血清磷测定

null 还原钼蓝法测定血清磷 （实验考试）【实验目的】【实验目的】1、掌握还原钼蓝法测定血清磷的原理 2、熟悉血清磷测定的临床意义 3、了解血清磷测定过程中的注意事项【原理】【原理】以三氯醋酸沉淀蛋白质，在滤液中加入钼酸铵试剂， 使与磷结合成磷钼酸，再以硫酸亚铁为还原剂，还原成 蓝色化合物，与同样处理之标准液进行比色，可求得血 清中磷含量。反应式如下： (NH4)6Mo7O24 + 3H2SO4+4H2O 7H2MoO4+3(NH4)2SO4 12H2MoO4 + H3PO4 12 MoO3·H3PO4+12H2O 12 MoO3·H3PO4 + FeSO4 磷钼蓝【试剂】【试剂】1.0.6mol/L三氯醋酸溶液 称取10g三氯醋酸，加蒸馏水至100ml。 2.磷标准贮存液(3.22mmol/L) 精确称取439mg磷酸二氢钾(KH2PO4，A.R.)，用蒸馏水溶解并定容至1000ml，加入2ml氯仿防腐，贮于4℃冰箱中。 3.磷标准应用液(0.129mmol/L) 取磷标准贮存液4ml，加0.6mol/L三氯醋酸溶液定容至100ml。 4.钼酸铵试剂 在200ml蒸馏水中慢慢加入浓硫酸45ml，再加入22g钼酸铵，溶解后贮于棕色瓶中，置4℃冰箱保存。 5.硫酸亚铁-钼酸铵试剂 称取硫酸亚铁0.5g，加蒸馏水9ml使其溶解，再加钼酸铵试剂1ml混匀。临用时新鲜配制。 【操作步骤】【操作步骤】 1.制备血清滤液 取血清0.4ml，缓慢加入0.6mol/L三氯醋酸溶液7.6ml，边加边摇，充分混匀，放置10分钟，3000r/min离心5分钟，取上清液。 2.按表10-1操作。2.按表10-1操作。 加入物(ml) 空白管 标准管×2 测定管×2 血清滤液 － － 2.0 磷标准应用液 － 1.0 － 0.6mol/L三氯醋酸 2.0 1.0 － 硫酸亚铁-钼酸铵试剂 2.0 2.0 2.0 混匀，放置10分钟，用波长620nm进行比色，空白管调零，读取各管 吸光度。【计算】【计算】 A测 A测 血清磷浓度(mmol/L)= ×0.129×5 = ×0.645 A标 A标【注意事项】【注意事项】 1.为避免细胞内磷酸酯水解而使无机磷增加，血清不能溶血，并应于采血后尽快将血清分离。 2.标本应选用血清，如用血浆，每ml标本内草酸盐含量不可多于2-3mg，过量的草酸盐可使磷测定时不易显色。 【评价】【评价】 还原钼蓝法测定磷呈色稳定，特异性较高。 操作简便，线性范围较宽，可用于自动分 析仪，但此法灵敏度低。【参考范围】【参考范围】成人:1.0-1.5mmol/L； 儿童:1.5-2.0mmol/L 【临床意义】【临床意义】一、血清磷增高的疾病 1.甲状旁腺机能减退：由于激素分泌减少，肾小管对磷的重吸收增强使血磷增高。 2.排泄障碍：慢性肾炎晚期、尿毒症等磷酸盐排泄障碍而使血磷滞留。 3.维生素D过多：维生素D促进肠道的钙、磷吸收，使血清钙、磷含量增高。 4.多发性骨髓瘤、粒细胞性白血病、骨折愈合期、急性肝坏死等。null二、血磷降低疾病 1．甲状旁腺机能亢进时，肾小管重吸收受抑制，尿磷排出增多，血磷降低。 2．维生素D缺乏所致的软骨病与佝偻病伴有继发性甲状腺增生，使尿磷排泄增多，而血磷降低。 3．糖尿病，或连续注射葡萄糖，同时注射胰岛素使糖的利用增加，此时需大量无机磷酸盐参与磷酸化作用，故血磷降低。 4．肾小管变性病变时(Fanconi’s 综合征)，肾小管重吸收磷功能发生障碍，血磷偏低；长期服制酸类药物，因含有Mg(OH)2或Al(OH)3，能与磷结合，生成不溶性磷酸盐，吸收障碍，也可使血磷降低。null三、生理性变化 夏季因紫外线照射可稍高于冬季，食入或 注射大量维生素D及重体力劳动后也可升 高。食糖过多及正常孕妇无机磷可降低.null祝大家： 前程似锦！ 生活幸福！