长爪沙鼠颌下腺免疫球蛋白A的定位分布

长爪沙鼠颌下腺免疫球蛋白A的定位分布 长爪沙鼠颌下腺免疫球蛋白A的定位分布 中国兽医科学2007,37(12):1066—1068 VeterinaryScienceinChina 中图分类号:R446.61:S852.161文献标识码:A文章编号:1673—4696(2007)12—1066—03 长爪沙鼠颌下腺免疫球蛋白A的定位分布 刘月环,吴旧生.,萨晓婴 (1.浙江省医学科学院浙江省实验动物中心,浙江杭州310013;2.浙江大学动物科学学院,浙江杭州310029) 摘要:采用免疫组织化学对不同日龄的长爪沙鼠颌下腺IgA的定位分布进行了研究.结果明, 长爪沙鼠的颌下腺由导管部和分泌部构成,分泌部主要由浆液腺构成,导管部包括闰管,纹管,颗粒曲管和小 叶间导管等.DAB显色结果表明,IgA阳性细胞主要分布于浆液性腺泡,闰管,纹管,颗粒曲管和小叶问导 管,并可分布于腺泡和腺管间结缔组织,IgA阳性产物的分布具有不均一性,无明显随年龄变化的规律性. 阳性产物分布于胞质中,胞核呈阴性,对照组阴性.提示从浆细胞产生或循环而来的IgA先经结缔组织进 入颌下腺组织,进而定位分布于浆液腺泡和各级导管,导管部有较多的IgA分布. 关键词:免疫球蛋白A;颌下腺;免疫组织化学;长爪沙鼠 LocalizationofIgAinsubmandibular LIUYue—huan,WUJiu—sheng.SAXiao,ying (1.ZhejfangCentreofLaboratoryAnimals,ZhejfangAcademyofMedicalSciences,Hangz hou310013,China; 2.CollegeofAnimalScience,ZhejiangUniversity,Hangzhou310029,China) Abstract:DistributionofIgAinsubmandibularglandofMongoliagerbilondifferentday— oldwas studiedbyimmunohistochemistrywithDABstaining.Thesubmandibularglandwascomposedofsecretory portionandductportion.Theformerwasmainlycomposedofserousaciniandthelattercontainedinterca— latedducts,striatedducts,granularconvolutedtubulesandinterlobularducts,etc.IgApositivecellsregu— larlypresentedinserousacini,intercalatedducts,striatedducts,granularconvolutedductsandinterlobular ducts.Theyalsopresentedattheconnectivetissuesamongtheaciniandducts.Thestainingpatternap— pearedunevenamongglandularaciniandnoregularlychangewiththeagetreatment.Thepositivereaction productwaslocalizedincytoplasm,whilethenuclearwasshownwithanegativestainingpattern.Theresultssug— gestedthatIgAfromlocalplasmacellsorfromserumwaspriortransportedintoepithelialcellsofaciniandducts bywayofconnectivetissuesunderneaththem.TherewasextensivedistributionofIgAinductportion. Keywords:immunoglobulinA(IgA);submandibulargland;immunohistochemistry;Mongoliagerbil 长爪沙鼠(Mongoliagerbil,Merionesungicu— latus)属哺乳纲,啮齿目,仓鼠科,沙鼠亚科,沙鼠 属,亦称长爪沙土鼠,蒙古沙鼠.浙江省实验动物中 心自20世纪70年代以来在实验室将野生长爪沙鼠 加以驯养,并按照远交繁殖方式建立了实验动物封 闭群[1],命名为Z:ZCLA.2000年起采用生物净化 技术(剖腹产)将普通开放环境饲养的群体(普通级) 升级为屏障环境饲养的群体(SPF级).30多年来, 对该动物进行了一般的生物学特性(基本生长发育, 繁殖,生理生化及行为学)研究l_2j,并将之用于出血 热疫苗的生产,产生了较高的经济效益和社会效益. 最近5年来,又对该动物进行了遗传学[5],病毒学 等领域的研究.长爪沙鼠具有独特的生物学特性, 已被作为动物模型,广泛应用于脑缺血,癫痫,寄生 虫病,行为学等方面的研究.现已知小鼠和大鼠的 颌下腺可产生多种蛋白质和肽类生物活性物质,它 们主要定位于颗粒曲管的细胞中[7_8j.免疫球蛋白 A(IgA)在黏膜免疫中起着关键作用,它能选择性地 穿过黏膜屏障,发挥中和损伤因子的作用.研究表 明,唾液中含有分泌型免疫球蛋白(sIgA),可在相 收稿日期:2007—09—13;修回日期:2007—1卜O6 基金项目:浙江省医学科学院青年科技人才基金项目(AS0703Q) 作者简介:刘月环(1974一),女,山东济宁人,助理研究员,硕士.吴旧生为通讯作 者,E-mail:wuiosh@ziu.edu.cn 第l2期刘月环等:长爪沙鼠颌下腺免疫球蛋白A的定位分布 应部位发挥局部免疫作用].IgA在黏膜组织中的 定位分布已有一些研究,如司徒镇强等..研究了 IgA在人唾液腺中的分布,但有关长爪沙鼠黏膜免 疫及IgA定位分布的研究国内外尚无文献报道. 研究slgA在长爪沙鼠唾液腺中的分布,对进一步 弄清楚长爪沙鼠的生物学特性具有重要作用. l材料与方法 1.1实验动物及试剂 浙江省实验动物中心屏障系统饲养的21,90, 360和720日龄长爪沙鼠各5只,生产许可证号: SCXK(浙)2003—0001.HRP标记羊抗小鼠1gA和 HRP标记蛋白A:购自Zymed公司(California); HRP标记羊抗大鼠IgA:Serotec公司(UK)生产; DAB显色系统:1abvision公司(UK)生产. 1.2免疫酶组织化学 用CO麻醉后处死动物,迅速采取一侧颌下腺, 预固定于100mI/L中性福尔马林溶液中,18h后 换液,继续固定l8,24h,流水冲洗6,8h,上行梯 度酒精脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋.切片厚5 , 8m,切片下行经二甲苯脱蜡,梯度酒精浸水,用 0.98mol/LHO进行内源性过氧化酶阻断l0 min,Tris盐酸缓冲液(TBS,pH7.6)洗涤,在EDTA 抗原修复缓冲液中(pH8.0),于80?水浴进行热抗 原修复30min,自然冷却至室温,TBS洗涤后用50 mL/L羊血清封闭30min,分为5组,其中4组分别 滴加1:50辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗小鼠 IgA,1:100HRP标记羊抗大鼠IgA和1:80 HRP标记葡萄球菌蛋白A,湿盒中于4?冰箱过 夜,TBS洗涤3次,每次10min;滴加DAB显色5, 10min,显微镜下观察,双蒸水浸泡2次,每次3 min,终止显色.苏木精复染细胞核1min,常规水 洗,上行酒精脱水,透明,中性树胶封片;对照组处理 方法同免疫组织化学染色组,仅以TBS代替HRP 标记抗体.另一组切片下行入水后,常规HE染色, 脱水,透明,中性树胶封片,Olympus显微镜观察并 拍照. 2结果 2.1HE染色组 在HE染色切片中,各个年龄组的长爪沙鼠颌 下腺结构未见明显年龄差异,均可见颌下腺的被膜 伸人实质,将颌下腺分为许多小叶,实质部分由导管 部和分泌部两部分组成,分泌部以染色深的纯浆液 性腺泡为主,偶尔可见染色浅的黏液性腺泡和混合 性腺泡,导管部由闰管,颗粒曲管,纹状管和小叶问 导管组成.颗粒曲管细胞胞质顶部含有染色较浅的 嗜酸性颗粒,根据颗粒的特性又可将其分为多颗粒 细胞,少颗粒细胞和无颗粒细胞3种.在腺泡上皮 细胞外面和导管外面分布有发达的肌上皮细胞. 2.2对照组 阴性对照组经DAB染色,问质内,颌下腺实质 内的导管部和分泌部均未见DAB着色. 2.3免疫组织化学染色 试验结果表明,3种抗体均可用于研究长爪沙 鼠颌下腺IgA的定位分布,1:100HRP标记的羊 抗大鼠IgA对长爪沙鼠IgA的染色效果优于1:50 HRP标记羊抗小鼠IgA和1:80HRP标记葡萄球 菌蛋白A.对于同种抗体,动物个体问的IgA分布 位置基本一致,但染色强度稍有差异.不同日龄组 问未见明显与年龄相关的规律性变化,各个日龄组 颌下腺样本均呈现IgA阳性染色反应.颌下腺的 闰管,颗粒曲管,分泌管,小叶问导管上皮均呈现 IgA强阳性反应,阳性细胞中反应颗粒大小一致,均 匀分布于胞质内,胞核未见阳性反应(见图1A).部 分浆液性腺泡也呈现IgA阳性反应,黏液腺腺泡上 皮细胞呈现阴性,在小部分腺泡问结缔组织中也可 见IgA阳性产物的分布.切片中,IgA免疫反应阳 性细胞呈现棕黄色至棕褐色,背景无色(见图1B). 3讨论 IgA是重要的局部免疫抗体,其二聚体通过糖 蛋白分泌片(secretorycomponent,SC)与腺上皮细 胞及导管上皮细胞成分连接,IgA阳性反应产物的 分布不但反映了IgA的组织分布,也问接反映了分 泌片在颌下腺的组织分布.本研究发现,IgA阳性 反应主要定位于导管上皮细胞和浆液腺细胞,这与 司徒镇强等..对人颌下腺分泌片的定位研究结果 相似.本研究中阳性反应仅见于部分浆液腺细胞, 提示IgA和分泌片在颌下腺中的分布具有不均一 性,部分腺泡及分泌物呈现阳性,而另一部分呈现阴 性,造成这种现象的原因有待进一步研究.研究结 果表明,分泌部的阳性反应强度比导管部的阳性反 应要弱得多,提示由浆细胞产生或循环转运至颌下 腺的IgA可能优先进入导管部的结缔组织中. 本研究结果还表明IgA主要由黏膜中的IgA 浆细胞产生,浆细胞先分泌出聚合IgA,然后在上皮 细胞的基底部以共价形式与SC结合,继之通过胞 吞作用形成吞饮小泡,然后以小泡形式被转运至上 皮细胞的游离缘,并以IgA一分泌片复合物的形式经 1068中国兽医科学第37卷 图lIgA在颌下腺中的定位分布DAB Fig.1DistributionoftheDAB-positivecellsproducingIgAinthesubmandibularglandofMo ngoliagerbil A;低倍镜观察结果;B;高倍镜观察结果;1:纹状管;2;颗粒曲管;3:闫管;4:浆液腺泡;5: 腺泡及腺管间结缔组织 A:Observationunderlowpowerobjective;B:Observationunderhighpowerobjectiver1:Str iatedduct;2;Granularconvolutedtubules;3;Inter— calatedduct;4:Serousacini;5:Theconnectivetissueamongtheglandularaciniandglandular ducts 胞吐作用释放入黏膜腔L1?,本研究中阳性浆液腺泡 和腺管上皮细胞的基底缘和游离缘的染色均相对较 深,细胞中部的染色相对较弱,也从形态学证实了这 种观点.本研究还发现,在部分腺泡和腺管间结缔 组织中也有较多的阳性反应产物和阳性细胞存在, 提示从淋巴组织转移而来的浆细胞先定位于腺泡和 腺管间的结缔组织中,由其产生的IgA形成分泌 后,先在腺泡上皮或腺管上皮细胞基膜中与上皮细 胞表面的分泌片结合,再转运入上皮细胞内. 参考文献(References) 聂金荣,聂朝晖.z:ZCLA长爪沙鼠培育及其生物学特性研究 [J].医学研究通讯,2004,33(6):27—28. 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