网膜下腔出血模型具有较高的成功率 ，控制穿刺进针角度及深度，控制注血量和注血速度，防止堵 管是造模成功的关键。 【关键词】 大鼠 蛛网膜下腔出血 模型 【中图分类号】 R651 【文献标识码】 A 自发性蛛网膜下腔出血是临床神经科常见的 重症，有很高的致死率和致残率，故其是基础及临 床研究的热点。“二次枕大池注血”构建蛛网膜下 腔出血模型是 目前最为认可的造模方式。因研究 需要，我们采用 Wistar大鼠进行 “二次枕大池注 血”构建蛛网膜下腔出血模型 134例．取得了一定 的经验，并对造模步骤进行了简化，现汇报如下。 1 材料和方法 1．1 研究对象 SPF级 Wistar大 白鼠 134只，雌 雄各半．鼠龄 10 12周。体质量250～320 g。由南 方医科大学实验动物中心提供。主要器械：PSMB 双目动物手术显微镜(物镜 F200)，显微手术器械 1套(主要包括显微剪 1把，直钳及弯钳各 1把)， 眼科直剪和弯剪各 1把，普通小弯钳 2把，动物手 术固定板 1快 。20cm长线绳 4根。 1．2 “二次枕大池注血”建模方法 10％水合氯醛 (3 mL／kg)腹腔注射麻醉后，大鼠头部及左侧股动 脉区备皮。常规消毒，取俯卧位，以枕外隆凸为中 doi：10．3969／j．issn．1002—0152．2012．03．012 ☆ 广 州 中 医 药 大 学 博 士 后 科 学 研 究 资 助 项 目 (编 号 ： BBK429112K06)：广东省财政厅专项经费(编号：粤财社 2010—5) 广东省中医院脑病三科(广州 510120) 。 通讯作者(E—mail：gdszyyhy@163．corn) 点取约 1．0 am直切 口，分离皮下筋膜，从前向后正 中纵行剪开浅层肌肉约 8 mm，暴露颈夹肌间隙，小 弯钳牵开双侧夹肌，显微剪稍进行分离，并初步定位 枕骨、环椎及环枕膜 ，随后大鼠改仰卧位，手术显微 镜下暴露一侧股动脉。用 1 mL注射器抽取股动脉 血 0-3～0．4 mL，棉签压迫股动脉止血良好后，改俯 卧位．小弯钳牵开双侧夹肌，用注射器针头沿枕骨下 滑至枕骨大孔处刺破环枕膜并稍稍推进到达枕大 池．在 2 rain内将血液注入枕大池；注血后环枕膜穿 刺处填塞明胶海绵一块，俯卧位头低 30。约 30 min。 以利血液沉积在脑底血管周围，缝合头部及股部切 口。48 h后同法抽取另一侧股动脉血 0．2～0-3 mL (1 mL／kg)注入枕大池，制成大鼠SAH动物模型。 1．3 造模成功判定标准 在进行第 2次注血时可 发现大部分大鼠均存在少量血性脑脊液漏出，可 证实穿刺位置在蛛网膜下腔 ；因实验需要造模动 物均需进行心脏心脏生理盐水及 4％多聚甲醛灌 注后断头取脑，在取脑时可见脑底基底池均可见明 显蛛网膜下腔出血。 2 结果 术中死亡大鼠 14只，成功复制蛛网膜下腔出血 模型大鼠 120只(89．6％)。术后 35只(29％)模型大 鼠出现意识改变、肢体偏瘫等神经功能缺损症状。 见图 1。 时顺畅，无明显阻力 ，如果阻力较大 ，而且大鼠突 然出现呼吸心率改变 ，可能损伤了脑干，如单纯阻 力大，考虑血栓堵塞可能，应予以更换，或者清除 血栓。②注血的量和速度。注血的量目前无统一标 准 ．Takata第一次注射采用 0．5 mL，第二次注射 0．3 mL[5] ，吴氏报道采用 0．2mL[9 J，Germano采用 0．4 mL[1o]。注血的量与发生脑血管痉挛的有明显的 相关性，但注血量多容易造成大鼠死亡导致造模 失败。在本组实验中后期，我们采取 1 mL／kg的注 血量，明显比预实验降低了死亡率，而能达到同样 效果。注血的速度至为关键，太快可引起大鼠立即 死亡，太慢容易导致血栓形成以致堵管。建议以 0．15 mL／min的速度(默数 1～20后注射 0．05 mE)。 ③防止血栓形成堵管。血栓形成既可以造成堵管， 亦可浪费采集的血液，故采血及止血应尽快完成。 在采完血后 ，由助手迅速用棉签压迫穿刺口止血， 术者同时解开大鼠的绑缚 ，压迫 2 min左右，穿刺 口无渗血后。填塞明胶海绵一块。如为缩减时间， 可在棉签压迫同时。以纱块制成棉垫覆盖在棉签上 加压，迅速将大鼠改成俯卧位，然后再穿刺注血。 即使如此，血栓形成仍难以避免，故在采血时，可 适当比预定血量多采 0．1～0．2 mL。堵管时，退出 注射器及针头 ，检查血栓位置 ，并清除血栓 ，然后 再进行穿刺，如反复堵管，可反复清除 ，必要时更 换针头。切不可堵管时盲目加压注射 ，造成注射器 的不可控制而刺伤脑干。 由于蛛网膜下腔出血的高致死率和致残率同 样在实验动物身上也会出现，故从动物实验伦理 而言，术者应尽可能的降低手术创伤，提高建模的 成功率。 Chin J Nerv Ment Dis Vo1．38，No．3 March 2012 参 考 文 献 [1] 贾莉 ，孙保亮，张磊．蛛网膜下腔出血性脑血管痉挛动物模型 的制作[J]．中国组织研究与与临床康复，2009，13(41)： 8147—8150． [2] Jeon H，Ai J，Sabri M，et a1．Neurological and neumbehav— ioral assessment of experimental subaraehnoid hemorrhage[J]． BMC Neumsci，2009，10(8)：103． [3] Sugawara T，Ayer R，Jadhav V，et a1．A new grading system evaluating bleeding scale in filament perforation subaraehnoid hemorrhage rat model[J]．J Neurosci Methods 2008，167(2)： 327-334． [4] Gao C，Lju X，Liu W，et a1．Anti—apoptotic and neuroprotec— tive effects of tetram ethylpyrazine following subaraehnoid hem— orrhage in rats[J]．Auton Neurosci，2008，141(1-2)：22—30． [5] Takata K，Sheng H，Borel CO，et a1．Long—term cognitive dysfunction following experimental subarachnoid hemorrhage： new perspectives[J]．Exp Neurol，2008，213(2)：336—344． [6] 孟雷，姜勇，李哲 ，等．大鼠 SAH后的蛛网膜颗粒细胞凋亡 及血清 TNF—a达[J]．中国神经精神疾病杂志，2006，32 (3)：258—260． [7] 高成，陈会荣，刘相轸．三种方法制作大鼠蛛 网膜下腔出血 模型[J]．中国微侵袭神经外科杂志，2008，13(9)：409—411． [8] Pereira Filho Nde A，Pereira Filho Ade A，Soares FP，et a1． Effect of N—aeetyleysteine on vasospasm in subaraehnoid hemor- rhage[J]．Arq Neumpsiquiatr，2010，68(6)：918—922． [9] 吴远水 ，洪涛，叶新运．一种简易大鼠蛛网膜下腔出血后迟 发性脑血管痉挛模型的建立[J]．江西医学院学报 ，2009， 49(6)：1-3． [10]Germano A，Imperatore C，d Avella D，et a1．Antivasospastic and brain—protective effects of a hydroxyl radical scavenger (AVS)after experimental subaraehnoid hemorrhage[J]．J Neu— rosurg，1998，88(6)：1075-1081． (收稿日期 ：201l—O8—28) (责任编辑：甘章平)