干扰素对新城疫灭活苗抗体滴度的影响

干扰素对新城疫灭活苗抗体滴度的影响 安徽农业科学,JournalofAnhuiA.Sci.2008,36{31):13639—13640,13647责任编辑李 玮责任校对张士敏 干扰素对新城疫灭活苗抗体滴度的影响 王艳,王新卫,周欣,王淑贤(河南农业大学牧医工程学院,河南郑州45o0o2) 摘要[目的]探讨干扰素对新城疫(ND)灭活苗抗体滴度的影响.[方法]将20只20 日龄雏鸡随机分成A,B,c和D(CK)组,每组5只. 分别皮下注射新城疫灭活疫苗0.5ml/羽,同时给雏鸡注射高(4单位),中(2单位) 和低(1单位)剂量的干扰素,对照组不加,检测雏鸡新 城疫病毒抗体滴度.[结果]结果表明,免疫7d后,高,中和低剂量组抗体水平一致, 并开始上升,3组剂量组之间无明显差异;14d后中 剂量组水平稍高,与其他3组均差异显着,呈现一定的剂量差异;21d后3组都升 高,但中剂量组抗体水平最高,对照组与其他3组均有 显着差异;在免疫28d后4个组的抗体水平均下降,但中剂量组抗体水平仍最 高.[结论]干扰素可提高新城疫抗体滴度,以中剂量添加 效果最好. 关键词干扰素;抗体滴度;鸡新城疫 中图分类号S852.3文献标识码A文章编号0517—6611(2008)31—13639—02 EffectsofInterferonOnAnU’bodyTiterofIDactiYeNDVaccine ? Yanetal(CollegeofAnimalHusband~andVeterinary,HenanAgriculturalUniversity,2~engzhou,Henan450002) Abstract[Objective]ThepurposewastodiscusstheeffectofinterferononantibodytigerofNDvaccine.【Method]Thetestingchickensweredivided into4groupsnamedgroupA,B,CandD.Everygroupfive,whichWaStreatedwithinterferonandNewcastlediseasevaccine.dosageofinterferon wasdividedintogroupofhighdose,middledose,lowdoseandthecontrolgrouptOdetectantibudytiterofNewcastlediseaseviresinchickenbyusing hem-agglutinationinhibition.[Result]Theresultsshowedthattheantibodytitersat7dayafterimmunitywasconsistentamongA,BandCgroupsandsig— nificantlyincreasedinhigh,middleandlowdoseofinterferongroup,conva~withthecontro1.Butat14dafterinoculation,tlIemiddledoseperformed bestamongallgroupsandhadsignificantdifferencewithother3groups.At21dafterhrrmnity,theantibodytiterwashighestinallexperimentalpro? cess,butmiddledosewasbestamongthe4groups,andCKgrouphaddistinctdifferencewithother3groups.At28dafterhramnity,theantibodytiter wasdecreasingamongthe4groups,butantibodylevelofmiddledose?stillhighestthanother3groups.1Conclusion]Theinterferonwillimproveanti— bodytiterofNDvaccine,however,theeffectofappendingmiddledoseisbest. KeywordsInterferon;Antibodytiter;NewcastleDisease 鸡新城疫是由新城疫病毒引起的一种急性,热性和高 度接触性传染病.该病自1926年发现以来,已广泛流行于世 界各地,严重地影响养鸡业的发展.目前,控制与预防新城 疫发生的重要手段依然是施行科学合理的免疫接种Eli.但 仅靠疫苗的免疫接种是不够的,因为在实际生产中,常由于 气温,环境应激,药物和病原等多种因素的干扰,造成免疫状 态低下,致使机体对外源性刺激应答不力,导致疫苗免疫效 果不理想[2-3J.为加强疫苗的免疫效果,研究者采用佐剂等 免疫增强剂与抗原物质合并使用.其中,免疫增强剂可非特 异陛地增强抗原物质的免疫原性,增强机体的免疫应 答l4-6J.生物制剂类如干扰素就是其中一种,它具有抗病 毒,抑制细胞分裂,调节免疫和促进细胞凋亡等多种生物活 ,干扰素被广泛用于动物病毒病的治疗,抗肿 性作用.因此 瘤和免疫调节等方面,具有药效快,无残留和无耐药性等优 点,深受养殖业的青睐_7I1.笔者将新城疫灭活疫苗与不同 剂量的干扰素混合使用,通过监测鸡新城疫病毒(NOV)抗体 规律,观察干扰素对正常鸡体液免疫是否具有免疫增强作 用以及剂量不同时对新城疫抗体的影响,从而探索其作为佐 剂在生产中的实际应用价值. 1材料与方法 1.1时间和地点该试验研究于2O08年3月至5月在河南 农业大学禽病研究所进行. 1.2材料 1.2.1动物.113龄雏鸡购于郑州某养殖厂,隔离喂养至20 13龄.将试验用鸡随机分成A,B,c,D4组,每组5只.处理 组与对照组均注射新城疫疫苗0.5ml/羽,但处理组同时添加 作者简介王艳(1983一),女,河南正阳人,硕士研究生,研究方向:动 物传染病.*通讯作者. 收稿日期2008.09.04 干扰素,A组添加量为4单位,B组2单位,C组1单位,D组 为空白对照,疫苗中添加生理盐水. 1.2.2药品.干扰素购自中国科学院微生物所下属公司产 品制品.鸡新城疫灭活苗,由禽病研究所提供.0.75%鸡红 细胞,采自禽病研究所的SPF鸡血液,自制.生理盐水病毒 稀释液由禽病研究所提供. 1.2.3仪器.振荡器,一次性注射器,针头,96孔”v”形血 凝板,微量移液器,温箱和冰箱等. 1.3方法A,B,C组分别用高,中,低剂量的干扰素与新城 疫灭活疫苗肌肉注射免疫17日龄鸡,D组为试验对照组,只 免疫新城疫灭活疫苗.于免疫后第0,7,14,21和28天分别 对4组鸡翅下静脉采血,在37?温箱放置1h,分离血清,一 20?冷冻保存,待检.采用HA和}{I法检测新城疫抗体水 平,并求其平均值. 1.3.1红细胞悬液的制备.将采自雏鸡的新鲜血液用4% 抗凝剂抗凝.首先将抗凝剂装入抽血注射器里,与血轻轻混 匀,慢慢倒入刻度锥形离心管中,加入一定量0.85%的生理 盐水,1000r/min,离心10min,弃去上清液,再加入20,30倍 于红细胞的生理盐水,悬浮红细胞后,再离心,如此重复洗涤 红细胞3,5次,最后弃掉上清液,按红细胞的压积用生理盐 水配成0.5%的红细胞悬液. 1.3.2HA试验.HA和m预先进行HA试验,测定新城疫 病毒鸡胚尿囊液的血凝效价,根据血凝效价用生理盐水稀 释,使之含有4个血凝单位,用微量移液管往”V”形微量反应 板上加稀释液,每孔25,取25被检血清加入第一孔,混 匀后取25移至下一孔,如此倍比稀释到倒数第二孔,最后 一 加入含4血凝单位的NDV凝集抗 孔作为凝集抗原对照孔, 原25l/孔,然后把微量反应板放入37?温箱15min,取出反 应板,每孔加25红细胞悬液,震荡30s,置室温下,直至阳 13640安徽农业科学2008盎 性对照血清出现结果,即红细胞呈圆点沉淀孔底.如果红细 则表明待检血清不含NDV抗体,判为血 胞呈单层覆盖孔底, 凝抑制阴性.能完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释度判 为被检血清的?效价,以log2表示. 1.4统计学处理采用SPPS统计软件进行数据分析 与处理. 2结果与分析 2.1免疫后0d抗体水平免疫后0d其抗体水平为A组5 只鸡ND平均Hl抗体滴度为2.2log2,B组为2.0log2,C组为 2.2log2,对照组为2.0log?+.但4组抗体水平基本一致,无统 计学意义. 2.2免疫后7d抗体水平免疫后7d,A组5只鸡ND平均 HI抗体滴度为6.4log2,B组为5.8log2,C组为6.8loO-,对照 D组为4.6log2;A,B,C3组与对照D组均差异显着,而A,B, c3组之间无明显差异,说明添加干扰素后对疫苗具有影响, 但在免疫后7d,抗体水平一致,无剂量差异. 2.3免疫后14d抗体水平免疫后14d,A组5只鸡ND平 均HI抗体分别为5.4log2,B组为6.2log2,C组为5.2log2,对 照D组为4.6log2;A,C,D3组抗体水平无显着差异,但B组 与其他3组均差异显着,呈现一定的剂量差异. 2.4免疫后21d抗体水平免疫后21d,A组5只鸡ND平 均HI抗体滴度为7.6log2,B组为9.2log2,C组为7.4log2,对 照D组为5.8log2;B组抗体水平较高,对照D组与其他3组 均有显着差异,但A,c组与B组的抗体水平也差异显着. 2.5免疫后28d抗体水平免疫后28d,A组5只鸡ND平 均H1抗体滴度为5.8log2,B组为7.6log2,C组为4.8log2,对 照D组为4.6log2;B组抗体水平较高,与A,c,D3组差异均 显着,而A,C,D3组之间的抗体水平无统计学意义. 2.6免疫后不同时期的各组平均抗体水平对以上免疫后 不同时间的平均抗体水平进行处理(表1),绘出注射不同剂 量的干扰素前后鸡的血清抗体水平曲线(图1).SPSS软件 统计分析表明,对照D组与其他3组均有显着差异,表明添 加干扰素可提高新城疫疫苗免疫后的抗体水平.而对于添 加剂量,高剂量A组与低剂量c组之间无明显差异,抗体水 平一致.但中剂量B组与高,低剂量组之间具有显着差异, 表明中剂量添加对提高疫苗抗体水平具有最好的效果. 表1免疫后不同时期鸡新城疫灭活疫苗的各组平均抗体水平 Table1Averageantibodylevel0fchickennewcastlediseaseinaclivated vaccinein~aohgroupiIldifferentstageafterinmamizadon 组别 Group 免疫后不同时间平均抗体水平?lo Averageantibodylevelaldifferenttimeafterinmluniz~ion 14d 5.4 6.2 5.2 4.6 21d 7.6 9.2 7.4 5-8 28d 5-8 7.6 4.8 4.6 A B C D(CK 2.2 2.O 2.2 2.O 64 5-8 6.8 4.6 3结论与讨论 近年来,干扰素已在兽医临床方面,特别是在猪,鸡,犬 病毒性疾病的治疗方面取得了良好效果].其中,参与免 疫调节的干扰素为IFN—Y,又称为免疫调节作用干扰素.其 有利于巨噬细胞对抗原的吞噬,K,NK细胞对靶细胞的杀伤 i 重 量 堪 羹 采血时间SamplingtimeofbRx3d?d 图1免疫后不同时期各组鸡新城疫灭活疫苗的平均抗体水平 Hg.1Theaverageantibodylevd0fchickennewcastlediseaseinacti- ratedvacdneineaohgroup.mdifferentstageafterinm.miza- fian 以及T,B淋巴细胞的激活,增强机体免疫应答能力.IFN—Y 可使巨噬细胞表面~?{c?类分子的表达增加,增强其抗原递 呈能力.此外,还可以通过增强巨噬细胞表面表达Fc受体, 促进巨噬细胞吞噬免疫复合物,抗体包被的病原体和肿瘤细 增强其吞噬能力, 胞lI9_J.同时还可以刺激中性粒细胞, 活化NK细胞,增强其细胞毒作用等来参与免疫调节.因此, 此类干扰素作为佐剂,应用前景看好.该研究表明,在ND疫 高,中,低剂量 苗中添加干扰素可以提高免疫抗体的作用. 的干扰素在免疫后的不同时期对雏鸡的影响作用有显着差 中,低剂量3组与对照组均差异显着, 异.在免疫7d后高, 而高,中,低剂量3组之间无明显差异,说明添加干扰素后对 疫苗具有影响,但在免疫后7d,抗体水平一致,无剂量差异. 在免疫14d后,中剂量组与其他3组均差异显着,呈现一定 的剂量差异.在免疫21d后中剂量组抗体水平较高,对照组 与其他3组均有显着差异.在免疫28d后4个组的抗体水 平均下降,但中剂量组抗体水平仍最高.试验中最高剂量组 抗体水平没有出现过最高,说明剂量过大时免疫效果反而不 明显.中剂量在免疫后的第14天开始出现剂量差异,到免 疫后的第21天出现高峰.低剂量组抗体水平一般,也未出 现剂量差异.对照组的抗体滴度虽然随着免疫日龄的增加 有所升高,但却未超过添加佐剂的试验组水平.由此可知, 在免疫时添加干扰素可以发挥协同作用,增强免疫效果,与 添加剂量和免疫天数有一定关系.试验结果表明,中剂量的 干扰素在免疫后第21天可以在体内发挥最佳抗体水平,为 临床使用干扰素做佐剂提供了参考依据.但需要进一步研 究效价后的其他附带作用,为早日开发具有临床应用价值的 干扰素佐剂奠定基础. 参考文献 [1]张晓根,汪德刚,邢钊畜禽免疫防制手册[M].北京:中国农业出版 社,2OO3:79—83. 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(下转第13647页) 36卷31期杨克礼等猪无名高热症流行情况调查13647 4发病原因 但没有人 猪无名高热症疫情目前虽尚未得到有效控制, 被感染的报道.国内学者正在对该病的病原进行研究.笔 者通过调查认为发病原因主要有以下几点:(i3自2(105年9月 以来,生猪价格下跌,有些养猪场(户)疏于管理,免疫注射 和消毒措施不到位;有的小农意识强,认为养猪不赚钱就喂 ,甚至免去了预防保健药物,也不采取防暑降温措 低劣饲料 施,使猪群处于亚健康状态.另外,许多养猪场和养猪户外 购大量猪苗,同时也将不同地区的多种病原体带回了猪场, ?自2OO6年5月开始,中南,华东 埋下了疫病暴发的隐患. 地区气温较高,进入夏季持续高温.许多猪场猪舍饲养密度 ,隔热条件差,猪群遭遇严重的热应激;再 过高,通风能力低 加上2005年北方玉米收割季节多雨,玉米霉变严重,饲料中 有大量的霉菌毒素,霉菌毒素能导致畜禽产生免疫抑制,引 起猪群免疫失败.猪只摄人霉菌毒素后,疫苗接种效果不理 想,使猪群抗体偏低,对疾病的抵抗力降低,因而容易导致疾 病的暴发….?猪群免疫和保健工作不健全.由于猪价低, 许多中,小型猪场为了节约成本,减少了猪群药物保健,驱虫 和疫苗接种的内容,而免疫程序不合理,免疫剂量不足造成 免疫失败以及免疫病种不全,是造成该次疫病流行的又一主 要原因.?近年来,许多猪场已感染了猪圆环病毒2型,猪 繁殖障碍与呼吸综合征等免疫抑制性疾病,导致猪只机体免 疫功能和抵抗力降低.猪群在注射疫苗后抗体水平仍然较 低,容易诱发猪瘟,猪流感及多种细菌,支原体等疾病.?当 前国内生物制品市场混乱,药品管理不规范,产品质量难以 控制;加上养殖户缺乏疫苗药物产品知识和产品质量意识, 部分兽医或营销人员缺乏应有的责任心,使得疫苗选择欠 妥,药物应用不当,从而无法达到预防保健的目的.?死亡 猪只未能及时正确无害化处理.个别猪场(户)把死猪扔于 场外,置于荒坡沟壑,甚至河流中;病猪或潜伏感染猪进入市 场流通,使得疫情不断蔓延,并在某些疫区疫情出现反复. ?发病猪场病急乱投医,超常规注射疫苗和滥用药物;个别 药品经销商和地方无证兽医因知识经验所限,尽管急猪场之 所急,可推销的是与病情控制无关的疫苗和药物,使得猪场 雪上加霜,病猪死亡加速,死亡率提高. 5预防措施 5.1加强疫苗免疫猪场尸体剖检见有猪瘟病变,实验室 检测发现猪瘟抗体偏低或参差不齐,甚至出现免疫不合格现 象.应重新审视猪瘟免疫程序和猪瘟疫苗,检查疫苗保存条 件和疫苗稀释注射操作.免疫程序要科学,免疫工作要扎 实,要重点做好猪瘟,伪狂犬病,蓝耳病等的预防与控制工 作,切实提高机体免疫力. 5.2搞好消毒工作尽快隔离病猪,及时无害化处理死猪. 应用高效安全无刺激的消毒剂,如安灭杀消毒剂,对猪舍内 环境带猪每隔1,2d消毒1次,力求到位彻底.消毒前应先 再按规定的浓度和剂量稀释消 清扫干净,用足量的水冲洗, 毒剂,进行消毒.对外部环境每天进行2次严格消毒.猪场 生活管理区每日消毒1次,限制人员车辆物品进出,及时封 场,尽量停止从其他猪场购猪.消毒运输肥猪的车辆最好停 于猪场2lm1以外,在进出猪台时,再次严格消毒,以防病原 . 随运输车辆传播 5.3加强管理注意防暑降温;保证饮水,确保清洁;调整 饲养密度,合理分群,减少热应激产生的可能性;搞好环境 捕鼠,灭蝇工作.养殖场一旦发 卫生消毒,定时开展驱虫, 生猪高热病例,应立即隔离,观察,治疗,减少传染,对病死 不得食用,销售 猪及无治疗价值的病猪立即作无害化处理, 或外运. 5.4坚持自繁自养,实行全进全出制尽量不要从场外购 买种猪,尤其不要从场外批量购买仔猪进行育肥.如果确实 需要,也应在充分了解当地疫情后再决定.将种猪购回后, 要隔离观察1个月,确认正常后方可混群饲养.从分娩,保 育,育肥到出栏,要严格执行”全进全出”制度,要将这一制 度贯穿整个生产过程,尽量减少猪群转栏和混群次数,减少 应激反应,减少感染机会. 5.5提高营养水平平时要注意维持饲料营养成分的均 衡,疫病流行期间适当提高饲料营养水平,以增强机体抵 抗力. 5.6正确施治用药猪场管理人员要加强动物防疫和兽医 诊疗技术学习,尽量聘用专业兽医人员对该场进行全面管理 或技术指导,真正做到正确用药,避免误诊误治,或贻误最 佳治疗时机. 参考文献 [1]赵坤,李培庆,李敬玺,等.猪免疫抑制综合症的发生与防~lJEJ].安徽 】科学,2005,33(11):2074—2075,2081. (上接第13640页) [7]任铃,赵洪忠.鸡干扰素分子生物学研究进展[J].黑龙江畜牧兽医, 2003(9):69—70. [8]王玉东,刘俊辉,黄秀梅,等.禽用干扰素对新城疫弱毒疫苗的干扰作 用[J].山东家禽,2003(7):6—8. [9]郑仲金,李毅,李凤荣,等.干扰素在治疗畜禽病毒性疫病上的应用 [J].当代畜牧,21307(7):15—16. [10]马忠莲,尹启宝,王强,等.干扰素在鸡病毒性疾病中的应用效果[J]. 新疆畜牧业,20.B(2):31—32.