白降丹对小鼠肾脏的毒性和机理探讨

江苏中医 年第 卷第 期 白降丹对小鼠肾脏的毒性和机理探讨 南京 中医 药大 学中医 外科教研 室 陈 荣明 指 导 许芝银 提 要 通过 肾脏汞含量 、 丙二醛 含量 、 肾功 能 肌 醉 、 尿 素氮 测 定 、光镜和 电镜观察 肾脏 的 病 理 变化 、 显 示 汞 的金属 硫化物 —银 法 少 特 染切 片显 示 汞在 肾脏 中的 沉积部位等手段 , 研 究经 皮肤创 面 较 长 时 间 外用 不 同 剂 量的 白 降丹 对 小 鼠 肾脏的毒性 , 发现每 日 外用 昭 、 昭 白 降丹 对 小 鼠 肾脏 的病理损 害不 明 显 , 而 用 昭 白 降丹则可产生 明显 的病理损 害 , 且 小 鼠 肾脏 中 的 入叮 气含量明 显增加 , 从而 为 白 降丹 的 临床合理运用提供 了依据 。 说 明 白 降丹 对 小 鼠肾脏的毒性机理可 能与 引起 肾脏脂 质过氧化作 用增 强 有关 。 关健词 白 降丹 肾脏毒性 汞 丙二醛脂质过氧化作 用 白降丹 出 自清 · 吴谦等编著的 医学金鉴 · 外科 心法要 诀 》, 是 以 朱砂 、 雄 黄 、 水银 、 硼 砂 、 火 硝 、 白 矾 、皂矾炼制而成 , 主要成分是抓化汞 , 具有腐蚀 、平 衡之功 , 疗效确切 , 是 历 代 中医 外科临床 的常用 药 物 。 诚如清 · 顾世沮《疡医大全 · 卷七 · 痈疽门丹散主 方 所云 “ 外科若无升降二丹 , 焉能立刻奏效 。 ”但白 降丹 的毒性较大 , 使用不当会引起 中毒 , 故通过皮肤 创面外用白降丹对小 鼠肾脏的毒性研究 , 来探索其 安全用药剂量 , 以冀为临床合理用药提供依据 。 材料与 主要药物 白降丹 。 动物及处 理 小 鼠 只 , 雌雄各半 , 体重 为 士 , 按随机 区组设计分成 、 、 、 四组 , 每组 只 。 各组每只小 鼠于第 天在胸背部剪去一 直径为 的圆形皮肤 约 占体面积的 , 第 天起创 面 给予每 天 换药 次 。 组 对照组 用凡 召寺幸奋幸毛幸毛沼毛甲毛幸毛幸含召毛甲毛孚会甲含甲咯召会沼哈幸专沼希甲味召毛召告召毛召会召希召告召毛书告甲会召去幸毛沼告沼会召公 会幸念书会沼告沼会 会召会幸毛甲含幸盆毕咯 , 均为 又士印 , 下同 , 〕, 说明 这种升 高是由于胰岛素受体敏感性降低所致的代偿 性反应 。 血 中毛 水平无明显变化 , 但 甲状腺组织 病理显示其甲状腺激素分泌水平明显低于 对照组 , 两组间体温无 显 著性差 异 , 但脾 虚组 动物呼吸 频率 显著低于对照组 对照组和脾虚组分别为 士 次 乃于 和 士 次 汾 , 〕, 说明其甲状腺功能仍有降低 。 脾虚组动物有 身体发育障碍 , 可能与此有关 。 辜丸和 卵巢组 织病理无显著变化 , 但阴道细胞涂片显示脾虚组 动 物动情间期延长 , 反映于 雌性激素水平降低 。 胃 动素水平有降低趋势 , 反 映 胃肠 运 动功 能和植物神 经功能有改变 。 肾上 腺组 织病理 和 血 中皮质 醉水平 , 胃泌素水平无明显 改变 。 组 内各激素水 平间相关 表明 , 脾 虚组 动物 内分 泌 系统 的有序 性低于对照组 , 这 可 能 比单个 激 素指标更 反 映 其病 理本质 。 脾虚状态下 内分泌系统的功能紊乱 , 可 能是 “ 脾 胃内伤 , 百病由生 ”的重要病理基础 。 上述研究结果 与临床脾 虚证 研 究结果基本 吻 产 之、 〔书 〕 口 参考文 献 王淑 兰 , 等 马属 动 物 驴 “ 脾气虚 ”证 的 实脸 研 究 中医 杂 志 望洲 陈 小 歼 等 大 鼠长期 脾虔 造 模 的 实脸 研 究 中国 中 医基 础 医学杂志 以 州 司 诬 〕 另「犯 , 回 阳 的 邵记 奥幻 危 北 海主 编 中 医 脾 胃 学 说应 用 研 究 北 京 能 京 出 版 社 , 王 建华 脾主 运 化 的 现代研 究进展与 展 望 广 州 中医 学 院 学报 修 回 日期 更场一以一 江苏 中医 年第 卷第 期 士林纱布换 药 , 、 、 组 分别外 用 白降丹 巩 、 双 、 昭 换 药 , 并 用 固定 带 包 扎 固 定 , 松 紧适 宜 〕 连续换药 巧 天后 , 小 鼠称重 后 采血 、 处 死 , 解 剖 出 肾 脏并称重 进行病理 取材 、 制作 的肾脏组 织 匀浆 备用 。 观察指 标 及 其 方 法 肾脏 汞 含量 利 用 硫 酸一 高锰酸钾氧化标本 , 原子吸 收光谱法测 定 所用 仪器 为上海华光仪器 厂 生 产 的 一 测 汞 仪 。 肾脏 卜 〕 的含量据硫代巴 比妥酸反应 法〔‘〕用南京市建成 生物工程公 司生产的试 剂盒测定 。 血 肌 醉 、 尿 素氮 用 自动生化分析仪测定 。 ’肾脏 病理切 片 中 , 苏木 素 伊红染色切片及 电镜切 片按 常 规方 法 制作 显示 汞 的硫化 物一银 法特染 切 片 据 毛 的 方 法 加 以 改 进 , 标本用含硫化钱 的 的 乙 醇 固定 , 切 片 脱蜡 后用显影剂 原组 成 中的阿 拉伯树胶 改 为 的 明 胶 , 余相 同 显影 , 苏木 素复染 , 组 织 中的汞 显 棕黑 色 , 胞核显蓝色 。 统计方 法 随机 区 组设计 的方差 分析均用 “ 医 用统计程序集 卜侣一 ” 上海科学技术出版社 出版 处理 。 结果与分析 肾脏 汞含 量 每 两 组 间小 鼠肾脏 汞 含 量 的 比 较均有显 著性 差 异 , 或 , 见 附表 。 说明小 鼠皮肤创面 外用 白降丹 后 , 肾脏 的汞 含 量均 高于对照组 , 并 随所用 白降丹剂量的增 大而升高 。 附表 外用不同剂 的白降丹对小鼠肾脏的影响 例数 汞含量① 均浆中② 洒 含量 只 昭 磨 儿 肌醉③ 尿素氮④ 爪 儿 阳 ℃】儿 识 的白降丹后 肾脏 的脂质过 氧化作用 无 明显 增 强 , 若用 名 白降丹 则 肾脏 的脂 质过 氧化作用 明 显增强 。 肌 醉含童 各组 无 显著性 差异 。 尿 素氮含量 各组 无 显著性差异 。 ’肾脏病 理 变化 伍 染 色切 片 各 组 小 鼠 肾小球未见 明显 结 构异常 、 组 肾小 管 结 构无异 常 , 组偶见 肾小管 轻度肿胀 , 组部分肾小管肿胀 、 变性 、 坏死 , 偶见肾 小管管型 , 且 肾小管的损伤以远 曲小管为著 。 人 特染切 片 、 、 组 肾小管未见 明显 汞 沉积征 象 , 组 肾小管有汞沉积征象 。 电子显微镜 选取各组小 鼠的肾脏作 电镜切 片观察外用 白降丹 后 肾脏超微结构 的改 变 。 、 、 组肾脏的微绒 毛清晰 , 细 胞 器存在 , 胞核核膜 清楚 , 染色质正 常 组 肾脏 的部分 肾小 管坏死 , 以远 曲 小竹最明显 。 曲管上 皮微绒 毛脱落或呈 空 泡状 , 上 皮的部分细胞器消失 , 胞核染色质松解 , 中心 部凝结 成块 。 外用实验剂 量 的 白降丹 , ’肾脏 的 汞 含量 均有 不 同程度的 升高 , 且 随外 用 白降丹 剂 量 的增 大而 升 高 , 当每 只小 鼠每 次外用 白降丹 的剂量达 时 肾脏 中的 入亚 〕 含量 尚未 出现 明显 的升 高 , 病理损害 亦不 明 显 当剂 量达 堪 时 , 肾脏 中的 入恤 含量 显著升高 , 部分肾小管产生 了 明显 的病理损害 , 且 以 远 曲小管为著 , 所损害 的 肾小管有 明显 的汞 沉积征 象 , 但小 鼠的肾功能尚未出现明显 的异常 。 讨论 白 降丹毒性 作 用 的 机理 生物膜 中多不饱和 脂肪酸 巧下 在 自由基 的攻击下发生脂质过 氧化作 用 廿 , 形 成 脂 质 过 氧 化 物 , 终 末 产 物 为 入皿〕 。 入恤〕 含量的变化被认 为是反映细胞膜中多不 饱和脂肪酸发生脂质过氧化程度的可靠指标 , 从而 间接地反映细胞损伤的程度川 。 肾脏组织的细 胞膜 系统中有丰富的脂类物质 , 故测定肾脏 中 皿〕 的含 量可反映肾脏损伤的轻重闭 。 小 鼠皮肤创面外用 白 降丹后 肾脏 叭 含量明显增加 , 说明肾脏的脂质过 氧化作用 增强 。 因此外用 白降丹 对 肾脏损伤 的机 理可能是 皮肤创而外用 白降丹 , 其中的抓化汞被 吸 收进 入血液 , 并在肾脏中蓄 积 , 从而诱发 自由基的产 生 , ’肾小管细胞膜 上 多 不饱 和 脂肪 酸 在 自由基作用 下 , 脂质过氧化作用 增 强 , 引起细胞功 能 障碍 , 使细 胞发生肿胀变性 , 最终导致肾小管坏死 。 白 降丹 对 肾脏 的 损 伤 有报道认 为汞对 肾脏 的毒性 , 主要 是 对 近 曲小 管 的损 伤闭 。 而 本 实验 中 组别 士 土 土 士 士 士 土 士 士 土 士 士 土 士 士 土 注 随机 区 组设计 多个样 本均数 间 的 两 两 比较 ① 检验 每 两 组 间 的 比 较 均 有显 著性 差 异 ② 检验 组 与 、 、 组 相 比 均有显 著性 差 异 或 , 其余每两 组 间 的 比 较 均 无 显 著性 差异 。 ③ 检验 , , 故 无 显 著 性差 异 。 ④ 检验 二 , 二 , 故 无 显 著 性 差异 。 肾脏 入心 气含量 、 、 组 无显著性差 异 , 与 组有 显 著 性 差 异 , 说 明 外 用 名 或 江苏中医 年第 卷第 期 综 述 提 要 蚂 蚁食 疗在 我 国 已 有 洲 多年 的 历 史 , 存 有丰 富 的 文 献 和 临 床 经 验 。 近 年 来 , 在 其 成 分 分 析 、 药理 作 用 研 究 等 方 面 取 得 很 大 进 展 , 并 广 泛 应 用 于 临 床 , 治 疗 类风 湿性 关 节 炎 、 乙 型 肝 炎等 多种 病 症 。 本 文 仅 简略 综 述 此方 面 的 研 究进展 。 关键词 蚂蚁食疗 蚂 蚁 属 于 蚁 科 昆虫 。 据 年 统计 , 世 界 上 已 发 现 有 个 亚科 , 近 阴 种 。 我国已知有 个 亚 科 日 多 种 包 括 亚 种 。 其中记载药用 的有 以 下 几种 鼎 突多 刺蚁 劝 坛 诉 ‘双 、 树 蚁 ‘ 、 黑 山 蚁 川 肠 、 血 红 林 蚁 劝 肠 、 赤 蚁 、黄惊蚁 块 叩冲 等〔‘〕。 目 前 国内研究 与应 用 最 广 泛 的 是 鼎突多刺蚁和血红林蚁 。 历史沿革 我 国古 文献 中对 蚂蚁 的 记载较多 , 仅名称即有川 纸 、 蚁蟀 、元驹 、州 、 马 蚁 、 玄驹等 , 对其滋补作用 的记载 , 最 早见 于 周 礼 · 天 宫 》和 礼 记 · 内 南京军区后勤部药检所︵南京军区南京总医院︵口 李松林张俊慧马爱华 谢学建 概况 在光镜和 电子 显微镜下观 察病理变化均表明 白降丹 制剂对肾脏的损 害 以 远 曲小管 为明 显 , 近 曲小管次 之 , 肾小球的损伤较轻 。 实验 用 药 别 童 与 临 床 用 药 剂 量 的 关 系 只 小鼠皮肤创 面每 日外用 蜘 白降丹 , 连续换 药 天 , 对 肾脏的毒性不明显 , 通过小 鼠与人 的用 药量 换 算 按体表面积 比 , 由此可 以 推 断 , 成人 较长时 间 连 续外用 白降丹 , 每次用量 不超过 可能是 比 较安 全的 。 本实验动物为非感染性创面 , 外用 白降丹 后 汞的吸 收速度 比感染性创面 可 能要 快一 些 , 窦道 和 瘩管的管壁为瘫 痕组织 , 外用 白降丹时汞 的吸收 速 度更慢 , 吸收量更少 , 故外用 白降丹 的剂量 可适 当放 宽 , 但也不 能用得太多 。 对 临 床 外 用 白 降丹 的 看法 尽管 白降丹有一 定的毒性 , 但只要我们能够掌握 正确 的使用方 法 , 就 有可 能减轻其毒副作用 。 对其使用方法提 出如下 建 议 严格 掌握适 应症 , 避免滥 用 因其毒性较升 丹为大 , 故主要 用 于 对 升丹 无效 的顽 固 性 瘩管 、 窦 道 、骨结核 、淋 巴 结核 等 , 对 患 有 肾脏疾病 或 肾衰者 禁用 。 用药剂量要小 每次外用 白降丹 的量最好不 要超过 昭 , 由于 用量较小难 以掌握 , 故常加人赋形 剂 , 如用米糊制作成条使用 。 用药时间要 尽量 缩短 外 用 白降丹 以 “ 腐去 即止 ”为原则 , 在用药期间 , 配合手术 治疗 , 如适 当扩 创引流 、腐烂组织 的修剪 、 死骨 的清除等 , 可 缩 短疗 程 , 从而缩短外用 白降丹的时间 。 使用白降丹制剂要 配合使用保护 肾脏 的药 物 由于 白降丹毒副作用的主要靶器官是肾脏 , 因此 在使用白降丹时运 用利尿 药物并多饮水 , 或者运 用 驱汞药物 如 口 服二琉基丁 二酸 以 促进汞 的排泄 , 可减轻白降丹对肾脏的毒性 。 总之 , 白降丹具有平裔腐蚀 之功 , 疗效较好 , 但 有一定的毒副作用 , 应探索降低其对 肾脏 毒性 的方 法 , 并尽力寻求与 白降丹功效相当的无毒代用品 。 参考文献 齐风 菊 , 等 血 装 丙二醛含 的 浏 定 方 法 —改 良的八木 国 夫法 第一 军 医 大 学学报 金一平 , 等 慢性 份炎血 装中 口叹 含 童及 红 细 胞 内 岌万 活性 的砚察 中华 肾胜 病杂志 卯 郊狄克 等 自由基杭 氧 自由基 系统在慢 性 肾功 能 不 全 发病机理 中的探讨 中华 斧脏病 杂志 卯 王 淑芬 汞 中毒临床研 究进展 中国公共 卫 生 哭】 夕刃 【收稿 日期 二 一 一 、、‘尸 、 砂 妈蚁食疗研究 则 “纸酿 以供天子馈食 ” 。 “ 纸醛 ” 即 用 蚂蚁 的幼虫 做成的酱 。 唐 · 刘询《岭表录异 中有 “ 交广 溪炯 间 酋长 , 多取蚁卵 , 淘净 以酱 , 云 味似肉酱 , 非尊贵不可 得也 。 ”可见其珍 贵 。 用 蚂 蚁粉炼 蜜治筋骨软弱症 , 也早在汉代民间就有流传 。 本 草记载蚂蚁药用最早 的当推 马 王 堆 出 土 的《养 生 方 》, 其 中记 载有 “ 赤 蛾 ”川 , 即赤蚁 红蚂蚁 , 与其它药共制成药 巾 , 用于 温足 补气 , 振奋性机能 。 唐 · 陈藏 器 本草拾遗 对蚂 蚁药用亦有记载 , 原 书 已 佚 , 佚文 收辑在 宋大观 · 唐 慎微纂集的《经史证 类 备急本草 中 , 载有独 角蚁 的 形态及 治疗作用 。 宋 · 强 惠存 重 修政和 经史证类备 急本草 》第二 十 三 卷虫 部 下 品 载 “ 独角蚁 功 用 同赤