单增李斯特氏菌及其检测方法-修改

小心藏身冰箱的李斯特菌，谨防食物中毒 1、 单增李斯特氏菌中毒事件 1999年美国密歇根州有14人因食用被该菌污染的热狗和熟肉而死亡，其他地区有97人患此病，6名妇女流产； 2008年8月，加拿大暴发了一起因枫叶公司的肉类食品被单增李斯特菌污染而导致的严重食物中毒事件，波及范围较大； 2011年因为食用遭李斯特菌污染的甜瓜，全美有146人患病， 30人死亡。“毒甜瓜”事件是美国十多年来发生的最大规模的食物中毒致死事件。 单核李斯特菌严重感染不仅仅发生在欧美，同样也发生在我国，发生在北京，发生在我们身边。2011年6月和8月，北京朝阳医院感染和临床微生物科相继收治了2例怀孕5-6个月孕妇，因单核李斯特菌感染引起严重败血症，胎儿宫腔内感染，胎死宫内，流产。这两个孕妇的症状非常相似，都现为急性起病，寒战、高热，伴有呕吐、腹部不适，但是没有腹泻症状。发热几天后胎儿死亡，流产。两例病人血培养都阳性，经鉴定为单核李斯特菌。其中一例孕妇胎盘组织也培养出单核李斯特菌，说明母亲先感染，引起败血症，通过胎盘感染胎儿，造成胎死宫内。两例感染孕妇都接受了青霉素治疗，痊愈出院，但是两个胎儿均死亡，给两个家庭造成了永远的伤痛。我们追问病史，其中一位孕妇叙述：因为天气炎热，平时喜欢饮用在冰箱冷藏室冰镇过的矿泉水。 我们的冰箱里的确存在致命的杀手——单核李斯特菌。单核李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的土壤细菌，在环境中无处不在。在土壤中它是一种腐生菌，以死亡的和正在腐烂的有机物为食。单核李斯特菌的特点是：一、分布广：存在于土壤、水域(地表水、污水、废水)、昆虫、植物、蔬菜、鱼、鸟、野生动物、家禽；二、生存能力强：能在2℃-42℃下生存(也有报道0℃能缓慢生长)，在冰箱冷藏室内较长时间生长繁殖；甚至酸性、碱性条件下都能适应。 因此，单核李斯特菌是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。在绝大多数食品中都能找到单核李斯特菌。带菌较高的食品有：牛奶和乳制品、肉类(特别是牛肉)、蔬菜、水果、沙拉、海产品、冰激凌等。 2、 认识单增李斯特氏菌 单增李斯特氏菌，学名Listeria monocytogenes，一种革兰氏阳性菌，是李斯特菌属。李斯特菌属(Listeria)共分为2个群， 7个种：第一群包括单核细胞增生性李斯特菌(L monocytogenes，LM)(亦称产单核细胞李斯特菌)、伊氏李斯特菌(L ivanovii)(亦称绵羊李斯特菌)、英诺克李斯特菌(L innocua)(亦称无害李斯特菌)、韦氏李斯特菌(L welshimei)、塞氏李斯特菌(L seeligeri)，第二群包括格氏李斯特菌(L grayi)和莫氏李斯特菌(L mulTayi)。其中，单增李斯特菌是唯一能引起疾病的人畜共患病的病原菌。它能引起人、畜的李氏特菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。 3、 单增李斯特氏菌检测 1. 细菌培养法 该菌营养要求不高，兼性厌氧，最适在含有CO2的微需氧环境中生长，生长温度范围-1.5℃-45℃，最适温度为30℃-37℃，能在普通冰箱冷藏室生长，是一种典型的耐冷性细菌，同时还具有耐盐性。LM在普通琼脂平板上呈细小直径约0.2-0.4μm、半透明露水样菌落。在血琼脂平板上有β溶血环。在显色培养基上呈蓝绿色。 2. 生化鉴定法 该菌主要生化特性如下： 1 触酶阳性； 2 氧化酶阴性； 3 发酵多种糖类； 4 产酸不产气； 5 不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二塘； 6 不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解； 7 吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性； 8 VP、甲基红试验和精氨酸水解试验阳性； 9 对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20分钟可杀死，70%酒精5min、2.5%石碳酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min可杀死此菌。 10 该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。 3. 血清凝集法 根据菌体抗原和鞭毛抗原，LM分为16个血清型：1／2a、1／2b、1／2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b、7。抗原结构与毒力无关，对人致病的主要为血清型1／2a、1／2b、4b，占全球本病病例约90％。 关于血清凝集法用的诊断血清方面，推荐天津生物芯片公司生产的单增李斯特氏菌全套诊断血清产品，该菌最常见的O：3，O：5，O：8和O：9型的诊断血清 被纳入这套产品，详情如下： 数量 货号 血清品种 规格 全套 IM-LM012 单增李斯特菌诊断血清（成套总计） 1ml*12瓶/套 1 IM-LM012-1 单增李斯特菌诊断血清OⅠ/Ⅱ 1ml/瓶 2 IM-LM012-2 单增李斯特菌诊断血清OⅠ 1ml/瓶 3 IM-LM012-3 单增李斯特菌诊断血清OⅣ 1ml/瓶 4 IM-LM012-4 单增李斯特菌诊断血清OⅤ/Ⅵ 1ml/瓶 5 IM-LM012-5 单增李斯特菌诊断血清OⅥ 1ml/瓶 6 IM-LM012-6 单增李斯特菌诊断血清OⅦ 1ml/瓶 7 IM-LM012-7 单增李斯特菌诊断血清OⅧ 1ml/瓶 8 IM-LM012-8 单增李斯特菌诊断血清OⅨ 1ml/瓶 9 IM-LM012-9 单增李斯特菌诊断血清H-A 1ml/瓶 10 IM-LM012-10 单增李斯特菌诊断血清H-AB 1ml/瓶 11 IM-LM012-11 单增李斯特菌诊断血清H-C 1ml/瓶 12 IM-LM012-12 单增李斯特菌诊断血清H-D 1ml/瓶 4. 核酸扩增法 核酸扩增技术，即聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端，然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增，使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。 单增李斯特氏菌的检测，其特异性引物的设计，一种是依据它的基因组序列中的特异序列（16S或 16S/23S 间区的保守区域），一种是依据它的毒力基因序列（常用hlyA，iap等）。 【相关试剂推荐】 生产商 产品名称 包装规格（次/盒） 天津生物芯片 单核李斯特菌核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒 20 单核李斯特菌核酸扩增（PCR）检测试剂盒 20 单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌核酸扩增检测试剂盒（双色实时荧光PCR法） 20 志贺氏菌、单增李斯特氏菌核酸扩增检测试剂盒（双色实时荧光PCR法） 20 四，预防单增李斯特菌食物中毒措施 随着国内外食品监督部门检测技术的不断提高，以及食品生产安全措施的有效实施，由单增李斯特菌引起的食物中毒事件大大减少，但仍未能完全避免。因此还需加强预防控制措施，减少单增李斯特菌对人群健康的危害。具体预防措施包括： 　　1. 加强食品卫生监督检查，积极开展食品中单增李斯特菌污染的检测，杜绝李斯特菌污染食品进入人们的饮食环节。 2. 单增李斯特菌在自然环境中广泛存在，经过充分热处理灭活单增李斯特菌的食品仍有再次被污染的可能，因此食品在加工储存时应避免二次污染。 　　3. 注意饮食卫生，防止病从口入。尽量避免生吃牛肉、蔬菜，禁食腐烂变质的食品。生食瓜果应洗净。食品的储存和加工中应生熟食分开。 4. 由于单增李斯特菌在4℃下仍然能生长繁殖，因此食用未加热的冰箱食品增加了食物中毒的危险。冰箱存放食品食用前应高温充分加热，温度必须达到70℃持续两分钟以上。注意定期清洗电冰箱。 5. 食品及餐饮相关行业需加强规范操作，包括食品加工制作环节和储存环节，避免单增李斯特菌的污染。 6. 孕妇与免疫能力低下的人应避免食用未经消毒的牛奶、软奶酪和未经煮熟的蔬菜，食物应彻底煮熟后再食用。 _1441606924.unknown