兰索拉唑注册申报资料

兰索拉唑片注册申报资料 注册分类：化学药第五类 班级： 姓名： 学号： 联系方式： 目录 （一）综述资料 1、药品名称。 2、证明性文件。 3、立体目的与依据。 4、对主要研究结果的总结与评价。 5、药品书、起草说明及相关参考文献。 6、包装、标签设计样稿。 （二）药学研究资料 7、药学研究资料综述。 8、原料药生产工艺的研究资料及文献资料；制剂处方及工艺的研究资料及文献资料。 9、确证化学结构或者组分的试验资料及文献资料。 10、质量研究工作的试验资料与文献资料。 11、药品及起草说明，并提供标准品或对照品。 12、样品的检验报告书。 13、原料药、辅料的来源及质量标准、检验报告书。 14.、药物稳定性研究的试验资料及文献资料。 15、直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准。 （三）药理毒理研究资料 16、药理毒理研究资料综述。 17、过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性试验资料及文献资料。 18、非临床药代动力学试验资料及文献资料。 （四）临床试验资料 19、国内外相关的临床试验资料及文献资料。 20、临床试验计划及研究。 21、临床研究者手册。 22、知情同意书样稿、伦理委员会批准件。 23、临床试验报告。 （一）综述资料 1、药品名称 通用名：兰索拉唑片 化学名：兰索拉唑。 商品名：达克普隆 英文名： LANSOPRAZOLE TABLETS 拼音名： LANSUOLAZUO PIAN 主要成份为：兰索拉唑。 化学名称：（± ）-2[[[3-甲基-4-（2,2,2-三氟乙氧基）-2-吡啶基]甲基]亚硫酰基]苯并咪唑。 结构式： 分子式：C16H14F3N3O2S 分子量：369.37 2、证明性文件 （1）具营业执照、《药品生产许可证》及变更记录页、《药品生产质量管理规范》认证证书复印件、样品制备车间的《药品生产质量管理规范》认证证书复印件； （2）具相关专利情况及其权属状态说明，以及对他人的专利不构成侵权的保证书。9 （3）具《药物临床试验批件》复印件及临床试验用药的质量标准； （4）具原料药的批准证明性文件、药品标准、检验报告、原料药生产企业的营业执照、《药品生产许可证》、《药品生产质量管理规范》认证证书、销售发票、供货协议等复印件； （5）具《药品包装材料和容器注册证》复印件。 3、立目的与依据：消化系统疾病是常见的多发病之一，其中又以消化(http://www.chemdrug.com/brand/zs.asp?bigclassname=%E8%A5%BF%E8%8D%AF%E4%BA%A7%E5%93%81&smallclassname=%E6%B6%88%E5%8C%96%E7%A7%91)性溃疡为主，主要是因吸烟、饮酒、情绪紧张、药物(http://www.chemdrug.com/)刺激引起，胃肠疾病发病率约占人口的10～12%。据统计，美国胃肠疾病发病率男性为10%，女性为5%；日本为5～10%；德国为12.3%。我国胃肠疾病平均发病率为11.43%，上海居民发病率高达30.23%，占上海居民常见病和多发的第二位，其中消化性溃疡发病率为4.54%；北京、四川、辽宁等省市为23.66%。据IMS统计，2000年全球消化/代谢类用药销售额为337.85亿美元，较1999年增长了8%。因社会的发展，生活节奏加快，胃肠疾病的发病率还有逐年升高的趋势，此类疾病的药物(http://www.chemdrug.com/)市场也将稳步增长。排在2000年世界畅销第一位的胃肠疾病药物是奥美拉唑，兰索拉唑是新型质子泵抑制剂,它是奥美拉唑开发后的第二个新型质子泵抑制剂,对基础胃酸分泌和由组胺、五肽胃泌素、二丁基环腺酸、胆碱及食物等引起的胃酸形成与分泌有强力持久的抑制作用,同时对胃肠黏膜有保护作用。 4、对主要研究结果的总结与评价：兰索拉唑广泛应用于胃、十二指肠病变所致的上消化道出血，可迅速控制溃疡症状并使溃疡愈合，是目前治疗消化性溃疡最有效的药物之一。经国内统计，应用兰索拉唑治疗胃和十二指肠溃疡的病例4000余例，其中十二指肠溃疡2200例，胃溃疡1600例，复合性溃疡200余例。消化性溃疡愈合率由于观察时间不同，溃疡部位不同，其愈合率也不同，即治疗时间越长，其愈合率越高，治疗2周者十二指肠溃疡愈合率为80.4～84%，4周者为94.1～100%，6周达100%。胃溃疡治疗2、4、6周者其愈合率分别66.7～84.6%、90.5～100%、97.5～100%。体外研究(http://www.chemdrug.com/)表明：本品在抑制胃酸分泌方面至少与奥美拉唑一样强。动物模型体内研究 (http://www.chemdrug.com/)表明，本品抑制胃酸分泌不如H2受体拮抗剂雷尼替丁、法莫替丁, 但与奥美拉唑一样有效。 5、药品、起草说明及相关参考文献 兰索拉唑片说明书 【通用名】：兰索拉唑片 【商品名】：达克普隆 【英文名】：LANSOPRAZOLE TABLETS 【拼音名】：LANSUOLAZUO PIAN 【药品类别】：抗酸药及抗溃疡病药 【性状】： 本品为白色肠溶片，除去肠溶衣后显白色或类白色。 【药理毒理】：本药转移到胃粘膜壁细胞的酸分泌细管后，在酸性条件下 转变为活性体结构，此种活性物与质子泵（（H+＋K+）-ATPase）的SH基结合，从而抑制该酶的活性，故能抑制胃酸的分泌。 1．（H+＋K+）-ATPase活性抑制作用 兰索拉唑可抑制狗胃粘膜内微粒体的（H+＋K+）-ATPase活性（体外实验）。 2．壁细胞酸生成抑制作用 兰索拉唑对狗胃粘膜离体壁细胞由组胺、乙酰胆碱及胃泌素的刺激所产生的酸分泌，皆具有抑制作用（体外实验）。 3．胃酸分泌抑制作用 1）对胃泌素刺激引起的酸分泌： 于健康成人，1天1次兰索拉唑30mg口服给药，连续7天，可明显地抑制由胃泌素引起的酸分泌，且此作用能持续24小时。 2）对胰岛素刺激引起的酸分泌： 于健康成人，1天1次兰索拉唑30mg口服给药，连续7天，可明显地抑制由胰岛素引起的酸分泌。 3）对夜间的酸分泌： 于健康成人，1天1次兰索拉唑30mg口服给药，连续7天，具有明显地抑制夜间胃酸分泌的作用。 4）对24小时的酸分泌： 于健康成人24小时胃液采样试验，以1天1次兰索拉唑30mg口服给药连续7天，24小时的胃酸分泌明显地受到抑制。 5）24小时胃内pH值的监测： 对健康成人以及十二指肠溃疡患者，以1天1次兰索拉唑30mg口服给药连续7天，24小时的胃酸分泌皆明显地受到抑制。 6）24小时下部食道pH值的监测： 于反流性食管炎患者，以1天1次兰索拉唑30mg口服给药连续7天～9天，对胃食管反流现象，有明显地抑制作用。 7）对大白鼠及胃pouch狗的胃酸分泌： 本药对于大白鼠的基础酸分泌和因组胺、胃泌素、氨基甲酰基胆碱、2-脱氧-D-葡萄糖或水浸应激试验（water immersion stress）所引起的酸分泌均能明显且持续地抑制（在十二指肠内）。对胃pouch狗因各种刺激所引起的酸分泌，本药亦有明显且持续地抑制作用，在反复给药期间，均能显示稳定的酸分泌抑制作用（经口给药）。 4．慢性溃疡的治愈促进作用 于大白鼠的实验，兰索拉唑能明显地促进由醋酸引起的慢性胃及十二指肠溃疡的愈合（经口给药）。 5．溃疡形成的抑制作用 于大白鼠的实验，对因水浸应激试验、阿司匹林或乙醇引起的胃溃疡，及因mepirisol或半胱胺引起的十二指肠溃疡，和反流性食管炎皆有明显的抑制作用（经口或十二指肠内给药）。 【药代动力学】：1．血中浓度 兰索拉唑的生物利用度具有个体差异性。于空腹或餐后对健康成人（6例）经口给予1次30mg的药量时，血中主要检测到药物原形，其代谢物亦可测得。空腹服药的Tmax为2.2± 0.4h，Cmax为1038± 323ng/ml，T1/2为1.44± 0.94h，AUC为3890± 2484 ng· h/ml。餐后服药的Tmax为3.5± 0.8h，Cmax为679± 359ng/ml，T1/2为1.60± 0.90h，AUC为 3319± 2651ng· h/ml。尿中未能检出兰索拉唑的原形，只检出其代谢物，至服用后24小时为止，其尿中排泄率为13.1～14.3%。此外，对健康成人（6例），晨间空腹时，经口给予兰索拉唑30mg1天1次，连续7天，由血中浓度的变化及尿中排泄率来观察，体内无蓄积性。 【适应症】:胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性食管炎、卓-艾综合征（Zollinger-Ellison、症候群）、、吻合口部溃疡。 【用法用量】：十二指肠溃疡，通常成人每日一次，口服兰索拉唑15mg～30mg，连续服用4～6周；胃溃疡、反流性食管炎、卓-艾综合征（Zollinger-Ellison症候群）、吻合口部溃疡，通常成人每日一次，口服兰索拉唑30mg，连续服用6～8周。但用做维持治疗、高龄者、有肝功能障碍、肾功能低下的患者，每日一次，口服兰索拉唑15mg。 【不良反应】：1）过敏症：偶有皮疹、瘙痒等症状，如出现上述症状时请停止用药。 2）肝 脏：偶有GOT、GPT、ALP、LDH、γ-GTP上升等现象，所以须细心观察，如有异常现象应采取停药等适当的处置。 3）血 液：偶有贫血、白细胞减少，嗜酸球增多等症状，血小板减少之症状极少发生。 4）消化器：偶有便秘，腹泻，口渴，腹胀等症状。 5）精神神经系统：偶有头痛、嗜睡等症状。失眠，头晕等症状极少发生。 6）其 它：偶有发热，总胆固醇上升，尿酸上升等症状。 【禁忌症】：对本品过敏者禁用 【注意事项】：1．在治疗过程中，应充分观察，按其症状使用治疗上所需最小剂量。 2．下列患者慎重用药：1）曾发生药物过敏症的患者 2）肝功能障碍的患者 3．其它 对大白鼠经口给药52周的实验，50mg/kg/日组（约为临床用量的100倍），发现1例有良性精巢间细胞瘤。于大白鼠经口给药24个月的实验，15mg及50mg/kg/日组中，精巢间细胞瘤发生率会增加，在50mg/kg/日组中发现1例雌大白鼠有胃部类癌（carcinoid）出现。 因本药会掩盖胃癌的症状，所以须先排除胃癌，方可给药。 【孕妇及哺乳期妇女用药】：1．已确认兰索拉唑在大白鼠胎仔的血浆浓度比在母鼠中高。又在兔子（经口给药30mg/kg）的实验发现胎仔死亡率增加，故对孕妇或有可能怀孕的妇女，需事先判断治疗上的益处超过危险性时，方可用药。 2．曾有报告指出，在动物实验中药品会转移到乳汁中。所以本药品不适合用于正在哺乳中的妇女。如不得已需服药时，应避免哺乳。 【儿童用药】：对儿童用药的安全性尚未确立（由于在小儿的临床经验极少）。 【老年患者用药】：一般而言，老年患者的胃酸分泌能力和其他生理机能均 会降低，故用药期间请注意观察。 【药物相互作用】：会延迟安定（diazepam）及苯妥英钠（phenytoin）的代 谢与排泄，资料已被发表于类似药物奥美拉唑的报告中。 【贮藏】：密封，在干燥处保存 【规格】：（1）15mg （2）30mg 【包装】：7片/盒、14片/盒 【有效期】：（1）15mg 暂定二年;（2）30暂定三年 起草说明书依据及相关文献： a、临床试验结果； b、参考了我国正式批准的进口说明书、国家药品监督管理局下发的《药品包装、标签和说明书管理规定》（征求意见稿）的部分规定； c、《关于印发化学药品和生物制品说明书规范细则的通知》； d、本说明书各项内容依据国家药品监督管理局下发的《药品说明书规范细则》。 6、包装、标签设计样稿 包装样稿 标签样稿 （二）药学研究资料 7、药学研究资料综述 兰索拉唑是一种新型胃酸(Ｈ＋＋ K ＋)－ ATP 酶抑制剂(质子泵抑制剂PPI) 兰索拉唑(lansoprazol) 为选择性抑制胃壁细胞H+/K+-ATP 酶的抗溃疡药物，是继奥美拉唑(omeprazole) 之后上市的第二个质子泵抑制剂，主要用于胃溃疡、十二指肠溃疡、吻合口溃疡及反流性食管炎、卓艾综合征等。在酸性条件下,转变为活性体结构,此种活性物与质子泵(Ｈ＋＋ K ＋)－ ATP 酶的SH 基结合,抑制该酶的活性,故能抑制胃酸的分泌,同时对幽门螺旋杆菌也有抑制作用。该药口服及注射后吸收迅速,吸收范围与剂量成正比,耐受性及安全性好。为了开发研究此产品,对其合成工艺进行了研究,同时对工艺进行了改进,提高了收率,降低了成本,使其更适合工业化的要求。因为其在酸中不稳定因此制成肠溶片剂，而兰索拉唑原料及片剂对光、热、湿比较敏感, 因此制成的片剂也应置于阴凉处贮存。 8、原料药生产工艺的研究资料及文献资料；制剂处方及工艺的研究资料及文献资料 兰索拉唑( Lansoprazole)为新型抑制胃酸分泌的药物, 对幽门螺杆菌也有抑制作用, 在保护和促进胃黏膜溃疡愈合、降低溃疡复发率等方面具有良好作用[。因为兰索拉唑原料及片剂对光、热、湿比较敏感, 通过对兰索拉唑片的处方工艺筛选、释放度、溶出度测定和稳定性考察等, 为选择合适方工艺提供依据 （1）设备、仪器试剂与药品 1）设备：F-20B万能粉碎机,ZS-350漩涡振荡筛, GHL- 250高速混合机, FL - 120型沸腾干燥机,ZP-35D 型旋转式压片机, BG-150D型高效包衣机。 2）仪器与试剂：岛津LC - 10ATVP高效液相色谱仪系统: LC- 10ATVP泵, SPD- 10ATVP检测器, Class-色谱数据处理仪 梅特勒电子天平, ZRS-8G 智能溶出试验仪, 岛津UV-2450紫外分光光度计。兰索拉唑对照品(含量99. 8%)、原料及片剂(15mg/片);甲醇为色谱纯, 其他试剂为分析纯 3）药品：兰索拉唑对照品(中国药品生物制品检定所提供),预胶化淀粉,交联羧甲基纤维素钠,硬脂酸镁,包衣粉。 （2）实验方法 1）制备工艺及处方筛选：兰索拉唑对酸极不稳定, 在湿、热条件下其稳定性也受一定的影响。从制剂处方及工艺考虑, 应避免酸、湿、热对兰索拉 唑的影响, 因此本工艺采用空白辅料制粒再与原料混合, 以避免湿法制粒和干法制粒条件下的湿、热对原料的影响, 从而提高片剂的稳定性。兰索拉唑几乎不溶于水, 故采用水溶性辅料乳糖为填充剂[ 3] , 以提高溶出度。交联羧甲基纤维素钠为崩解剂, 硬脂酸镁为润滑剂。制备工艺: 兰索拉唑过80 目筛备用。辅料过80目筛后混合均匀(硬脂酸镁除外), 混粉加水, 过20 目筛制粒, 湿颗粒干燥至干燥失重:2% - 5%之间, 用18目整粒。颗粒外加硬脂酸镁和兰索拉唑总混均匀取样检测, 按照颗粒含量用7mm浅凹冲压片。我们采用下述辅料进行处方试制与筛选工作, 处方组成见表1 2）方法：本品为肠溶制剂, 按中国药典2000年版附录X IXD 缓释、控释制剂指导原则及兰索拉唑片的中华人民共和国卫生部标准(试行) [W S-135( X- 107) - 98], 选择在PH6. 8磷酸盐缓冲液中考察片芯溶出度[4] ,采用中国药典2000年版二部附录XC 第一法, PH 6. 8磷酸盐缓冲液1000 m l为溶剂, 转速为100 r /min, 分别于20min、45min取样,按紫外分光光度法在284 nm的波长处测定吸收度,计算溶出量。以片芯的外观性状、崩解及溶出度检查项为指标, 考察处方性质, 结果见表2。3个处方检测结果相比较, 样品的各项检测结果均无明显差异, 较为接近；溶出量均大于75%, 均符合中国药典2000年版附录X IXD 缓释、控释制剂指导原则对溶出量的要求。因此需对以上3个处方进行放大批量制备, 进一步进行影响因素考察, 处方筛选。 3）包肠溶衣层增重筛选：在处方放大前进行包肠溶衣试验, 以确定片剂的包衣量达到中国药典2000年版附录X IXD 缓释、控释制剂指导原则中对肠溶片的控释要求。以处方A1 为基础进行2000片放大, 进行片剂包衣验证。按处方设计要求需对片剂进行包隔离衣及肠溶衣。采用处方A1 制备片芯, 筛选肠溶衣层增重对稳定性及释放度的影响。片芯进行隔离层包衣增重4. 0% - 4.5%。肠溶衣层增重分别为3%-4%、4%-5% 、5%-6%,在已包隔离衣的片芯上进行三种不同肠溶衣增重, 所得肠溶衣片依次标记为C1、C2、C3。 4）释放度考察：照释放度测定法[中国药典2000年版二部附录XD 第二法(二)] , 采用溶出度测定法(中国药典2000年版二部附录XC 第一法),以0.1mol/L盐酸溶液500ml为溶剂,转速为每分钟100转,依法操作,经120min时停转, 立即将转篮升出液面,供试片不得有裂缝或崩解现象。随即将转篮浸入PH6. 8磷酸盐缓冲液1000ml的溶剂中,转速不变, 依法继续操作, 再分别5min、10min、20min、30 min、45 min、60min, 取溶液, 有机系滤膜滤过,照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IVA )在284nm波长处测定吸收度;另精密秤取兰索拉唑对照品15mg, 置100ml量瓶中, 加乙醇10ml溶解,用PH 6.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度100ml,摇匀,精密量取1ml,置10ml量瓶中,用PH 6.8磷酸盐缓冲液稀释至刻度10ml摇匀, 作为对照品溶液,同法测定吸收度, 计算每片的释放度, 结果见表3、表4、表5。结果分析: 1)不同肠溶衣增重的C1与C2、C3在酸中进行检测, C1于2 h 时出现衣膜破裂的现象, C2、C3 酸中无破裂现象(2)不同肠溶衣增重的C2与C3在酸中均衣膜完好, 在PH 6.8磷酸盐缓冲液中的释放度有区别: 45min前的取样点, C2释放度快于C3, 60min时释放完全。(3)采用处方A1的处方组成制备的片芯,隔离层增重为4% -5%, 肠溶衣增重为4% - 5% 所得兰索拉唑片与对照片相比,释放度行为无明显区别,说明处方与工艺可行,进一步考察稳定性,进行影响因素试验。 5）处方放大影响因素考察进行处方筛选：对以上3个处方分别放大1000片,进行处方的影响因素考察处方筛选。处方组成见表6。制备工艺: 兰索拉唑过80目筛备用。辅料过80目筛后混合均匀(硬脂酸镁除外),混粉加水, 过20目筛制粒, 湿颗粒干燥至干燥失重为3% - 5% 之间, 用18目整粒。颗粒外加硬脂酸镁和兰索拉唑总混均匀取样检测,按照颗粒含量用7mm浅凹冲压片。片芯包隔离衣(控制增重4%-5%)、肠溶衣( 控制增重4% -5% )、干燥后进行影响因素试验。试验条件--高温60℃: 包衣片放于塑料瓶中, 放60% 烘箱内试验, 分别于第5天、第10天取样检测; 高湿RH 92.5%饱和硝酸钾水溶液: 包衣片放于塑料瓶中, 放于RH 92.5%箱内试验,分别于第5天、第10 天取样检测; 光照试验( 4500+ 500)lx低温光照仪:包衣片放于表面皿中, 分别于第5天、第10天取样检测。本品为肠溶制剂所以在PH 6.8磷酸盐缓冲液中考察包衣片溶出度, 采用中国药典2000年版二部附录XC第一法,PH 6.8磷酸盐缓冲液1000ml为溶剂, 转速为100r/min,分别于45min取样,按紫外分光光度法在284 nm的波长处测定吸收度,计算溶出量。检测结果分析: a.有关物质检测:0d检测结果: A1、A2、A3处方检测结果相近,无明显差异。60% 5d检测结果: A1 较高达1.60℃ ,明显高于A2、A3, A2、A3无明显差异,略比0d偏高。60℃ 10 d 检测结果: A1较高达2. 28%, 明显高于A2、A3, A2、A3 有显著增长。RH 92. 5% 高湿5d检测结果: A1、A2、A3 均无明显增长RH 92. 5% 高湿10d检测结果: A1、A2有显著增长,A3 略有增长但不明显光照试验5d检测结果: A1、A2、A3 处方有关物质无明显变化。光照试验10d检测结果: A1、A2 略有增长,其中A1 增长较大, A3处方有关物质无明显变化。 b.崩解时限检测: A1、A2、A3 处方经影响因素试验后, 其崩解时间与0d样品崩解时间相比较均无明显的变化。 c 溶出度检测:0d检测结果: A1、A2处方溶出度相比较略低,差异较大。A3处方溶出量较A1、A2处方溶出量高。60℃5d检测结果: A1、A2溶出度较0d相比较无明显变化, 但不高, A3与0d相比较有较明显的降低。60℃10d检测结果: A1、A2、A3 溶出度均略有下降,并且溶出量基本一致。RH92.5%高湿5 d检测结果: A1、A2、A3 溶出量均无明显变化。RH 92.5%高湿10d检测结果: A1、A2、A3溶出量均无明显变化。光照试验5d检测结果: A1、A2、A3 溶出度与0d相比较无明显变化。光照试验10d检测结果: A1、A2、A3 溶出度与0d相比较无明显变化。 d.结果分析:从以上影响因素试验检测结果分析, A3处方较A1、A2处方稳定。其0d溶出度较高, 而A1、A2 溶出度较低。经影响因素试验后,A3处方在高温60℃ 的溶出度略有下降,其他均无明显变化有关物质检测结果表明, A3 处方在高温60℃ 试验中略有增加, 与A1、A2 处方相比较增长较小在其他状况下其变化值不大。以上3个处方试验检测结果进行分析比较, 我们认为A3 处方可作为最终的放大处方。 6）影响因素试验:试验样品、要求及批号:按A3 处方进行兰索拉唑片制备,批号:030901,按中国药典2000年版二部附录药物稳定性指导原则,分别在照度(4500 & 500)lx(60&2)% 以及相对湿度92.5% 的条件下进行影响因素试验。强光照射试验: 将试验样品置于LS- 2000A 型低温光照仪中,照度维持在(4500 & 500)lx,分别于第5天和第10天取样检查, 结果为: 外观性状和有关物质与0d相比无变化。高温试验: 将试验样品置于玻璃平皿中,60℃ 的恒温箱中放置10d,于第5天和第10天取样,进行检测。结果: 除含量没有变化外, 外观性状、增失重、有关物质均有明显变化。高湿度试验: 将试验样品放入平皿中, 置于相对湿度92.5%的环境中(含饱和KNO3 溶液的干燥器中),于25%下放置10d,于第5天和第10天取样, 进行各项检查。经60℃C放置10d后, 兰索拉唑片的含量、释放度未见明显改变,片子颜色加深,有关物质有增加趋势, 表明本品应置阴凉处保存;在高湿环境中放置10 d后, 兰索拉唑片的含量、释放度均未见明显改变,但片子衣膜吸湿,发黏,变为浅粉色,有关物质有增加趋势, 提示兰索拉唑片应采用防潮包装材料, 并在干燥条件下保存; 在光照条件下放置10d后,外观、释放度、含量检测结果均无明显改变,有关物质略有增加, 说明本品应遮光保存。试验中有关物质的HLPC 图谱未附。结论: 经初步的稳定性考察,表明兰索拉唑片对湿、热均较敏感, 片子吸湿衣膜发黏,提示应采用防潮的包装材料,在阴凉干燥处密封保存。稳定性进一步考察结果见长期试验和加速试验。 7）放大试验及处方工艺考察：采用处方A3的原辅料组成与制备工艺，进行三批放大试验, 每批按10000片投料,批号031001、031002、031003。以实际产品数量与理论产量相比计算收率, 三批放大试验的收率分别为85.68% 、84. 98%、84.98%。三批放大样品释放度检验结果表明, 批与批之间重现性好, 同批个体差异小,45min释放度大于75% ,60min释放完全符合药典要求,说明制剂的组方合理, 采用乳糖与预胶化淀粉制成空白颗粒工艺稳定。分别对3个处方进行进一步考察稳定性, 进行影响因素试验,根据实验结果,最后选择处方A3 作为兰索拉唑片的确定处方。 （3）结论 采用乳糖与预胶化淀粉制成空白颗粒后再与处方中的原料及硬脂酸镁直接混合均匀后压片的工艺简单、可行, 且避免了兰索拉唑原料与辅料混合湿法制粒对湿、热和光的影响和干法制粒对热的影响; 使用本工艺能更好的保证兰索拉唑片的质量稳定。 9、确证化学结构或者组分的试验资料及文献资料。 以2, 32二甲基吡啶为起始原料,经4步反应合成目标化合物，其结构经熔点、质谱和1H-NMR谱测试确证 （1）合成工艺 1）a、[[[3-甲基-4-(2，2，2一三氟乙氧基)-2-吡啶基]甲基]硫基]-H-苯并咪唑[中间体(2)]的制备 ：将市售的2-氯甲基-3-甲基-4-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶盐酸盐(中间体I)(110g，04mo1)，2-巯基苯并咪唑(90g， 0．6mo1)和氢氧化钠(60g，15mo1)溶于乙醇(800m1)中，升温回流反应2h，冷却到室温，过滤，滤液蒸掉乙醇总量的2／3，析出固体，冷却到O℃ ，过滤，用水、甲醇洗涤，45℃真空干燥到恒重。产量：1205g。收率：88．5％，熔点150～152℃ 。 b、兰索拉唑粗品的制备： 中间体(2)(106 g，0．3mo1)溶于乙酸乙酯(2000m1)中，冷却到5℃ 以下，滴加间氯过氧苯甲酸(692g，04mo1)和乙酸乙酯(800m1)的混合溶液，滴毕，升温到2O℃ 反应30min，饱和碳酸钠(1000m1)洗涤，水(1500ml×2)洗涤，无水硫酸钠(30g)干燥。蒸乙酸乙酯总量的2／3，残留物O～4℃ 结晶12h，过滤，用乙酸乙酯(500m1)洗涤，45℃ 真空干燥到恒重，得粗品，产量为887 g，收率：8O1％ 。熔点168．5～170．5℃(分解)。 c、兰索拉唑的精制 ：兰索拉唑粗品(88g)和乙醇(836m1)混合(比例为lg／9．5m1)加热回流溶解，加活性炭(兰索拉唑粗品投料量的3％)脱色15rain，热滤，滤液O～4℃ 结晶12h，过滤，乙醇(100rnl×2)洗涤，45℃ 真空干燥到恒重，得兰索拉唑精品，产量：78．8 g，收率：89．5％ ，熔点169．1～170．O℃(分解)。 2）第一步反应中用到甲醇，在生产中用大量甲醇，造成操作工人的眼睛刺激损伤，改为乙醇做溶剂，降低了毒性，收率比之前提高了5％。 3）第二步反应中用到氯仿做溶剂，药典中氯仿为二类溶剂，限制使用，改为乙酸乙酯做溶剂，提高了药物的安全性，减少了对环境的污染。 4）熔点用B BCHIB- 540型熔点仪测定, 温度未经校正。质谱采用GC- MS - Q P 5050A(Japan Sh im adzu)型质谱仪测定，1H-NMR谱采用B ruker ARX-300型核磁共振仪测定, TMS为内标。 （2）合成工艺路线图解 以2,3-二甲基吡啶为原料，经六步反应，合成兰索拉唑 10、质量研究工作的试验资料与文献资料。 将兰索拉唑溶于无水乙醇中，采用一步造粒法制粒，压片后分别包上隔离衣与肠溶衣制得兰索拉唑肠溶片。各项检测结果均表明本品符合规定，同时稳定性考察结果表明，本品在18个月内稳定。 （1）仪器与试剂：UV-2401PC型紫外分光光度计，LC-10AD型高效液相色谱仪；RCZ-5A型智能溶出仪；Glatt流化床一步造粒机。兰索拉唑原料药（批号：030401）、兰索拉唑对照品（批号：030402，含量99.7%），聚维酮K30（河南玉源公司焦作市开源制药厂，批号：2002012110，药用级）；微晶纤维素（MCCPH101，湖州展望化学药业有限公司，批号：20020408，药用级）；交联羧甲基纤维素钠（上海运宏化工精细辅料技术有限公司代理，荷兰OMV公司生产，批号：10160993）；隔离层包衣粉（胃溶型欧巴代）、肠溶包衣粉均由上海卡乐康包衣技术有限公司提供。 （2）方法与结果 1）肠溶片的制备;称取原辅料，分别粉碎10目筛；取兰索拉唑150g、聚维酮K30 15g、吐温-80 20g与氢氧化钠16g置适量无水乙醇中，搅拌溶解，作为粘合剂溶液。另取MCCPH101 1000g与交联羧甲基纤维素钠40g置一步造粒机中混匀3min，喷入上述粘合液，喷液率为18～30g/min，干燥进风温度为55～60℃，物料温度为45～50℃，喷完药液，继续干燥2h，控制水分在3%以内，收集干燥颗粒1158g（收率93.3%），用24目筛整粒，加入硬脂酸镁5.8g与滑石粉5.8g，混匀，取样检测中间体含量，计算片重，压素片，分别再进行隔离层包衣（增重4%）与肠溶包衣（增重12%～15%），检验，包装，即得兰索拉唑肠溶片（规格：15mg/片）。 2）有关物质（避光操作）：取本品，除去肠溶衣，研细，称取适量，加甲醇溶解并稀释制成2mg/ml的溶液，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml置50ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的方法，精密量取上述两溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。 3）重量差异：取兰索拉唑肠溶片20片，《中国药典》2005年版二部附录Ⅰ A重量差异方法检查。 4） 肠溶片的HPLC含量测定（避光操作）：色谱条件：色谱柱DiamonsilTM C18（4.6mm×150mm,5μm），流动相 甲醇-水-三乙酸-磷酸（700：300：5：1.5），用磷酸溶液（1→10） 调节pH至7.3；检测波长284nm；进样量10μl。理论板数按兰索拉唑峰计算不低于1500。标准曲线: 精密称取兰索拉唑对照品适量，加流动相制成0.08、0.12、0.16、0.20、0.24mg/ml对照品溶液，进样测定，以峰面积（A）对浓度（C）线性回归，得方程A=23015807.5C+11148.2，r=0.9999。取兰索拉唑肠溶片20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于兰索拉唑50mg），置25ml棕色量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml加流动相稀释制成0.16mg/ml的溶液，作为供试品溶液；另精密称取兰索拉唑对照品适量，用流动相同法稀释成0.16mg/ml的溶液。分别进样测定，以外标法计算含量。 5） 体外释放度检查 a.  酸中释放度  取兰索拉唑肠溶片，以盐酸溶液（1→1000）1000ml为溶出介质，转速100r/min，依法操作,经2h时，取供试片，用水洗净表面盐酸溶液，用滤纸吸干，置50ml棕色瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液1ml，用甲醇制成15μg/ml的溶液，作为供试品溶液；另精密称取兰索拉唑对照品适量，用甲醇同法溶解制成于15μg/ml的溶液，作为对照品溶液。取上述两溶液，在284nm波长处分别测定吸光度，以外标法计算每片的含量A，1-A即为酸中的释放量。 b. 缓冲液中释放度  标准曲线：精密称取兰索拉唑对照品适量，加磷酸盐缓冲液（pH6.8）溶解并稀释制成5、10、15、20、25μg/ml对照品溶液，在284nm处分别测定吸光度,以吸光度（A）对浓度（C）线性回归，得方程A =0.0358 C-0.0034，r=0.99996。取兰索拉唑肠溶片，以盐酸溶液（1→1000）1000ml为溶出介质，依法检查,经2h停转,立即将转篮升出液面,将盐酸溶液弃去，随即移入预先热至37℃的磷酸盐缓冲液（pH6.8）1000ml中，继续依法操作，分别于不同时间取样，过滤，取续滤液在284nm的波长处测定吸光度，计算每片在缓冲液中的累积百分率。 （3）讨论 1）本品处方中用吐温-80作增溶剂，交联羧甲基纤维素钠作超级崩解剂，聚维酮K30作粘合剂，MCCPH101作稀释剂兼崩解剂，氢氧化钠作酸碱调节剂，硬酸酸镁与滑石粉作助流剂。 处方中聚维酮K30可作为难溶性药物的固体分散体,增加难溶性药物的溶出。兰索拉唑本身难溶于水,笔者采用一步造粒技术目的是使兰索拉唑呈亚稳定态,再通过增加聚维酮K30的量使兰索拉唑尽可能地分散在辅料的外表面上或包裹成小颗粒,从而阻止兰索拉唑在长期贮存过程中由亚稳定态转为稳定态所导致的缓冲盐中释放度不合格。我们通过多批试验验证了这一理论设想，结果表明将聚维酮K30增加至15g时，本品的释放度明显提高。 2）由于兰索拉唑对光、热非常敏感，在生产与检验时应尽量避光操作；另片芯易吸潮，在包隔离层时需用欧巴代醇溶液，包肠溶衣时可选水溶性肠溶衣，不但可节省成本，而且包衣后片面光洁美观。 3）影响因素试验表明，本品在强光、高温条件下放置有关物质均略有上升,除去肠溶衣后显淡黄色，同时在缓冲液中释放量与含量均略有下降，故本品应在阴凉、干燥处密封保存。加速试验和长期留样试验表明，本品在室温条件下放置18个月内稳定性良好。 11、药品标准及起草说明，并提供标准品或对照品。 （1）鉴别 在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的保留时间应与对照品峰的保留时间一致 （2）检查 1）溶出度：取本品，照溶出度测定法（中国药典1990年版二部附录60页第一法），以盐酸 HYPERLINK "http://www.wiki8.com/rongye_109794/" \o "医学百科：溶液" 溶液（9→1000）1000ml为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经2小时停转，立即将转篮升出液面，供试片均不得有裂缝或崩解现象。随即将转篮浸入磷盐缓冲液（pH6.8）1000ml的溶剂中，转速不变，继续依法操作，至45分钟时，取溶液滤过，照分光光度法（中国药典1990年版二部附录24页），在284nm的波长处测定吸收度， 另精密称取兰索拉唑对照品15mg，置1000ml量瓶中，加甲醇2ml溶解，用磷酸盐缓冲液（pH6.8）稀释至刻度，摇匀，同上法测定吸收度，按二者吸收度之比值计算每片的溶出量，限度为标本量的75%，应符合规定。 2）其他应符合片剂项下有关的各项规定（中国药典1990年版二部附录3页 （3）含量测定 1）避光操作：照高效液相色谱法（中国药典1990年版二部附录34页）测定。 2）系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-三乙胺-磷酸（700∶300∶5∶1.5）用磷酸溶液（1→10）调节pH值至7.3流动相；检测波长为284nm。理论塔板数按兰索拉唑计算，应不低于1500。 3)对照品溶液的制备:取兰索拉唑对照品约50mg，精密称定，置25ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。 4)供试品溶液的制备：取本品20片，除去肠溶衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于兰索拉唑50mg）置25ml棕色量瓶中，加甲醇适量振摇使兰索拉唑溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.5μm的滤膜滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2ml，置25ml棕色量瓶中，加流动相稀至刻度，摇匀，即得。 5）测定法：精密量取对照品溶液与供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积计算含量，即得。 12、样品的检验报告书。 兰索拉唑原料药（批号：030401）、兰索拉唑对照品（批号：030402，含量99.7%）经检验合格。 13、原料药、辅料的来源及质量标准、检验报告书。 以 2-氯甲基-3-甲基-4-(2，2，2-三氟乙氧基)吡啶盐酸盐和2-巯基苯并咪唑为原料，吐温-80作增溶剂，交联羧甲基纤维素钠作超级崩解剂，聚维酮K30作粘合剂，MCCPH101作稀释剂兼崩解剂，氢氧化钠作酸碱调节剂，硬酸酸镁与滑石粉作助流剂，用水溶性辅料乳糖为填充剂，其质量均符合规定。 14、药物稳定性研究的试验资料及文献资料。 为保证临床用药的安全有效,本实验对其原料及片剂光、热、湿的稳定性进行考察,并以HPLC对兰索拉唑的含量及降解产物进行检测,同时测定片剂的溶出度。 （1）仪器与试剂：Waters-990色谱仪(包括510泵,990二极管检测器,990色谱工作站,7010进样阀, 10μL定量环)；岛津UV -160A紫外分光光度计,ZRS - 4型智能药物溶出仪、兰索拉唑对照品(含量99.8 %),原料及片剂(15mg/ 片)为鱼它滨制药厂药物研究所合成室和制剂室提供;甲醇为色谱纯,其它试剂为分析纯 （2）检测项目 1）含量测定 a. 色谱条件Spherisorb C18柱( 4.6mm×250mm ,10μm)流动相:甲醇2水2三乙胺2磷酸(700∶300∶5∶1.5),用磷酸溶液( 1→10)调节pH 值至(7.3±0.1);检测波长为284nm。 b.系统适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,理论塔板数按兰索拉唑峰计算,应不低于1500 。 d.线性关系:取兰索拉唑对照品适量,精密称定,以甲醇配制成1mg·mL-1的溶液,再以甲醇稀释成10 ,50 ,100 , 200 ,300 ,400μg·mL-1的系列浓度,精密量取10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,以浓度和兰索拉唑峰面积进行线性回归,得回归方程为: Y =1.4896X - 0.0225,r = 0.9999这表明兰索拉唑在10～400μg·mL-1范围内峰面积与浓度呈线性关系。最低检测量为2μg·mL-1 。 e.精密度试验:取本品,在相同色谱条件下重复实验,5次测定结果,原料日内差和日间差的RSD 分别为0.65%和0.93%;片剂日内差和日间差的RSD分别为0.71%和1.02%。 f.回收率试验:精密称取兰索拉唑对照品50mg,按片剂处方比例加入适量的空白辅料,置25mL 棕色量瓶中,加甲醇适量振摇使兰索拉唑溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀。经0.45μm滤膜滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液2mL,置25mL 棕色量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取10μL注入液相色谱仪,按外标法以峰面积计算,5份样品的平均回收率99.64% ,RSD为0.58%。 g.原料测定法:取本品约50mg,精密称定,置25mL棕色量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取2mL置25mL棕色量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,精密量取10μL ,注入液相色谱仪,记录色谱图;另取兰索拉唑对照品,同法测定,按外标法以峰面积计算,即得。 h.片剂测定法:取本品20片,除去肠溶衣,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于兰索拉唑50mg),置25mL棕色量瓶中,加甲醇适量振摇使兰索拉唑溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶解,照兰索拉唑测定法项下自“精密量取2mL置25mL棕色量瓶”起,依法测定,计算,即得。 2)降解产物测定方法 在含量测定项下记录的色谱图中,以归一法计算出杂质的总含量。 3)片剂的溶出度测定方法 取本品,照中国药典2000年版方法[6] ,采用转篮法,以盐酸液(9→1000) 1000mL为溶出介质,温度控制在(37±0.5)℃范围内,转速为100r/min进行操作,经120min停转,立即将转篮升出液面,供试片不得有裂缝或崩解现象将转篮浸入磷酸盐缓冲液(pH6.8)1000mL中,转速不变,依法操作,45min 时取样过滤,精密量取续滤液2mL于10m 量瓶中,以磷酸盐缓冲液稀释至刻度作为供试液;另取兰索拉唑对照品适量,以磷酸盐缓冲液配制成3μg. mL-1的对照液,以分光光度法测定两者在284nm处的吸收度,计算即得。 (3)稳定性试验 1)光稳定性 取兰索拉唑原料及片剂(15mg/片)各3个批号,露置日光灯下(光线强度为4000lx),照射10d,于放置5,10d取样,分别对性状、降解产物、含量、溶出度(片剂) 等项目进行考察测定。 2)高温试验 同前取样,在密闭器皿中干热60℃放置10d,同前法进行考察测定。 3)加速试验 同前取样,在包装(原料置棕色瓶中,加盖密封;片剂铝塑包装,置纸盒中) 条件下,于40℃,RH75%放置3 个月,于0.5 ,1 ,3月时取样,同前法进行考察测定。 4)室温留样 同前取已包装样品,于室温(8～34)℃,RH( 45%～95%)条件下避光放置2年,分别在3 ,6 ,12 ,18 ,24 个月时取样,同前法进行考察测定。 5)凉暗处留样 同前取已包装样品,贮存于20℃以下且避光,放置2年,分别在3,6,12,18,24个月时取样,同前法进行考察测定。 6)原料的冷处留样 同前取已包装样品,于(2～10)℃避光放置2年,分别在3 ,6 ,12 ,18 ,24 个月时取样,同前法进行考察测定。 (4)结果与讨论 结果见表1～2 ,由于三个批号的样品考察结果数据相近,表中只列出一批数据。 (1)兰索拉唑原料及片剂光照10d 后,均产生一个杂质峰,外观变深,提示其对光不稳定,须避光放置。 (2)兰索拉唑原料及片剂干热60℃考察10d后,原料产生二个杂质,片剂产生一个杂质,其外观均变深,含量略有下降但不明显,表明其对热不稳定。 (3)兰索拉唑原料及片剂于40℃,RH75 %考察3个月,其外观、降解产物、含量、溶出度均有明显变化,表明其对湿、热均不稳定。 (4)兰索拉唑原料在室温条件下放置至12个月,产生降解产物,外观变为灰棕色;在凉暗处放置至12个月时也产生降解产物;在冷处放置至24 个月始产生降解产物,其它考察项目无明显变化。兰索拉唑片剂在室温条件下放置24 个月,外观变为浅黄色,产生降解产物;在凉暗处放置24 个月,各考察项目均无明显变化。故认为兰索拉唑原料应冷处避光贮存,片剂应凉暗处避光贮存;有效期约为2 年。 15、直接接触药品的包装材料和容器的选择依据及质量标准 药品包装：铝塑包装 具直接接触药品的包装材料和容器的《药品包装材料和容器注册证》 （三）药理毒理研究资料 16、药理毒理研究资料综述： （1）作用机制：消化性溃疡的发病机制主要是由于粘膜的攻击因子与防御因子之间失去平衡所致。迄今为止“, 无酸,无溃疡”的概念仍被世人所承认,并把抑制酸分泌作为削弱攻击因子的主要措施。。第二代质子泵抑制剂兰索 拉唑的作用机制和奥美拉唑一样,也是通过抑制胃酸分泌的最后环节H+ / K+2ATP 酶(质子泵) 而发挥作用。由于本品为弱碱性药物,原药活性极小,吸入血后转运至胃粘膜壁细胞,最终到达分泌管和酸性腔,该处的pH < 1 ,原药被质子化后带正电荷而不断富集,并在酸的催化下转化为具生物活性的次磺酸和次磺酰胺形式的药物,该种活性药物与H+ / K+2ATP 酶之巯基脱水偶联,从而抑制该酶的H+2K+ 转运机制而发挥抑制酸分泌作用。因此本品可完全阻断乙酰胆碱、胃泌素和组胺等化学介质刺激引起的胃酸分泌,具有强烈而持久的抑酸作用。 （2）构效关系：本品虽与奥美拉唑同属苯并咪唑类,但两者在结构上有所不同,兰索拉唑因在它的吡啶环42位侧链导入氟( F3) ,而且有三氟乙氧基取代基,使其生物利用度较奥美拉唑提高30 % ,亲脂性也较后者为强,它可作用于H+ / K+2ATP 酶的3 个部位(半胱氨酸321 ,813 和892) ,而奥美拉唑仅能与该酶的2个部位结合(半胱氨酸831 和892) ,因此本品在酸性条件下可更迅速地透过壁细胞膜转变为次磺酸和次磺酰衍生物而发挥药效。 （3）药理作用 1）胃酸及胃蛋白酶分泌抑制作用：动物实验表明,本品可抑制狗胃原浆微粒体H+ /K+2ATP 酶活性和离体胃壁细胞二丁基环磷腺苷刺激引起的胃酸分泌,并对由组胺、胃泌素和氨甲酰甲基胆碱刺激引起的胃酸分泌均有强力抑制作用,对狗的抑酸能力与奥美拉唑相近,是雷尼替丁的2 倍;对大鼠的抑酸能力比奥美拉唑大2～10 倍,比雷尼替丁大4～34 倍； 2）溃疡形成抑制作用:本品对于由应激反应、阿司匹林、乙醇等所致大鼠胃及十二指肠溃疡、反流性食管炎的形成有抑制作用,可预防粘膜损伤的发生； 3）溃疡愈合促进作用：本品口服给药对由醋酸诱发的慢性胃及十二指肠溃疡愈合有显著的促进作用,且效果优于奥美拉唑； 4）抗幽门螺杆菌作用：通过琼脂稀释法观察并比较本品与奥美拉唑的抗幽门螺杆菌作用,发现本品的抗菌活性与柠檬酸铋相似,MICS 为3. 13～12. 5 mg/ L ,而抗菌力为奥美拉唑的4 倍,其主要代谢物和2个酸转化重组产物也具有与母体化合物相同或更强的抗菌活性。 (4) 药物相互作用:通过对兰索拉唑的研究, 认为弱性诱导物细胞色素P450及单加氧酶系统是其作用的主要机制。兰索拉唑产生微弱的茶碱代谢率上升, 而导致循环中的茶碱减少, 这在临床上可能不会有明显的影响。同时, 也没有发现患者在服用苄丙酮香豆素( 华法令) 期间出现明显的对抗凝血酶原的作用。服用兰索拉唑对安定的作用也没有影响, 不会影响抗炎药的用量。 17、过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等特殊安全性试验资料及文献资料。 将兰索拉唑片配成适当浓度,观察豚鼠静脉注射后有无过敏反应、家兔静脉注射有血管刺激性及热原反应、体外溶血试验中是否具有溶血和血球凝集作用,小鼠静脉注射的急性毒性。结果豚鼠静脉注射兰索拉唑无过敏反应,家兔静脉注射兰索拉唑无血管刺激性及热原反应,体外溶血试验无溶血和血球凝集作用,小鼠静脉给药的LD50及95%的可信限为163. 8 mg/kg和150. 7～178. 0 mg/kg　 （1）材料 1）药品与试剂 兰索拉唑(Lansop razole, 15 mg) ;甲醛( formaldehyde, 500 mL /瓶) ; 1%新鲜蛋清(取1 mL 新鲜蛋清加生理盐水至100 mL) ,现用现配 2）动物：豚鼠,雄性,体重250～350 g;新西兰大耳白兔,雌雄兼用,体重1. 8～2. 5 kg。 （2）实验方法与结果 1）血管刺激性试验 取2. 0～2. 5 kg家兔6只,随机分为2组,每组3只。3 只家兔耳静脉注射兰索拉唑药液1. 4mg/kg,给药容积为5 mL /kg。3只家兔耳静脉注射等容积的生理盐水,每日1次,连续3 d,给药后肉眼观察注射处及远离注射处的血管反应,结果给药后未见血管有异常反应,与对照组血管比较无明显差别。依照表1标准对血管刺激性进行评分,给药组及生理盐水组各个家兔的得分均为0。末次给药后24 h将家兔处死,于注射处和远离注射处约5 cm处各取一段血管,固定于ψ = 10%的甲醛溶液中,石蜡包埋, HE氏染色,光镜检查(40 ×3. 2) ,观察其用兰索拉唑连续给药3 d,家兔注射处血管和远离注射处血管组织均未见明显异常改变,与生理盐水对照组家兔血管比较无明显差别,两组光镜观察评 分均为0,结论为无血管刺激性 表1　血管刺激性肉眼观察评分标准 表2　血管刺激性光镜观察评分标准 2）过敏试验 取雄性豚鼠,体重250～350 g,随机分为3组, 6只/组。实验组腹腔注射兰索拉唑药液0. 92 mg/5 mL·只- 1 ,隔日1次,共3次,阳性对照组同法注射等容量φ = 1%新鲜蛋清,空白对照组同法注射等容量生理盐水。首次给药后14 d,每组取3只,静脉注射兰索拉唑药液1. 84 mg/1. 0 mL·只- 1 ,空白对照组和阳性对照组分别静脉注射生理盐水和φ= 1%蛋清1. 0 mL /只,给药后立即观察动物有无喷嚏、搔鼻、干呕或咳嗽、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、休克和死亡等过敏反应,观察1 h,结果见表3。兰索拉唑药液和生理盐水组,无一过敏症状,蛋清阳性对照组100%休克。余下3只21 d后同法处理,观察相同指标,结果同前。 表3　兰索拉唑的过敏试验 3）体外溶血试验 家兔耳缘静脉采血,依文献方法[ 4 ] ,玻璃珠搅拌去纤维蛋白, 用生理盐水洗涤后离心( 1000 r /min, 10 min) ,反复数次直至上清液无红色,然后按体积比用生理盐水配成2. 0%红血球混悬液供试验用。每组取试管7支,按表4、5、6所示各管分别加入兰索拉唑药液不同体积药液和红血球混悬液,管6不加药,加生理盐水作空白对照,管7加蒸馏水作完全溶血对照。轻轻摇匀后,各管置37 ℃水浴中放置3 h,分别于15 min、30 min、45 min、1. 0 h、210h、3. 0 h各记录1次,共6次。依照表7标准肉眼观察有无溶血现象。末次观察后,将各试管充分振摇,观察有无沉淀和凝集现象,结果见表4～6。兰索拉