波尔山羊超数排卵后卵巢上的卵泡对胚胎移植成功率影响初探

波尔山羊超数排卵后卵巢上的卵泡对胚胎移植成功率影响初探 波尔山羊超数排卵后卵巢上的卵泡对胚胎 移植成功率影响初探 第22卷第6期试验研究19 波尔山羊超数排卵后卵巢上的卵泡对 胚胎移植成功率影响初探 杨亚卫,张秀峰,王改兰,尹海科,赵东林,张陇娟 (陕西省布尔山羊良种繁育中心,宝鸡721500) 摘要:采用阴道栓+FSH对波尔山羊进行超数排卵研究,结果明:卵巢上有卵泡的7只供体,胚 胎回收率为64.8%(68/105),有效胚率为98.5%(67/68),只均采有效胚数9.57枚?5.69枚,移植 妊娠率为20.6%(7/34),流产率为28.6%(2/7),产羔率为9.0%(6/67),羔羊断奶成活率为 83.3%(5/6);而卵巢上没有卵泡的l5只供体,胚胎回收率为58.4%(250/428),有效胚率为 98.8%(247/250),只均采有效胚数l6.47?9.08,移植妊娠率为54.0%(68/126),流产率为l4.7% (10/68),产羔率为30.4%(75/247),羔羊断奶成活率为86.7%(65/75),经f检验,移植妊娠率之 间,产羔率(产羔数/有效胚数)之间,只均采有效胚数之间差异均高度显着(P<0.01),其余各项指 标之间差异均不显着(P>0.05). 关键词:超数排卵;卵巢卵泡;妊娠率;产羔率 中图分类号:$827.36文献标识码:A文章编号:1007—9726(2002)06—0019—02 l与 1.1供受体羊选择选择健康,有两个以上正常情 期,繁殖机能正常的波尔山羊作供体,健康,无生殖 道疾病的4,5岁经产关中奶山羊作受体. 1.2材料超排药品,冲胚,移胚药品和器械. 1.3同期发情供受体羊阴道同时放置阴道栓,受 体早半天撤栓,撤栓后l,2天注意观察发情,记录 好第一次接受公羊爬跨时间. 1.4超数排卵采用阴道栓+340mg;}{三天六 次股二头肌注射,进行超排处理,最后一次注射时撤 栓,撤栓后注意观察发情,发情后配种(本交和人工 授精),连配3,4次,直至发情结束. 1.5采集胚胎在供体开始配种后的第7天,按常 规方法打开腹腔,拉出子宫,卵巢,观察记录黄体和 卵泡数,卵泡直径>0.5cm为大;0.5,0.3cm为 中,然后从子宫角采集胚胎,检出C级以上的可利 用胚净化后置于培养液中备用. 1.6胚胎移植将检出的可用胚胎随机移植给与 供体同期发情?24小时受体的黄体侧子宫角尖端, 每只移入l,3枚胚胎,术后,抗菌素连用两天,阴道 内放置阴道栓10--l2天,加强保胎工作,做好流产 收稿日期:2002一O1—07 第一作者简介:杨亚卫(1980一),男,陕西宝鸡人,大 专.主要从事胚胎移植的研究和推广工作. 记录,受体羊生产时,注意母仔护理. 2结果 表l供体卵巢上的卵泡与妊娠率的关系 项目卵泡组黄体组 供体数(只)7l5 黄体数(个)l05428 卵泡数(个)奎24无9无 冲胚数(枚)68250 胚胎回收率(%)64.8(68/105)58.4(250/428) 有效胚(枚)67247 有效胚率(%)98.5(67/68)98.8(247/'9.50) 只均采有效胚数(枚)9.57?5.69l6.47?9.08 受体数(只)34l26 移植胚数(枚)67255 妊娠数(只)768 流产数(只)l0 流产率(%)28.6(2/7)l4.7(10/68) 妊娠率(%)20.60(7/34)54.0(68/l26) 产羔数(只)675 产羔率(产羔数侑效胚数)(%)9.0(6/67)30.4(75/247) 断奶成活数(只)65 成活率(%)83.3(5/6)86.7(65/75) 从表l可以看出,超排后卵巢有卵泡的供体胚 胎回收率并不低,为64.8%(68/105),比黄体组 58.4%(250/428)还略高一点,但两者之间差异不显 20中国草食动物2002矩 着(P>0.05);有效胚率两组之问大抵相当;卵泡组 流产率28.6%(2/7)较高,但与黄体组流产率 14.7%(10/68)相比,差异不显着(P>0.05);成活 率两组之问也大抵相当,但卵泡组的妊娠率20.6% (7/34)与产羔率9.0%(6/67)极低,与黄体组相比, 差异极显着(P<0.001),只均采有效胚数差异也极 显着(P<0.001). 3结论 3.1供体超数排卵后,卵巢上存在的卵泡并不影响 胚胎回收. 3.2供体超数排卵后,卵巢上有卵泡存在,对胚胎 回收率,有效胚率影响不大,但对回收的胚胎移植妊 娠率和产羔率影响极大,也对只均采有效胚数影响 极大. 4讨论与建议 4.1黄体与卵泡的关系卵泡膜细胞主要分泌睾 酮,睾酮被颗粒细胞吸收,在高浓度芳香化酶的作用 下转变为雌二醇,而黄体细胞主要分泌孕酮.一般 认为雌激素促进组织的生长过程,而孕激素则可引 起组织分化,两者之间小剂量有协同作用,大剂量有 抑制作用.超数排卵后,卵巢上既有黄体存在,又有 卵泡存在的现象,是不是由于卵泡内膜释放大量的 雌激素对未返回子宫的胚胎有毒害杀伤作用,而造 成移植妊娠率和产羔率极低,有待进一步深入研究. 4.2建议采用小剂量FSH进行超排给予动物过 伴有卵巢明 量的FSH,会导致出现很多囊性卵泡, 显增大,增加FSH的浓度,并不加快卵泡的生长速 度,却能使发育已超过囊腔阶段的卵泡数目有所增 加.这次超排处理,采用340mgFSH,卵巢上有 卵泡存在的供体占处理供体的31.8%(7/22),而 2002年采用200mgFSH超排,处理的56只供体中, 采用腹腔镜观察,卵巢上很少有卵泡存在,平均采胚 l8.07?8.33(/"t=56),平均有效胚l8.04?8.32(/"t =56),可用胚率为99.8%(1010/1012).因此,建 议采用小剂量FSH进行超排. 4.3氯前列烯醇与卵巢上的卵泡李树静等 (1992)应用FSI-I300nag三天六次超排处理绵羊,一 组发情后肌注200单位LH,另一组在第4次注射 FSH时肌注l5一甲基PGF2~,发情后不用LH,发情 配种后第6日采卵,未排卵卵泡数PGF2~组(2?1) 显着低于LH组(5?5),且PGF2~组胚胎质量也优于 LH组,优级胚胎率分别为71%和59%l|.而我们 2002年的试验也证实这一点,取得了黄体均数 34.38?9.89,卵泡均数3.05?2.93,采胚均数 23.14?5.74,有效胚均数21.04?8.67,胚胎回收 率67.3%(486/722),有效胚率91.0%(442/486)( =21)的较佳成绩. 4.4促排3号与卵巢上的卵泡配种后给予LRH — A3,可使血中FSH和LH水平升高,促进LH排 卵峰提前,有增加排卵数量和改善胚胎质量的作 用;在给予任何剂量FSH的同时,添加少量LH, 几乎都无例外地引起卵泡生长明显加快和卵巢重量 明显增加.仲跻峰等试验也证实,注射LRI-I—A3 (60ug)后可同时刺激LH和FSH的释放,且诱导内 源性LH排卵前峰提前出现,诱导蜂和自然蜂合二 为一,卵巢上未排卵的卵泡数明显减少,可用胚有增 加的趋势.因此,笔者建议超排中可使用50,60 ugLRH—A3,对其跟踪观察,研究. 4.5建议供体避免使用孕马血清,受体少用或不用 由于孕马血清的半衰期长达40,120小时,虽仅 需注射一次,使用方便,但它的后效应问严重,排 卵后卵巢上仍有卵泡继续发育,影响以后妊娠和产 羔.因此,建议供体避免使用孕马血清,而受体卵巢 上有卵泡存在也影响妊娠率,平均为50%(15/30), 低于卵巢无卵泡的60.34%(35/58).因此,如果 受体要使用PMSG的话,就要研究撤栓前那一天注 射,注射多少国际单位效果较佳.还应研究繁殖季 节和非繁殖季节各注射多少为佳. 参考文献 [1]王亚光,段恩奎.EmbryoEngineeringinGoats[M].天 则出版社,1993.7,17. [2]高志敏,雷安民,窦忠英,等.布尔山羊胚胎移植技术 的研究与应用[A].1999--2000年全国养羊生产与学 术研讨会议论文集[C].兰州:草食动物杂志社, 2001,115,118. [3]渊锡藩,张一玲.动物繁殖学[M].天则出版社,1993. 28,30. [4]李树静,马玉山,余文莉,等.高寒放牧条件下绵羊超 排效果初报[A].动物胚胎移植及有关生物技术国际 学术研讨会论文集[C].国外畜牧学一草食家畜增 刊,1992,(8):52,55. [5]仲跻峰,董伟.使用GnRH类似物对蒙古羊超排及孕 酮,雌二醇,LH和附I内分泌的影响[A].动物胚胎 移植及有关生物技术国际学术研讨会论文集[C].国 外畜牧学一草食家畜增刊,1992,(8):56--58.