中 药 药 理 与 临 床 199 1 ; T ( 5 )
脾虚小鼠模型及健脾中药治疗的形态药理学研究
许长照 马永华 卞慧饭 张瑜瑶 朱 宏 王 耿
(南京中医学院 南京2 1 0 0 2 9 )
提要 甘改食失节型脾度 小 鼠模型 及用四君子汤和祁白术村其治疗后 与正常衬
照组 、 自然恢复组进行全 身各系统的形态学观察比较 , 结果 : 脾度组具有以 消化 系统
为主的特定病变 , 其他 系统也有涉及 夕 以呼吸 、 生 位 、 免疚 、 内分泌等系统影响较
大 , 一四君子 汤和祁白术对此脾虚证有显著的促 复健作用 。
关钻词 脾虚动物模型 ; 四君子汤 , 祁白术 ; 形态药理学
国内外有关脾虚证的动物模型的复制方法 , 不
外苦寒泻下药物 、 劳倦 、 饥饱无常和甘肥过度 、 偏
食以及饮食失节等方面 , 并用健脾药复健以反证模
型的可靠性扛’一 了二, 但所用指标多限于生理 、 生化的
功能检查 , 在病理形态方面仅对某 些 脏 器 、 组织
(如消化或免疫器官) 进行观察 , 尚未见到对全身
各系统的形态学观察的报道 。 为此 , 我们用纯种小
白鼠作饮食失节脾虚造型 , 并以健脾药治疗复健 ,
尽可能多地观察了全身组织 、 器官的病理及其恢复
情况 , 并分析其与脾虚证的关系。
材 料 与 方 法
一 、 造橄动物 健康纯种小白鼠 Ba lb/ C 由南
京医学院实验动物中心提供 , 雄性 8 周龄 , 体重20
、2 4 . 59 (X 士S D “ 2 2 . 6 士1 . 19 ) , 40 只 随 机分成
4 组 , 第 1 组为正常对照组 , 第 2 ~ 4 组为脾虚造
模组 , 10 天造成脾虚证动物模 型 , 第 11 、20 天第
2
、
3 组分别以四君子汤及祁白术治疗 , 第 4 组为
~ 、 呜、. ~ 、勺 、、 、矛 、~ 、
. 、、 、、 、 .、、、 、 、、 . 、、 、、 、灿 、z 、 归、“、曰 、“, 、产、“、曰 、r 、目 、曰,
Pro te e tiv e Effe e t o f A Chin e se He rba l P rePa r a tio n
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e ere b r a l ise五e nz ia in hu 艺口a n .
中 药 药 理 与 临 床 199卜 7 ( 5 ) 3立
自然恢复组 .
二 、 造模方法 室温18 ℃ 左右 喂养 , 自由饮
水 , 正常对照组喂小鼠专用饲料配方 制 成 的硬饲
料 . 造模组喂饲甘兰 (清水洗净后用过锰酸钾液消
毒) , 隔日加喂猪脂 (不限量) , 喂养10 天 , 逐日
称体重 、
精神状态 、 活动情况 、 毛色 、 脱肛及
粪便等 , 并到血红蛋白量及大便常规检查 。
三 、 治疗方法
1
. 制剂 按参 (党参 ) 菩 、 术 、 草 3 、 2 、
2
、
1 比例或单用祁白术 (药材均经鉴定 ) 水煎 2
次 , 浓缩制备19 / m l之四君子汤液或祁白术液 。
2
. 治疗方法 小鼠按每克体重相当于临床30
倍药量灌胃 , 灌胃四君子汤或祁白术液 , 第 4 组给
蒸馏水 , 每只小鼠均用0 . 5毫升 , 每晨 1 次 .
四 、 取材 造模及洽疗后分批拉颈处死小鼠 ,
作肉眼观察后 , 取脑 、 心 、 肺、 舌、 领下腺 、 胃 、
十二指肠 、 大、 小肠 、 肝 、 脾、 胰 、 肾 、 膀肤 、 争
丸 、 肾上腺 、 甲状腺 、 胸腺 、 肌肉等作病理形态学
检查 , 其中胰 、 胃 、 小肠固定于 5 %戊二醛中作透
射及扫描电镜 (另文报道 ) ; 肝 、 肌肉固定于无水
酒精中, 作PA S过碘酸雪夫氏法糖原染色〔‘〕; 其余
组织均固定于 10 % 中性缓冲福尔马林液作 H E 染色 ,
光镜检查 。 观察切片采取双盲法 , 专人负责 , 集体
读片 。
结 果
一 、 体皿 正常组与造模组在造模前体重无显
著差异 (又士s D 分 别 为 22 . 05 士 1 . 48 , 22 . 05 士
0
.
86
,
2 2
.
0 5士0 . 6 4 , 22 . 10士1 . 4 1 ) , 造模后小鼠
体重明显降低 ( X 士SD 分别为2 4 . 0 4士1 . 25 , 14 . 99
土0 . 5 2 , 1 4 . 93士0 . 4 8 , 1 5 . 0 8士1 . 16 , t = 18 . 4 7 ,
21
.
69
,
16
.
6
,
P < D
.
00 1 )
, 但经治疗后 正 常组与
四君子汤组 、 祁白术组及自然恢复组比均无显著差
异 (贾士SD 分别为 2 6 . 13士0 . 92 , 2 5 . 9 士 0 . 7 3 ,
24
.
82士1 . 7 4 , 2 5 . 7 8士1 . 0 0 ) 。
二 、 一般襄现 造模第 3 天即见纳少 、 少动 ,
第 5 天见踌缩、 竖毛 、 大便稀烂状 、 日见消瘦 , 第
7 天见群聚、 伯冷 、 无力 、 松毛无光 、 大便澹泄 、
脱肛 、 闭目无神、 反应迟钝 , 第10 天 见 小 鼠均卧
倒 , 甚至无力爬行 , 闭 目不动 , 皮色变黄白失去光
泽 , 大便隐血试验阳性 . 经灌药治疗后 , 四君子汤
组及祁白木组逐日见食欲 、 体 重 增 加 , 活动力增
强 , 毛发有光泽 , 松毛消失 , 大便成形及隐血试验
(一) . 自然恢复组比前二组差 , 毛发光泽度差 ,
偶见松散状 , 活动力差 , 腹部略膨胀 .少数大便未成
形 , 镜检粘液及食物残渣 , , , 白细胞 4 、6 /高倍 ,
红细胞 O、3/ 高倍 , 脓细胞2、4/ 高倍 .
三 、 血红班白洲定 5 只脾虚组小鼠的血红蛋
白X 士S D (以L , 下同) 为邻士5 . T , 治后 5 只四君子
汤组为125 士 5 , 5 只祁白术组为 116 士2 . 2 , 6 只自
然恢复组为106 . 7士7 . 5 . 四君子汤组 、 祁白术组与
脾虚组比 , 升高均显 著 (t 二 7 . 96 , 6 . 6B . P < 0 . 00 1) ,
与自然恢复组比升高亦显著 (t = 4 . 64 , 2 . “ , P <
0
.
05
, 。. 01 ) , 四君子汤作用较单味祁白术为强 ,
( P < O
.
DI )
, 而自然恢复组与脾虚组相比则无显
著差异 (t= 2 . 12 , P> 0 . 05 ) 。
四 、 病理形态学班寮
1
. 脾虚组
6 只脾虚小鼠肉眼观察见各实质 器官比正常较
小 , 肠胀气明显 . 放大镜观察可见胃肠粘膜散在多
处出血点 , 缺损 . 镜下观察并与正常组相比 , 可见 ;
( 1 ) 消化系统 舌丝状 、 菌状乳头减少 , 丝
状乳头浅层上皮细胞角化过度为主 (偶见角 化不
全 ) , 一级、 二级乳头及菌状 、 轮廓乳头的味蕾相
对减少 , 舌肌 (横纹肌 ) 纤维及横纹消失较多 , 有
散在性酸性变 , 固有膜层肌 肉组 织 间 隙 明显加
大 , 显示水肿 (舌体胖 ) , 味腺中浆液染色较深.
唾液腺 : 领下腺的浆液性腺泡上皮顶部有嗜酸性分
泌颗粒 (其中含少量唾液淀粉酶) , 按 4 级定性定最
为 、~ 十 、 ( , , +为深红色颗粒密集重叠 , , , 为粉红色
颗粒充满腺饱 , 、 为浅红色颗粒稀少 , 一为无色无颗
粒 ) 。 胃 : 前胃 (即食管后部) 鳞状上 皮 角化 过
度 , 胃粘膜表层粘液细胞退变较多 , 显示有缺损 、
糜烂、 脱落及出血 , 胃底腺中主细胞多 (占2 / 3) ,
固有膜高度淤血 . 十二指肠及小肠 : 粘膜破损 、 脱
落、 糜烂 、 溃疡较多 , 肠腔有出血 , 绒毛破损 , 固
有膜淋巴细胞浸润多 , 毛细血管及小 血管 高度淤
血 。 结肠 : 粘膜层上皮及肠腺稍有缺损 , 杯状细胞
增多 , 固有膜炎性细胞 (中性及淋巴细胞) 增多 ,
毛细血管 、 小血管高度淤血 , 固有膜及肌层组织间
隙加大 , 呈明显水肿状 . 肝 : 肝小叶中央静脉周围
肝细胞脂肪变 、 混浊 、 肿胀 , 部分肝小叶高度淤血
及局灶性出血 , 门管区叶间小静脉高度淤血 , 淋巴
细胞浸润多而呈门管区炎 。 胰 : 绝大多数腺泡上皮
完整 、 核大 , 多呈柱状 , 嗜碱性物质 (动质 ) 相对
较多 , 酶原颗粒 (其中为胰脂肪酶 、 蛋白酶 、 淀粉
中 药 药 理 与 临 床 19 9 1 : 7 ( 5 )
酶) 减少 , 以阴性为多 (同领下腺 按 4 级定 性 定
量 ) , 叶间毛细血管轻至高度淤血 。 胰岛内亦见高
度淤血 , 胰岛细胞总数明显减少 (见脏器细胞计数
项 , 表 1 , 下同 ) .
( 2 ) 心血管系统 心肌 : 部分心肌细胞变性
或原纤维 、 横纹消失 , 间质中毛细血管 、 小静脉呈
中到高度淤血 .
( 3 ) 呼吸系统 肺脏 : 肺泡壁增厚 , 其中细
胞数增多 、 呈局灶性间质炎 。 部分肺泡塌陷及代偿
性肺气种 , 肺泡壁毛细血管高度淤血 , 肺泡腔内有
大片或局灶性出血 , 少数小鼠细支气管上 支脱落 、
缺损及纤维细胞增生 , 管腔 内有淋巴细胞及其他炎
症细胞浸润。
( 4 ) 泌尿生殖系统 肾吐 : 肾小球扩大或缩
小 , 毛细血管高度淤血 , 细胞数增多 (见表 1 ) ,
间质小血管及毛细 血 管 高度淤血 , 血浆淤滞 、 出
血 , 近曲小管上皮细胞呈轻 、 中度浊肿 。 膀胧 : 肌
层及粘膜层高度淤血 、 出血 、 膀胧腔中有出血 , 移
行细胞变性 、 坏死 , 偶见脱落 。 辜丸中曲精细管上
皮 、 精原细胞、 初级及次级精母细胞 、 精小细胞均
有程度不等的变性 、 坏死 , 初级精母细胞分裂象未
见 , 精子数偏少 (见表 1 ) 。
( 5 ) 神经 、 内分泌系统 脑 : 部分神经细胞
变性 、 变形 , 胞浆中尼氏体消失 , 核固缩 , 有局灶
裹 1 各组小暇映岛细胞 、 肾小球细胞及象丸曲精细 , 精子橄比较 (X 士50 )
组 别 胰岛细胞总数
正常组
脾虚组
四君子汤组
祁白术组
自然恢复组
29
.
9士1 . 3 (8 )
20
.
3士3 . 5二 (6 )
2 8
.
3士1 . 9 (8)
28
.
3士4 . 6 (7 )
23
.
9土 2 . 2 ‘ . (了)
肾小球细抱数
.
9士2 . 3 (5)
.
2 士2 . 2“ (5)
.
2士2 . 3 (5)
.
5士2 . 5 (5)
.
8士 2 . 9 . (5 )
拿丸曲精细管精子数
30
.
0士1 . 9 (5 )
15
.
4士2 . 2二 (5 )
2 8
.
7士1 . 0 (5)
2 7
.
3士2 . 3 (5)
1 9
.
3士3 . 5 ’ . (5 )
2635ZT2631
与正常组相比 . P< 0 . 05 , 。 . P < O。 01 。 ( ) 内为例数
性坏死区 , 见麻巴细胞浸润 , 毛乡」‘叹管及小静脉中
到高度淤血. , 管周留 有 空 白 区 。 ’肾_ 卜眸; 体积变
小 , 皮质 (球状带 、 束状带 、 网状带 ) 及髓质 (嗜
铬细胞及血窦 ) 均变薄 , 其中皮质毛细血管及髓质
血窦均高度淤血 、 甲状腺滤泡缩小 , 上皮大部为矮
柱状 , 腔内胶质少 .
( 6 ) 免疫系统 脾 : 边缘区淋巴细胞减少 ,
被红细胞替代 , 白髓 (动脉周围淋巴鞘 ) T 淋 巴细
胞区缩小 、 淋 巴滤泡 ( B 琳巴细胞区 ) 稍见缩小 ,
红髓血窦中见中到高度淤血及局灶性出血 。 脸腺 :
整个胸腺变小 , 皮质胸腺细胞层变薄 , 数 目减少 。
2
. 正常组 舌丝状乳头不减少 , 浅层土皮细
胞角化轻 , 1 级 、 2 级乳头多 , 味蕾较多, 舌固有
膜及肌间隙较紧 , 无水神 , 舌体不 胖。 味睐中浆液
染色 , ; ~ ; , 十 。 领下腺浆液性腺泡上皮分泌 颖 粒 十 ,
(个别 十 + , )胃、 十二指肠粘 膜完 整 无 缺 损 。 肝 细
胞偶见轻度浊肿及嗜酸 性 变 , 胰腺味泡酶原颗 粒
+ 十、 , + + , 余均正常 , 胰岛细胞总数见表 1 。 肺则个
别偶见肝泡壁增 厚 , 余 均 正 常 . 脑 、 心 、 肾 、 膀
胧 、 肾上腺均基本正常 , 偶见轻度变化 . 肾小球细
胞总数适度 (见表 1 ) 。 辜丸各级精细胞无异常 ,
分裂象多 , 精子数较多 (见表 1 ) . 脾边缘区妙 巴
细胞及白髓部 T r卜巴细胞较多 , 叮以皮质 、 髓质止
常厚度 。
3
. 四君子汤组 肉眼观察脏器和舌无异丫改
变 , 镜下观察基本与正常无异 , 有些脏器 (如心 、
肺 、 肝) 比正常组变化还少 , 领下腺浆液性腺泡分
泌颗粒及胰酶原颗粒均为++ 、 * 十 , , 胰岛细胞总数 、
肾小球细胞数 、 覃丸精子数与正常无差异 (表 1 ) 。
4
. 祁 白术组 内眼观见腹腔肠 系膜及窦丸尚
围脂 听比正常组少和稀 , 镜下侧察除见舌个别叽内
消有间隙 , 十二指肠绒毛偶见缺损外 , 余与正常无
异 , 领下腺浆液性腺饱分泌颗粒十 ; , 个别 + 。 咦腺腺
泡酶原颗粒 十 * 、 * 十 十 , 个别 一、‘矽卜, 余 与 正 常 无
异 。 胰岛细胞总数 , 肾小球细胞数 、 精子数与正常
无差异 (见表 1 ) 。
5
. 自然恢复组 肉眼见肠系膜脂 防 及 皇 丸
周 围脂肪比正常组多而密 , 十二指肠粘膜面可见散
在糜烂 。 镜下见恢复的脏器 、 组织 较 少 , 如 舌 固
有膜层及肌间隙仍见加大 , 丝状乳头少而不明显 ,
中 药 药 理 与 临 床 1991 ; 了 ( 5 》
角化过度或不全 ; + 二指肠绒毛仍见缺损 , 粘膜 、
固有膜仍见轻~ 中度淤血 ; 大部分结肠粘膜皱壁缺
损 , 固有膜中血管高度淤血 ; 胰腺 腺 饱 酶原颗粒
, 、。 , 胰岛细胞总数仍比正常少 (见表 1 ) . 部分
肺饱壁仍见增厚及淤血 , 细胞数增多 , 肺泡及支气
管内有出血灶 。 肾小球仍见中度淤血 , 细胞数增多
(见表 1 ) , 膀跳部分腔内有 出血 , 肌 层轻度淤
血 . 辜丸内分裂象仍少些 , 精子数仍少 于正 常 组
(见表 1 ) 。 肾上腺皮质仍稍薄 , 胸腺细胞仍少于
正常组 。 脾起户边绝区淋巴细胞及白髓 T 淋 巴细腼仍
不如正常组多 , 血窦中仍见中度淤血
组织化学 肝糖原及肛糖原 (按 4 级分 , 红色
颗粒分布密集 、 充满细胞为“ + , 分布较密为‘ , , 分
布稀琉为 + , 未见糖原颗粒为一 ) 在脾虚组皆 (一 ) ,
正常组 、 四君子汤组 、 祁白术组为 十 +、 、 十 十 , 自然
恢复组则 , 、 * 、 .
脏器细胞计数 胰岛细胞总数 、 肾小 球细 胞
数 、 辜丸曲精细管精子数均任选 39 义 5 ,矿/高 倍计
数 , 取 2 个面积的平均值 。
讨 论
对脾虚造模及健脾中药治疗动物进行全身各系
统 、 组织 、 器官的形态药理学观察是很有意义的 ,
目的既是阐明脾虚证与病理形态学的特定关系 , 又
可通过病理指标来证实健脾中药的药理作用 . 过去
用药物 、 疲劳 、 偏食、 饮食不节等方法造模 , 观察
指标都偏重于功能方面 , 对全身各脏器的病理形态
学改变极少观察 , 为此 , 我们进行了这方面的工作。
根据脾虚证的临床表现有大便洁泄 、食后腹胀 、
喜按 、 面色萎黄 、 食欲减退 、 肌瘦无力” , , 同时还
可有畏寒怕冷 , 神乏无力、 舌淡胖 、 有齿印等脾气
虚 、 脾阳虚等证候 , 在小鼠则 可表 现 为路缩 、 群
聚 、 怕冷 、 无力行走 、 闭目不动 、 竖毛 、 松毛 、 毛
发枯稿等 , 本文发现脾虚证病变除比较集中在消化
系统 (包括胰腺及舌部均有病理变化 ) 明显外 , 其
他系统亦受影响 . 根据脾虚的轻重 , 其病变亦可轻
重不等 , 严童时往往还兼见血淤、 出血及脏腑传变
(由脾及肺 、 肾等) .
消化系统病变有 : 舌固有膜层及肌组织间隙加
大 , 提示水肿, 可能是舌体胖的依据 . 丝状乳头上
皮角化过度为多 , 个别者亦有角化不全 , 提示舌苔
偏厚或薄均可。 菌状及轮廓乳头上味蕾消失或少 ,
味腺分泌减少致影响食欲 . 领下腺分泌 颗 粒 减少
(
,
~
, ·
)
, 为唾液淀粉酶减少的形态依据 , 可影响
糖消化 . 前胃角化过度 , 胃 、 十二指肠 、 结肠粘膜
(包括绒毛 ) 缺损 , 甚至出血 , 肝细胞变性 (浊肿
及脂肪变 ) , 肝及肌糖原减少或消失 , 胰腺腺饱上
皮内酶原颗粒减少 , 胰岛高度淤血 , 胰岛细胞总数
少减 , 这些比较突出的病变必然 会 引起 消化 、 吸
收 、 物质代谢障碍及全身性营养不良 , 因此这些病
变对脾虚 (包括脾气虚 、 脾阳虚) 的证候均可得到
比较合理的阐明 。
其他系统的病变 : 以肺 、 塞丸 、 舰肉 、 免疫组
扣 、内分泌 (肤 、肾 仁腺 、甲状腺 ) 影响较大 , 首先影
晌到肺 、肺泡内及其间质均有明显炎症 、 淤血 、出血
等. 血泣系统见血红蛋白均下降 。 脑及心 gjl 均有局
灶性细胞变性 、 坏死 , 肾小球有 泛症及淤血 , 膀胧
淤血 、 户血 , 特别见架丸各级精细胞变性 、 分裂抑
制 、精子减少 。 免疫组织 (脾及脸腺 )显示胸腺细胞及
蔑巴细胞(特别 T 淋巴细胞)减少 , 致免疫功能降降。
内分泌盼见甲状腺滤泡腔胶质减少 , 肾上腺变小 ,
皮质 、 髓质变薄 , 胰岛细胞总数减少 , 徽循环障碍 .
其激素分泌降低或失调 。说明随着脾虚程度不同 , 可
致血淤 、 出血及脏腑之间传变 ,脾肺 、脾肾两虚等证
均可兼存 , 这些又是病证转化和兼存的形态依据 .
中医强调辨证施治 , 有是证则施是药 。 在动物
造模后 , 为检验证的正确性 , 运用健脾中药反证是
不可缺少的重要环节. 今用四君子汤及祁白术 (安
徽祁门产的优质白术 , 经本院鉴定相当于“于术” )
治 疗 均 能 复健 , 而以四君子汤复健为佳 , 未经治
疗的自然恢复组则延长或不易复健 , 这是从病理形
态上证实了健脾中药的药理作用。 此外 , 又意外发
现祁白术似有降脂作用 (腹腔脂肪减少 ) , 四君子
汤组见脾脏中巨核细胞增多 , 似有促血小板再生作
用 , 这些都是运用形态药理指标的收获 .
, 考 文 欲
6 〕
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北京市中医研究所等: 中华医学杂志
19 82 : (1 ) : 22
、‘、l了、. .沪,且,月,幼产.‘、JI、产..、
产.‘尹.krl毛
3 4 中 药 药 理 与 临 床 19 91 ; 7 ( 5 )
沪气勺气仰飞扩临床研究才乐晓, 怜怜灿映
人参芦皂试治疗冠心病的临床研究— 2 94 例
赵熙灼 梁炳析 洪行球 谢志慧 胡寅官 .
(浙江中医学院 杭州3 10 0 0 9 )
张树 巨 张淑民△
(吉林省中医中药研究院 长春 13 0 0 2 1 )
提要 29 4 例中老 年冠心病患者口服人参芦皂武片的临床观察表明 , 人参芦皂
武 片能缓解冠心病心纹痛应状 , 提高窦性心律 , 时伴发 的多种心律失常有一定疗效 ,
以房性早搏与室性早搏为著。 时心功能有增强作用 , 并能提 高 男 性 辛 酮 (T ) 水
平 , 降低雌二醉 (E 户 及E万T 值 , 时高密度脂蛋白一胆固醉水平也有 提 高 作 用 。
在临床应用二年 多的过程 中, 未发现副作用和不 良反应 。
关. 阅 人参芦皂试 ; 冠心病 ; 动态心电图 ; 高密度脂蛋白; 雌二醇
上海长征医院心 内科 △ 杭州市第四 人民 医 院
(7 〕 南京医学院 : 浙江 中医 杂 志 19 82 ;
(8) : 3 55
〔8 〕 张 哲等 : 实用病理组织染色技术。沈阳 :
辽宁科技出版社 , 1988 : 13 8“140
(9 〕 沈 自尹等 : 中西医结合杂志 1986 ;
( 7 ) : 59 6
Mie e
, 5 M o de l o f Pl D iffie ie ne y a n d lts Stu dy o f M o r pho lo g ie a l
Pha rm a e o lo g y a fte r T r e a tm e n t by T a k in g Me d ie in e fo r In vig o r a tin g the
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