201210375134-一种猪去氧胆酸的-审中

www.soopat.com 注：本页蓝色字体部分可点击查询相关专利 SooPAT 一种猪去氧胆酸的精制方法 申请号：201210375134.2 申请日：2012-09-29 申请(专利权)人苏州天绿生物制药有限公司 山东天绿制药有限公司 地址 215124 江苏省苏州市吴中经济开发区尹中南路1128号 发明(设计)人陆其华 周大海 主分类号 C07J9/00(2006.01)I 分类号 C07J9/00(2006.01)I 公开(公告)号102863497A 公开(公告)日2013-01-09 专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人 王朋飞 张庆敏 (10)申请公布号 CN 102863497 A (43)申请公布日 2013.01.09 C N 1 0 2 8 6 3 4 9 7 A *CN102863497A* (21)申请号 201210375134.2 (22)申请日 2012.09.29 C07J 9/00(2006.01) (71)申请人 苏州天绿生物制药有限公司 地址 215124 江苏省苏州市吴中经济开发区 尹中南路 1128号 申请人 山东天绿制药有限公司 (72)发明人 陆其华 周大海 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 王朋飞 张庆敏 (54) 发明名称 一种猪去氧胆酸的精制方法 (57) 摘要 本发明提供了一种猪去氧胆酸的精制方法， 包括溶解猪胆汁提取胆红素后的下脚料，脱色，过 滤，皂化成盐，调 pH值 3~4，析晶得到猪去氧胆酸 粗品，将粗品进行纯化，获得猪去氧胆酸纯品。整 套方法具有安全无毒，操作简便，成本低，周期短， 产品纯度高，易于大规模生产等优点，具有广阔的 市场前景。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1页 说明书 4页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1页 2 1.一种猪去氧胆酸的精制方法，其特征在于，所述方法包括溶解猪胆汁提取胆红素后 的下脚料，脱色，过滤，皂化成盐，调 pH值 3~4，析晶得到猪去氧胆酸粗品，将粗品进行纯化， 获得猪去氧胆酸纯品。 2.根据权利要求 1所述的精制方法，其特征在于，包括以下步骤： 1）溶解脱色，用 5~10倍重量的有机溶剂回流 1~2小时溶解猪胆汁提取胆红素后的下脚 料，加入下脚料重量 5%~10%的活性炭继续回流 30分钟； 2）过滤后降至 40~50℃，加入碱性物质皂化成盐，降至 15~25℃，保温 1~2小时，过滤得 到猪去氧胆酸盐沉淀； 3）向猪去氧胆酸盐中加入 10~20倍重量的水，加热至 45~60℃溶解，用稀盐酸调节 pH3~4，析晶得到猪去氧胆酸粗品 I，过滤干燥； 4）向猪去氧胆酸粗品 I中加入 5~10倍重量的水溶性有机溶剂，加热回流 1~2小时，待 其全部溶解后降至 15~25℃，向其中滴加水，直至出现混浊物，停止滴加，继续搅拌 1小时， 过滤得猪去氧胆酸粗品 II； 5）向猪去氧胆酸粗品 II中加入 5~10倍重量的水溶性有机溶剂，加热回流 1~2小时，待 其全部溶解后降至 15~25℃，向其中滴加水，直至出现混浊物，立即停止滴加，继续搅拌 1小 时，过滤干燥即得猪去氧胆酸纯品。 3.根据权利要求 2所述的精制方法，其特征在于，步骤 1）中所述有机溶剂任选下组中 的一种：乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙醇、丙酮、异丙醇、仲丁醇。 4.根据权利要求 3所述的精制方法，其特征在于，步骤 1）中有机溶剂的用量为下脚料 重量的 5~10倍。 5.根据权利要求 2所述的精制方法，其特征在于，步骤 2）中使用的碱性物质为二水氯 化钙。 6.根据权利要求 2所述的精制方法，其特征在于，步骤 2）为：过滤后降至 50℃，加入碱 性物质皂化成盐，降至 15℃，保温 2小时，过滤得到猪去氧胆酸盐沉淀。 7.根据权利要求 2所述的精制方法，其特征在于，步骤 3）为：向猪去氧胆酸盐中加入 10倍重量的水，加热至 50℃溶解，用稀盐酸调节 pH3~4，析晶得到猪去氧胆酸粗品 I，过滤干 燥，干燥温度为 75℃。 8.根据权利要求 2所述的精制方法，其特征在于，步骤 4）和 5）中使用的水溶性有机溶 剂任选下组中的一种：甲醇、乙醇、乙二醇、N,N-二甲基甲酰胺、冰醋酸、异丙醇。 9.根据权利要求 8所述的精制方法，其特征在于，步骤 4）为：向猪去氧胆酸粗品 I中 加入 5倍重量的水溶性有机溶剂，加热回流 1~2小时，待其全部溶解后降至 25℃，向其中滴 加水，直至出现混浊物，停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II。 10.根据权利要求 8所述的精制方法，其特征在于，步骤 5）为：向猪去氧胆酸粗品 II中 加入 5倍重量的水溶性有机溶剂，加热回流 1~2小时，待其全部溶解后降至 15℃，向其中滴 加水，直至出现混浊物，立即停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤干燥即得猪去氧胆酸纯品。 权 利 要 求 书CN 102863497 A 2 1/4页 3 一种猪去氧胆酸的精制方法 技术领域 [0001] 本发明属于生物化工领域，具体地说，涉及一种猪去氧胆酸的精制方法。 背景技术 [0002] 猪去氧胆酸又称异去氧胆酸，α-猪去氧胆酸，分子量为 392.58,可以从猪胆汁中 提取得到。猪去氧胆酸为降血脂药，能抑制胆酸的形成及溶解脂肪，降低血中胆固醇和甘油 三酯，适用于 Ia或 Ib型高血脂症、动脉粥样硬化症。对百日咳杆菌、白喉杆菌、金黄色葡萄 球菌等有一定的抑菌作用。它能刺激胆汁分泌，使胆汁稀释而不增加固含量，适用于胆道 炎、胆囊炎、胆石症和其它非阻塞性胆汁郁积 ,尚能促进肠道脂肪分解和脂溶性维生素吸 收，可用于肝胆疾患引起的消化不良。临床上还作为中药清开灵注射剂、清开灵滴丸的有效 成分，是人工牛黄配方的重要原料。 [0003] 目前，猪去氧胆酸主要从猪胆汁中提取，猪胆汁中猪去氧胆酸的含量约为 40%，鹅 去氧胆酸约为 25%，其次是猪胆酸和 3α-醛基 -6-酮基 -胆烷酸，是猪去氧胆酸的主要原料 来源。现有的生产猪去氧胆酸的方法主要包括两种，一种是经皂化、脱色、脱脂后的粗品用 乙酸乙酯结晶，该工艺使用大量的乙酸乙酯，得到的猪去氧胆酸纯度不高，收率低；另一种 是甲酯化法，CN101037463A中公开了一种从猪胆汁中制备高纯度猪去氧胆酸的方法，该方 法利用不同胆汁酸甲酯与苯加成物在苯中的不同溶解度分离得到猪去氧胆酸，该法工艺复 杂，为获得高纯度产品，使用了苯、乙醚、硫酸等有害化学品，对环境不友好，且不利于大规 模生产。 发明内容 [0004] 本发明的目的是提供一种工艺简单，生产周期短，产品纯度高且对环境友好的猪 去氧胆酸的精制方法。 [0005] 为了实现本发明目的，本发明的一种猪去氧胆酸的精制方法，包括溶解猪胆汁提 取胆红素后的下脚料，脱色，过滤，皂化成盐，调 pH值 3~4，析晶得到猪去氧胆酸粗品，将粗 品进行纯化，获得猪去氧胆酸纯品。 [0006] 具体地，前述的精制方法包括以下步骤： [0007] 1）溶解脱色，用 5~10倍重量的有机溶剂回流 1~2小时溶解猪胆汁提取胆红素后的 下脚料，加入下脚料重量 5%~10%的活性炭继续回流 30分钟； [0008] 2）过滤后降至 40~50℃，加入碱性物质皂化成盐，降至 15~25℃，保温 1~2小时，过 滤得到猪去氧胆酸盐沉淀； [0009] 3）向猪去氧胆酸盐中加入 10~20倍重量的水，加热至 45~60℃溶解，用稀盐酸调节 pH3~4，析晶得到猪去氧胆酸粗品 I，过滤干燥； [0010] 4）向猪去氧胆酸粗品 I中加入 5~10倍重量的水溶性有机溶剂，加热回流 1~2小 时，待其全部溶解后降至 15~25℃，向其中滴加水，直至出现混浊物，停止滴加，继续搅拌 1 小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II； 说 明 书CN 102863497 A 3 2/4页 4 [0011] 5）向猪去氧胆酸粗品 II中加入 5~10倍重量的水溶性有机溶剂，加热回流 1~2小 时，待其全部溶解后降至 15~25℃，向其中滴加水，直至出现混浊物，立即停止滴加，继续搅 拌 1小时，过滤干燥即得猪去氧胆酸纯品。 [0012] 前述的精制方法，步骤 1）中所述有机溶剂任选下组中的一种：乙酸乙酯、乙酸丁 酯、乙醇、丙酮、异丙醇、仲丁醇等，用量为下脚料重量的 5~10倍。 [0013] 前述的精制方法，步骤 2）中使用的碱性物质为二水氯化钙等。 [0014] 前述的精制方法，步骤 2）具体为：过滤后降至 50℃，加入碱性物质皂化成盐，降至 15℃，保温 2小时，过滤得到猪去氧胆酸盐沉淀。 [0015] 前述的精制方法，步骤 3）具体为：向猪去氧胆酸盐中加入 10倍重量的水，加热至 50℃溶解，用稀盐酸调节 pH3~4，析晶得到猪去氧胆酸粗品 I，过滤干燥，干燥温度为 75℃。 [0016] 前述的精制方法，步骤 4）和 5）中使用的水溶性有机溶剂任选下组中的一种：甲 醇、乙醇、乙二醇、N,N-二甲基甲酰胺、冰醋酸、异丙醇等。 [0017] 前述的精制方法，步骤 4）具体为：向猪去氧胆酸粗品 I中加入 5倍重量的水溶性 有机溶剂，加热回流 1~2小时，待其全部溶解后降至 25℃，向其中滴加水，直至出现混浊物， 停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II。 [0018] 前述的精制方法，步骤 5）具体为：向猪去氧胆酸粗品 II中加入 5倍重量的水溶性 有机溶剂，加热回流 1~2小时，待其全部溶解后降至 15℃，向其中滴加水，直至出现混浊物， 立即停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤干燥即得猪去氧胆酸纯品。 [0019] 本发明提供的猪去氧胆酸的精制方法，以提取胆红素后的下脚料为原料，从中分 离纯化出猪去氧胆酸，经高效液相色谱检测分析，精制得到的纯品中猪去氧胆酸含量大于 98%，杂质含量小，整套方法具有安全无毒，操作简便，成本低，周期短，产品纯度高，易于大 规模生产等优点，具有广阔的市场前景。 具体实施方式 [0020] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例 中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。 [0021] 本发明中涉及到的百分号“%”，若未特别说明，是指重量百分比；但溶液的百分 比，除另有规定外，是指 100ml溶液中含有溶质的克数。 [0022] 实施例 1猪胆汁提取胆红素后的下脚料的制备 [0023] 取新鲜猪胆汁 1000mL，用 5%氢氧化钠溶液调节 pH值至 12，加热至沸腾保温 2小 时，在搅拌下加入 10%氯化钙溶液 100mL，加热至沸腾，冷却后倾去上清液，过滤，收集胆红 素钙盐。将胆红素钙盐加入 5倍重量的水溶解后，加入适量的偏重亚硫酸钠抗氧化，用稀盐 酸酸化至 pH值 1.5，加入三氯甲烷提取得到胆红素结晶。在过滤胆红素钙盐后得到的上清 液中，按 100g/L加入固体氢氧化钠，加热煮沸 24小时皂化，冷却静置分层，虹吸除去上层淡 黄色液体，沉淀物加入适量的水使之溶解，用稀盐酸酸化至 pH值 2~3,过滤水洗至中性，得 到黄色的固体，即为下脚料。 [0024] 实施例 2以猪胆汁提取胆红素后的下脚料为原料精制猪去氧胆酸 [0025] 称取一定量实施例 1中制备的下脚料，用 5倍重量的异丙醇回流 2小时，加入下脚 料重量 5%的活性炭继续回流 30分钟，过滤后降至 50℃，加入 15%二水氯化钙溶液成盐，降 说 明 书CN 102863497 A 4 3/4页 5 至 15℃，保温 2小时，过滤得到白色的猪去氧胆酸盐沉淀。将猪去氧胆酸盐用 10倍重量的 饮用水，加热至50℃溶解，用稀盐酸缓慢调节pH值3，析出白色的猪去氧胆酸粗品I，过滤干 燥（干燥温度为 75℃）。称取一定量的猪去氧胆酸粗品 I，加入 5倍重量的乙二醇，加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 25℃，向其中缓慢滴加纯化水，直至出现混浊物，停止滴加，继 续搅拌 1小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II，称取一定量的猪去氧胆酸粗品 II，加入 5倍重量 的乙二醇，加热回流，2小时，待其全部溶解后降至 15℃，向其中缓慢滴加纯化水，直至出现 混浊物，立即停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤干燥得到白色的猪去氧胆酸成品，经 HPLC分 析，成品中猪去氧胆酸含量为 98.5%。 [0026] 实施例 3以猪胆汁提取胆红素后的下脚料为原料精制猪去氧胆酸 [0027] 称取一定量实施例 1中制备的下脚料，用 5倍重量的乙酸乙酯回流 2小时溶解下 脚料，加入下脚料重量 5%的活性炭继续回流 30分钟，过滤后降至 50℃，加入 20%二水氯化 钙溶液成盐，降至 15℃，保温 2小时，过滤得到白色的猪去氧胆酸盐沉淀。将猪去氧胆酸盐 用 10倍重量的饮用水，加热至 50℃溶解，用稀盐酸缓慢调节 pH值 3.5，析出白色的猪去氧 胆酸粗品 I，过滤干燥（干燥温度为 75℃）。称取一定量的猪去氧胆酸粗品 I，加入 5重量的 冰醋酸，加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 25℃，向其中缓慢滴加纯化水，直至出现混 浊物，停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II，称取一定量的猪去氧胆酸粗 品 II，加入 5倍重量的冰醋酸加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 15℃，向其中缓慢滴加 纯化水，直至出现混浊物，停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤得到白色的猪去氧胆酸成品，经 HPLC分析，成品中猪去氧胆酸含量为 98.8%。 [0028] 实施例 4以猪胆汁提取胆红素后的下脚料为原料精制猪去氧胆酸 [0029] 称取一定量实施例 1中制备的下脚料，用 10倍重量的乙酸乙酯回流 2小时溶解下 脚料，加入下脚料重量 5%的活性炭继续回流 30分钟，过滤后降至 50℃，加入 30%二水氯化 钙溶液成盐，降至 15℃，保温 2小时，过滤得到白色的猪去氧胆酸盐沉淀。将猪去氧胆酸盐 用10倍重量的饮用水，加热至50℃溶解，用稀盐酸缓慢调节pH3.5,析出白色的猪去氧胆酸 粗品 I，过滤干燥（干燥温度为 75℃）。称取一定量的猪去氧胆酸粗品 I，加入 5重量的冰醋 酸，加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 25℃，向其中缓慢滴加纯化水，直至出现混浊物， 停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II，称取一定量的猪去氧胆酸粗品 II， 加入 5倍重量的冰醋酸加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 15℃，向其中缓慢滴加纯化 水，直至出现混浊物，停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤得到白色的猪去氧胆酸成品，经 HPLC 分析，成品中猪去氧胆酸含量为 99.2%。 [0030] 实施例 5以猪胆汁提取胆红素后的下脚料为原料精制猪去氧胆酸 [0031] 称取一定量实施例 1中制备的下脚料，用 5倍重量的丙酮回流 2小时溶解下脚料， 加入下脚料重量 5%的活性炭继续回流 30分钟，过滤后降至 50℃，加入 30%二水氯化钙溶 液成盐，降至 15℃，保温 2小时，过滤得到白色的猪去氧胆酸盐沉淀。将猪去氧胆酸盐用 10 倍重量的饮用水，加热至 50℃溶解，用稀盐酸缓慢调节 pH3,析出白色的猪去氧胆酸粗品 I， 过滤干燥（干燥温度为 75℃），称取一定量的猪去氧胆酸粗品 I，加入 5倍重量的乙醇，加热 回流 2小时，待其全部溶解后降至 25℃，向其中缓慢滴加纯化水，直至出现混浊物，停止滴 加，继续搅拌 1小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II，称取一定量的猪去氧胆酸粗品 II，加入 5 倍重量的乙醇，加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 15℃，向其中缓慢地滴加纯化水，直 说 明 书CN 102863497 A 5 4/4页 6 至出现混浊物后，立即停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤干燥得到白色的猪去氧胆酸成品， 经 HPLC分析，成品中猪去氧胆酸含量为 99.5%。 [0032] 实施例 6以猪胆汁提取胆红素后的下脚料为原料精制猪去氧胆酸 [0033] 称取一定量实施例 1中制备的下脚料，用 10倍重量的丙酮回流 2小时溶解下脚 料，加入下脚料重量 5%的活性炭继续回流 30分钟，过滤后降至 50℃，加入 30%二水氯化钙 溶液成盐，降至 15℃，保温 2小时，过滤得到白色的猪去氧胆酸盐沉淀。将猪去氧胆酸盐用 10倍重量的饮用水，加热至 50℃溶解，用稀盐酸缓慢调节 pH3.5,析出白色的猪去氧胆酸粗 品 I，过滤干燥（干燥温度为 75℃），称取一定量的猪去氧胆酸粗品 I，加入 5倍重量的异丙 醇，加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 25℃，向其中缓慢滴加纯化水，直至出现混浊物， 停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤得猪去氧胆酸粗品 II，称取一定量的猪去氧胆酸粗品 II， 加入 5倍重量的异丙醇，加热回流 2小时，待其全部溶解后降至 15℃，向其中缓慢滴加纯化 水，直至出现混浊物，立即停止滴加，继续搅拌 1小时，过滤干燥得到白色的猪去氧胆酸成 品，经 HPLC分析，成品中猪去氧胆酸含量为 99%。 [0034] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。 说 明 书CN 102863497 A 6