妈妈再爱我一次观后感800字

吸烟及饮酒致胰腺损伤的实验研究孙轸1郝建宇2庞宝森王凝之1山东省聊城市人民医院2首都医科大学附属北京朝阳医院目的研究单纯吸烟以及吸烟和饮酒同时存在时胰腺损伤情况，探讨其可能作用机制。通过被动吸烟及饮酒诱导大鼠胰腺损伤。测定血清白介素一6(interleukin．6，Ⅱ，6)水平，胰腺组织中超氧化物歧化酶(superoxidedismuate，SOD)活性、单核细胞趋化蛋白．1(monocytechemoattractantprotein．1，MCP．1)及羟脯氨酸水平。HE染色观察胰腺组织病理学改变，免疫组织化学染色观察甜平滑肌肌动蛋白(a-smoothmuscleactin，a-SMA)达情况。结果与对照组相比单纯吸烟和饮酒都能够导致胰腺腺泡胞浆空泡样变，激活胰腺星状细胞，增加胰腺内羟脯氨酸含量，加剧胰腺内氧化应激反应，并且吸烟和饮酒同时存在时能够加重上述改变；吸烟组血清IL一6及胰腺组织MCP-1表达明显高于对照组，饮酒组MCP-1低于对照组；单纯吸烟和饮酒均可降低胰腺内SOD活性，吸烟加饮酒组降低更加明显。结论①长期吸烟能够导致大鼠胰腺组织出现空泡样改变、诱导血清炎性因子及组织趋化因子表达增加、加剧胰腺组织内氧化应激反应、进而激活胰腺星状细胞，引起胰腺组织羟脯氨酸水平增加导致胰腺纤维化。②吸烟和饮酒同时存在能够加重胰腺损伤。其机制之一可能是两者同时存在时能够进一步加重胰腺组织内的氧化应激反应。关键词吸烟；饮酒；细胞因子；氧化应激当前，吸烟是危害健康的主要环境因素，影响人体几乎所有的器官系统。就胰腺而言，研究发现吸烟是慢性胰腺炎(chronicpanereatitis，CP)的一个主要危险因素，并且吸烟作为胰腺癌的环境危险因素已经得到广泛的认同。然而，吸烟究竟是一个独立的致病因子还是其它危险因素的一个协同因素需进一步明确。香烟烟雾中含有大约4000种化学物质，包括一些已经明确的致癌物。但是，迄今为止尚未发现香烟中的致癌性物质可以导致胰腺早期炎症或者胰腺纤维化。尼古丁是烟草和烟雾中的主要活性成分，在实验模型中，尼古丁处理后可以导致胰腺急性炎症反应，却不能诱导慢性炎症改变。由此可见，仅仅用香烟中的致癌物质或尼古丁来解释香烟对胰腺的损伤作用是不全面的，还有待更多的研究以明确香烟中其它有害物质与胰腺损伤的关系。研究表明吸烟者体内存在氧化和抗氧化体系失衡，吸烟者氧化应激负荷增加，从而导致组织损伤。目前已经明确乙醇在胰腺腺泡内通过氧化途径代谢过程中产生活性氧簇(reactiveoxygenspecies，ROS)，因此，可能通过氧化应激这个共同的途径吸烟和饮酒同时存在时能够进一步加重组织损伤。本实验将大鼠暴露于香烟烟雾和酒精两个因素，研究吸烟以及吸烟和饮酒两个因素同时存在时胰腺损伤情况，并探讨其可能的作用机制。1．实验动物雄性Wistar大鼠，体重200--一3009，购于中国药品生物制品检定所实验动物中心。2．实验材料中南海香烟购于北京卷烟厂。牛栏山二锅头购于北京市顺义区牛栏山镇。抗a-SMA抗体为Sigma公司产品。羟脯氨酸、SOD检测试剂盒为南京建成生物研究所产品。MCP．1、几一6检测试剂·138·盒为上海森雄科技实业有限公司产品。3实验方法(1)动物模型的$4备：Wistar大鼠130只，随机分为4组：对照组10只，吸烟组30只，饮酒组42只，吸烟加饮酒组48只。熏箱体积为60crux30crux20cm，两侧各设5cmxl0ClB通风口，吸烟组太鼠放置于熏箱内，每天吸烟2次，每次16支．每次持续时问70nfin：饮酒组用灌胃法以79／kg·天—给予50％酒精，分2次灌A；吸烟加馈洒组给予同样的烟及酒精：对照组不作任何处理．连续12周。分别在4㈣8w12w周将太鼠处死．每个时间点各组各取10只，对照组太鼠于12周与实验组太鼠同时处死。(2)经腹主动脉取血咀备血清IL-6水平测定。胰腺头部组织行HE和免疫组化检测；其余部分行SOD活性，羟脯氨酸及MCP+I含景测定。4统计学方法计量资料用i曲D表示，使用SPSSl30统计软件，数据处理采用单因素方差分析，以P<005为有统计学意义，P<0．0I有显著的统计学意义。结果l胰腺组织形态学结果：在8周和12周时吸烟组分别有20％(2t10)、30％(3／10)，饮酒组40％(4／10)、40％(4／10)，吸烟加饮酒组40％(4／10)、50％(5110)胰腺腺泡出现空泡样改变．尤以12周吸烟加饮洒组明显，三组丈鼠各时问点爽性细胞浸润均不明显。(见图1--4)图l正常大鼠胰腺组织(HE．x200)图2吸烟组12w大鼠胰腺组织(HE．x200)图3饮酒组12w大鼠胰腺组织(HE，x200)图4吸烟加饮酒组12w太鼠胰腺组织(HEx2CO)2a-SMA检测结果：与对照组相比12周吸烟组、饮洒组并有20％(200)太鼠．吸烟加钦酒组有30％(3／10)太鼠胰腺组织除血管及导管壁外胰腺实质内有ft-SMA阳性染色，尤以吸烟加饮酒组染色明显。(见图5，6)·139·图5对照组胰腺组织(旺_sMA免疫染色x2(】0)国6吸烟加馈酒组12w胰腺组织(Ⅱ-SMA染色x200)3羟脯氧酸含量：8周时各实验组组织内羟脯氮酸水平与对照组相比P<001，且随时间延长组织内羟脯氢酸水平运渐州高．哦烟组及饮洒组8周与12周相比具有显著统计学差异(P<0叭．P<。01)．吸烟加饮酒组8周与12周相比P(o05，同一时间点吸烟加饮酒组与吸烟组及饮酒组相比升高更加明显，其中8周时吸烟组与吸烟加饮酒组相比P柏05。(见囤7)图7组织羟脯氨酸音量-k与对照组相比P(001：＆吸烟组与吸烟加饮酒维P<0．05，T吸烟组8周与12周相比P<001§饮酒组8周与12周相比P<0叭，★吸烟加饮酒组8周与12周P(0n5。4血请IL．6水平：与对照组相比吸烟组大鼠并时问点血清IL-6值升高．p<O0l，饮洒组及吸烟加饮酒组IL-6与对照组相比没有统计学差异。吸烟组随时间延长血靖IL6水平逐渐增加，4周与12周相比P<00l。(见图8)罔8血清几{水平}与对照纽相比P<。01；T吸烟组4周与12周相比P(005．MCP-1含量：与对照组相比吸烟组及吸烟加饮酒组各时间点大鼠胰腺组织内MCP．1含量增加，P<0．01，饮酒组MCP．1含量降低，各时问点与对照组相比P<0．01；同一时间点吸烟组及吸烟加饮酒组与饮酒组相比P<0．01，8、12周吸烟组与吸烟加饮酒组相比P<0．01；吸烟组及吸烟加饮酒组随时间延长MCP-1含量逐渐增加，同一组内各时间点相比P<0．01，饮酒组随时间延长逐渐降低，饮酒组4周与8周相比P<0．05。(见图9)图9组织MCP一1水平★与对照组相比P<0．01，▲吸烟组与饮酒组相比P<O．01，l吸烟组与吸烟加饮酒组P<0．01，▲饮酒组与吸烟加饮酒组相比P<O．01；☆吸烟组4周与8周相比P<0．01，V8周与12周相比P<0．01。●饮酒组4周与8周相比P<0．05，#吸烟加饮洒组4周与8周相比P<0．01，-k8周与12周P<o．05。6．SOD活性测定结果：与对照组相比各组大鼠自4周起即出现胰腺组织内SOD活性降低，其中饮酒组8、12周、吸烟组及吸烟加饮酒组各时间点与对照组相比，均具有显著的统计学差异；各组内SOD活性随时间延长无明显变化；其中吸烟加饮洒组降低更加明显，4、8周吸烟组、8周饮酒组与吸烟加饮酒组比P<0．01。(见图10)图10组织SOD活性※与对照组相比P<0．05，★与对照组相比P<0．01；＆吸烟组与吸烟加饮酒组相比P<O．05。▲饮酒组与吸烟加饮酒组相比P<O．01：·141·讨论研究发现动物暴露于尼古丁中可以导致胰腺腺泡空泡样改变。同样酒精也能够导致不同细胞胞浆出现空泡样改变，并认为可能是酒精的直接毒性作用所致。本实验中在8周和12周时吸烟组分别有20％(2／10)、30％(3／10)，饮洒组40％(4／10)、40％(4／10)，吸烟加饮酒组40％(4／10)、50％(5／10)胰腺腺泡出现空泡样改变，尤以12周吸烟加饮酒组明显。表明吸烟和饮酒都可以损伤胰腺腺泡细胞，两者同时存在能够进一步加重其损伤。研究表明吸烟者体内存在氧化和抗氧化体系失衡，吸烟者氧化应激负荷增加。其原因可能是每口烟雾中含有大约1017自由基和4700种化学复合物，这些化学复合物能够通过芬顿反应产生羟基自由基和过氧化氢进一步加重氧化应激。乙醇在胰腺腺泡内代谢过程中生成的活性氧簇对细胞成分如脂质膜、细胞内蛋白和DNA具有潜在的损伤作用，导致溶酶体膜及酶原颗粒膜极度不稳定，可能使溶酶体酶和酶原颗粒更加容易接触，从而导致胰酶过早激活引起急性胰腺炎。SOD活性的改变提示氧化应激途径活化。通过测定胰腺组织内SOD活性可以反映机体清除氧自由基的能力以及机体细胞受自由基攻击的程度。本实验SOD结果提示吸烟和饮酒都能够导致大鼠胰腺氧化应激反应增强，与其它一些研究一致。两者同时存在时氧化应激更加严重。细胞因子及趋化因子致胰腺损伤的作用越来越受到人的关注。研究表明IL一6及MCP．1在急慢性胰腺炎中起重要作用。本实验结果提示吸烟能够导致血清IL．6及胰腺组织内MCP-l表达增加，而饮酒抑制其表达。ZOUNi等发现给予二手烟冷凝物溶液处理后，人动脉壁的内皮下层及平滑肌细胞层血管细胞粘附因子一1(vascularcelladhesionmolecule．1，VCAM—1)、MCP．1和几一8表达明显增加。Se．RanYang等研究中发现烟草萃取物(cigarettesmokeextract，CSE)CSE能够导致人单核细胞系MonoMac6促炎细胞因子释放，可能是通过氧化应激途径，进而激活NF—rB来实现的。但吸烟后胰腺内MCP．1表达情况至今没有相关报道，本实验及其它研究发现吸烟者胰腺内氧化应激增加，可能通过氧化应激激活氧化还原敏感转录因子，如NF—r．B，进而诱导胰腺组织MCP．1及血清IL一6表达增加。FFortunato等研究发现S．D大鼠饮用含酒精(6％)的液体饮食14周后导致胰腺组织MCP．1、IL一6明显降低。伴有NF．心活性降低，我们的结果与之一致。因此，可能吸烟通过活化NF—r,B诱导IL一6和MCP．1表达，而饮酒则通过抑制NF．r,B活性降低IL．6和MCP．1表达。纤维化是慢性胰腺炎的标志。FFortunato等研究发现，慢性酒精处理大鼠(酒精浓度为6％)14周后电镜观察发现胰腺腺泡周围纤维化。近年来发现PSC在胰腺纤维化中起关键作用，在各种刺激因素作用下(也可能通过自分泌方式进一步持续活化)PSC发生活化，表达a-SMA，并且产生CoI等细胞外基质，导致ECM合成和降解失衡，合成过多的ECM蛋白导致胰腺纤维化。体内外实验均证实氧化应激、细胞因子、MCP．1、乙醇及其代谢产物等能促进PSC活化。本实验结果提示吸烟和饮酒都能够激活PSC，两者同时存在时PSC活化程度更明显。羟脯氨酸是胶原的主要组成部分，其含量升高表明组织内胶原含量增加。本实验羟脯氨酸测定结果与ot-SMA基本一致，但4、8周时胰腺内PSCa．SMA染色不明显，可能是因为PSC在胰腺内的含量很少(3．99％)，活化程度较轻所致。但是两者都表明吸烟能够导致PSC活化，进而胰腺内胶原合成增加导致胰腺纤维化，吸烟和饮酒同时存在时纤维化程度进一步加重。综上所述，我们的研究表明通过加剧胰腺组织内氧化应激反应、诱导炎性细胞因子及趋化因子表达吸烟能够导致胰腺损伤。吸烟和饮酒同时存在时能够加重胰腺损伤。其机制之一可能是两者同时存在时能够进一步加重胰腺组织内的氧化应激反应。·142·