肠道病毒71型VP1蛋白二级结构及B细胞表位的预测

肠道病毒71型VP1蛋白二级结构及B细胞位的预测 肠道病毒型 蛋白二级结构 :,,,, , 及 细胞表位的预测, ,,,，，王 锦许 国 章倪 红 霞 ,，摘 要 目 的 预 测 基因亚型肠道病毒 型 的 蛋白二级结构及 细 胞 表 位 为 疫苗研制提供 理 论 基 :, ,, ,,, , ，,,, 。础 。 方 法 本研究将宁波地区 分离株与国内外 代表株进行同源性和 并构建亲缘进化树 以 基 因 序 列 为 材，,,,，,,,,,, ，、，、、料 应 用 服 务 器 上 的 两种分析预测蛋 白 质 二 级 结 构 并结合蛋白质 的 亲 水 性 柔 韧 性 表 面 ，,,,,, ,:,,,:,,, , 可 。 ，能性等指标综合评价 蛋 白 的 细 胞 抗 原 表 位 结 果 同 源 性 分 析 和亲缘进化分析得出 年 宁 波 分 离 株 属 ,,,, ,:,: ，,,, 于 ，，基 因 亚 型 与基因库检索 到 的 基因亚型代表株核苷 酸和氨基酸同源性较高 分 别 为 和 :,,:,, ,,,,, ,,,,, ,:,,,, : 。，，、、蛋白二级结构以无规则卷曲和 片 层 为 主 有 多处抗原指数较高的区段 结 合 亲 水 性 柔 韧 性 表面可能性等,::, ,,,,β 指 ，、、、。 标 综 合 预 测 蛋 白 的 细胞抗原表位在第 位氨基酸残基的可能性较大 结 论,,,, ,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,: :::: 蛋白多个区段具有抗原潜力通过生物信息学方法预测 蛋白二级结构及 细 胞 表 位 为 疫苗研制提供理 ，,,, ,,,,,,, ，,,, 。 论 基 础 ,,,,,,,,:,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,关 键 词 ,肠 道 病 毒 型 ,,蛋白质二级结构 ,细 胞 表 位,, ,,,, ,, 中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 ,,:,,, , ,,,:,:,,,,,,:,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,, ，，,,，,，,,,, ,～:,～,,，，，:,,,,,,,, ,，，,,,,,,,,,,,::,::,,,:,,,,,,,,,:,,,:,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,～;～,:,;:,,～,,,,～,,,,,:,;,,:,,～;,;::,,,,,,,～:,～,;,,,,:;,,;,,:;,:,;,,;,:,,,～,,;,,:,,,!,!,,!, ，,,, ,;,;:,:,,～,;,:,;,:,,,:,:,,,;,～;:,;,,,;,:;,:,,～;,,～,:,,,::,,;,;,,,,,:,,:,，,,,,，,,,,,,,,,,,!,,!!,, ，,;,;,,:,,,;,,,:,～,,,,::,,,, ,:～,～,,,;,,;,, ，,,,:,,,:,:,，:,:,:,,,～,:;,;,,:,,,,,,,,,,;,:, ,,, ,,,～,,!,!,! :,～;,,，,,,～,,;～,,,,～;,,,,;,,,,，,;,;::,,～:,;,,,～;,;::,,,,,,,～:,～,;:,，,,,,,,;,:, ,,, ,,,,,,,,;,～,,,,!!, ，、,～;,:,,,,,,:,,,,,,,～;,:;,,;,,:;:,，,,, ,,,,;,,:,;,,::,,,,,,,～;～,,:～,,,:,,,,;,,,,,,,,,～,,,:;,,,!,!,!! ,:,,,,,,,,,～;，,,,:,,,,,,,～,,;,,～;～,～;,,～:,:,::,,～:,;:,,,;,,,,,,,:,:,, ,,,～,～;,;:,, ,;,;,,,,,,!,,,!!,, ，,,,,, ,,,,,,,,,::,～,:;,;,,:,,,,,,,,;,;,,;,,～,,，,,,:,,,,,,,:,～,,;,, ,,,～,,,～;:,,;,:,～,,:,,,,,:～:,:,,,!,!, ,～,;,:,;,,～;,;::,,,,,,,～:,～,;:,，,,, ,,,,～:,;,,,,,:,::,,,,,,,～;;,,,,,,,,,～,,～,,;,:,,,,,;,,,,;,,!,!,! , β ，，，～,～;,,;:,,:,,,～;,:;,,;,,:;,,,,,:,,,,,::,,;,,,,～;,;,:,,:,,,,,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,::,,,,,;,;,,,,,!, ，,～;,;::,,,,,,,～:,～,;,,,,:;,,;,,:;,:,，,,,,,,::～,,,;,;,,:,;,,,,:,,,:,,,,,:,,;,～:,,,～,:～,:,,,,,,～;:,!,,,!,,! ;,,,;,:;,:,,～;,,～,:,,,::,,;,;,,,,,:,,:,，,,,,!,, ,,,,,,, ,:,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,;,,,;::,,,,,,,～:,～,;,:;,,;,,:;,!,, ,，,肠 道 病 毒 型 是 小福尼亚州患有 中 枢神 经 系 统 疾病的婴儿粪便标 本 中 ,, ,,,,,:,,,,,,,,,,, 。 ，分 离 到 分 子 流 行 病 学 研 究 显 示 的 ,,,，,,, ,,, 病 毒 科 肠 道 病 毒 ,，, ,,::,,,,,,,,,;,,,,,:,,,, 蛋 ，白不但具有与 血 清 型 相 对 应 的 遗 传 多 样 性 并 ，,，组 成 员 年 由 等 从 美 国 加 ,,,,, ,,,,,:～,,,,且 是 利，。特异性中和表 位 所在 区 域 直接影响病毒的抗原性 ,,,宁 波浙江省卫生厅医药卫生科学研究基 金 资 助 项 目 ,::,,,,:, ，， 目 前 我 国 流 行 的 以 亚 型 为 主 采 用 生 ，,,, :, ,,市科技局重大科技专项资助项目 ,::,:,:::, 物 ,，,通 讯 作 者 许 国 章 ，,,,,,～,,,,,:,:,:,,,:, 信 息 学 方 法 对 分 离 株 进 行 种 系 分 析 以 及 ,，,作 者 单 位 宁波大学医学院 宁 波 ，,,,,,,,,,,,,, ，宁波市疾病预防控制中心 宁 波 ,,,,,:,: , ，。 材 料 与 方 法 基 酸 没 有 核 苷 酸 的 插 入 和 缺 失 本 研 究 的 ,,, 株年 宁 波 市 疾 病预防控制中心 样 本 来 源 ,:,: ,,, ，序 列 虽 有 一 定 差 异 但 核 苷 酸 和 氨 基 ，，,,,,,,病 毒 研 究 所 共 收 集 全 市份 患 者 标 本 患,,,，,,, 酸，者 的 年 龄 范 围 在 岁 男 女 比 例 是 :,, ,,:: ，同 源 性 很 高 分 别 在 和 ,,,,, ,::, ,:。,?, ,,,, 、、、、、:其 中 粪 便 咽 拭 子 肛 拭 子 脑 脊 液 标 本 各 ,,,, ，,之 间 其 中 株 的 同 源 性 为 与 基 因 ,::,, ,::,、。 ,,份 临 床 标 本 接 种 非 洲 绿 猴 肾 细 胞 ,,,,，,: 库，，进 行 病 毒 分 离 置 于 培 养 每 天观察细胞培养 ,,? ,,检索到各基因型和基因亚型 ,;,,,,，,,,,,,,;,,，管 的 细 胞 病 变 效 应 并 记 录 每 份 标 本 至 少 传 :,， ，代 表 株 序 列 进 行 同 源 性 分 析 发 现 ，,,,,,,,, ，代 如 果 出 现 特 异 性 则 保 存 于 ,，, :,， ,,:? 株条 的 蛋 白 与 基 因 亚 型 的 核 苷 酸 和 ，,,,,,,:,, 。件 下 待 用 本 研 究 的 株 均 来 自 此 次 分 离,, ，,,, 氨，的 流 行 株 其 它 和 柯 萨 奇 病 毒 组 ，,,,，,,,, ,, 基 酸 同 源 性 最 高 在 和 ,,,,, ,,,,, ,,，,病 毒 分 离 物 编 码 区 :基 因 扩 增 和型代 表 株 来 自 的,:,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,:, ，:,，,,,, ,,,, 。:取 分 离 培 养 液 鉴 定 采 用 ,;,,,,，,,,,,,,;,::， ,，,,，， ,;,,, μ ,之 间 与 核 苷 酸 和 氨 基 酸 同 源 性 最 低,::,::,,,,， 试 剂 盒 提 取 并 进 行 全 长 编 码,,,,，,,,，,,,, ! 。 在 和 之 间 宁 ,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,, 。 ,::年 国 内 其 他 地 方 的 分 离 流 行 株 亲 缘 关 系 较 区 的 核 苷酸 序列测定和分析 特 异 性 引 物 序 列 ,:,: ，,近 ’波,,,,, ,:,,:::,,,,,,,:,,:,:,,, ， 进 化 途 径 相 似 说 明 年 宁 波 株 对 近 几 年,:,:，,,, , ,’’, ,,,,, ,::,:,:,,,,,,,,,分 离 株 与 年 中 国 大 陆 流 行 株 的 核 苷 ,::,,,:,: 。中 国 大 陆 流行株具有一定代表性 ，,,, ， ’,反 应 参 数 反 转 ,:::,:, ,,,:, ,,? ,,酸 ,录 预 变 ,、性 以 ,:,,,,,? ,,,,,,? ,,,,,? ,:。 序 列 具 有 高 度 同 源 性 根 据 的 编 码 ，,,, ,,, 、,。 扩 增 个 循 环 后 延 伸 ,,,? ,,,, ,, ,,?,:,,,区 。使 用 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 鉴 定 产 物 ,,,,, ,:, ，核 苷 酸 序 列 运 用 软 件 将 宁 波 ,;,,,:,, ，,,, , 分,,序 列 测 定 扩 增 产 物 委 托 英 潍 捷 基 上 海 贸 ,,, 离 株 与 检 索 到 代 表 株 ,;,,,,， ,,,,,,,; ，,,, 易 有 限 公 司 进 行 基 因 测 。序 构 区 同 源 性 和 亲 缘 进 化 分 析 ,,, ，,,,,,, ,,, ,,，建 亲 缘 进 化 树 见 图 宁 波 分 离 株 属 于 基 因 ,:, 序 列 分 析 整理和同源性 分 析 使 用 ,，,,,,,,,,,: 亚 ,,，, 软 件 多序列比对和 邻 接 法 ,;,～,:,:,,,,，，,,,,，，型 的 进 化 分 支 并存在多个传播链 与 ,,:,,,::,,, 。构 建 系 统 发 生 树 使 用 软 件 ,;,,,:,,, 蛋 白 二 级 结 构 预 测对 份 分 离 株 的,,, ,,,,, 序 列 分 别 应 用 服 务 器 上 的 ,,,，,,,,, ,:,,,,,, 和 两 种 方 法 分 析 预 测 蛋 白 ,:,,, ，,,, ,,, 的 ,,,。二 级 结 构 和 细 胞 抗 原 表 位 的 预 测应 用 软 件 的, ,，,,,,, 、、蛋 白 亲 水 性 柔 韧 性 表 面 可 能 ，,,, ，,,程, 序, ,,采 用 和 ,,:,;,, ，:,::,,，,;,::,,,,,;,,,!, ，方 法 预 测 氨 基 酸 的 亲 水 性 采 用 和性，,,,～,,:～～,,, ,, 分离株和其他各个基因型 代 表 株 全 长 图 ,,:, ,,:, ,,,,，方 法 预 测 柔 韧 性及 表 面 可 能 性 采 用 区 亲 缘 进 化 树，,,,,，,,;,,,, ,注 代表本研究中的 宁 波 株，,,,，? 方 法 预 测 潜 在 的 细 胞 抗 原 表 位 综 合 评,:,,:,,, , ,,,, ,,,,,:,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,。价 蛋 白 的 细 胞 抗 原 表 位 ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,:,, 结 果 ,:,,;～,,,:,,～;,,～,:,,,,,,,,，,,,,,，,,,:?!, 宁 波 流 行 株 蛋 白 同 源 性 和 遗 传 ,,, ，,,,,,, 进二 级 结 构 运 用 服 务，,,, ，,,, ,,, 将株 病 毒 分 离 物 进 行 全 长 化 分 析 ，,,,,, ,,,，,,,,,, ，，蛋 白 的 二 级 结 构 两 种 方 法 的 预 测 结 果 无 显 著析蛋白的柔韧性 该 蛋 白 骨 架 的 柔 韧 性 区 域 较 多 且 ,,, ，，、、、差 异 均 提 示 的 二 级 结 构 以 无 规 则 卷 曲呈 均 匀 分 布 主 要 分 布 在 ，,,,,,, ,,,,,,,,,,,:,::: 、、、，。位 氨和 片 层 为 主 并 有 多 个 螺 旋 的 形 成 份 ,,,,,,,:,,,:,,,,,,,,:,,, ,, ::::,α, β 。基 酸 标 本 运 用 方 法 分 析 蛋表 面 可 能 性 分 析 、，,,,,蛋 白 的 无 规 则 卷 曲 重 合 区 域 主 要 位 于 ,,,,, ,,,,,,,: ，、、、、、白的表面可能性 结 果 显 示 该 蛋 白 氨 基 酸 的 表 面 可 ,,,:,,,:,,,,,,,:,,,,,,,,,,:::::: ，、、、、、、、能 性 较 大 主 要 分 布 在 ,,,:,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,::: :::: 、、，、、、,位 氨 基 酸 易 被 溶 剂 分 子位 氨 基 酸 ,,,,,,,,,,,,,,, ::,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,, ::::β ，。接 触 成 为 抗 原 表 位 , 通 过 法 预 测 ，,,;,:,,:,,, ,,,,;,,:,,,;,,,,、、、片 层 重 合 区 域 主 要 位 于 ,,,:,,,,,:,,,,::: ,细胞抗原决定簇 结 果 显 示 该 蛋 白 存 在 多 个 抗 原 可 、、、、,,,,,,,:,,:,,,,,,,,,,,,,,,,::::: ，，、能性较大的区域 并 均 匀 分 布 其 中 第 ,,,,,,::、,位 氨 基 酸 螺旋 重 合区域主要位于 ,,,,,,,,,:α, 、、、、、,,,:,:,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,::::: 、、、、位 氨,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,, ::::: 、、，的抗原指数较高 提 示 该,,,,,,,,:,,,,,, :: 。基 酸 。 区 段 含 有 潜 在 的 抗 原 决 定 簇 结 合 蛋 白 的 ,,, 、、蛋 白 亲 水 性 柔 韧 性 表 面 可 能 性 ,,, ，,,,,,, 亲 和 细 胞 抗 原 表 位 的 预 测 对 本 研 究 的 份 氨 基 , ,, ,,,，，，水 性 柔 韧 性 表 面 可 能 性的 重 合 区 域 并 分 析 ，，， 酸 序 列 分 别 进 行 亲 水 性 柔 韧 性 表面可能性分析 和亲 水 性 分 析 运 用 ，,;,::,,,,,; ,,,,,,! 。并 根 据 各 项 指 标 综 合 预 测 细 胞 抗 原 表 位 ，, 的 蛋 白 质 二 级 结 构 预 测 蛋 白 以 第 ,,,,,, ,，方 法 分 析 蛋 白 的 亲 水 性 结 ，,,,～,,:～～,,,,, ,, 果,: 、、、位 氨 基 酸 成 为 抗，、显 示 该蛋白存在较多亲水性区域 ,:,,,,,,,,,,,:,,,,,: :::,,,,,,, :: 。,，、、原表位的可能 性 较大 由 于 版 面 所 限 图 为 其 中位 的氨基 酸亲水性指数普 ,,,,,,,,,,,,,,,,:: 、、，株 的 亲 水 性 柔 韧 性 表 面 可 能 性 软 件 截 图遍 最 高 提 示 该 区 域暴露于表面并 成为抗原表位的 ,，,,, 。 ,。 ，可 能 性 较 大 示 例图 可 见 不 同 株 基 因 亚 型 , :, ，,,, ,, , 。的 细胞 抗原表位软件分析结果 基 本 一 致 , 、、图 蛋 白 的 亲 水 性 柔 韧 性 表面可能性分析 , ,,, 、 ,,,, ,,,,,,,:,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ，。 讨 论 型 的 同 源 性 较 高 亲 缘 关 系 近 构 建 亲 缘 ,，,,, ，分 子 流 行 病 学 显 示 的 蛋 白 进，,,,，,,, ,,, ，是 最 重 要 的 衣 壳 蛋 白 不但具 有与血清型相对应的 化树也显示宁 波 分离 株 属 于 基 因 亚 型 的 :, :,, ,,，，遗 传 多 样 性 并 且 是 特 异 性 中 和 表 位 所 在 区 域 直 接 ,,,进，有 共 同 进 化 趋 其 他 地 方 的 分 离 株 距 离 较 近 ，影 响 病 毒 的 抗 原 性 研 究 蛋 白 的 细 。势 ，,,,,,, , ，，化 分 支 并 存 在 多 个 传 播 链 与 年 国 ,::,,,:,: ，宁 波 株 与 亚 型 氨 基 酸 的 高 度 同 源 性 说 明 使 :,,,,,。胞 抗 原 表 位 对 疫 苗 研 究 具 有 重 要 意 义蛋 ,,, 内用 白 ，通 常 用 于 病 毒 的 基因型别鉴定 和 遗传进化分析 宁 波 流 行 株 来 预 测 中 国大陆流行株的 细 胞 抗 , ,、、目 前 发 现 至 少 包 括个 基 因 型 ，,,,,,,,,,,:原 :,。表位具有可行性 ,，。 中 国 大 陆 流 行 株 以 亚 型 为 主 :,，,,, :, :应用生物信 息学 方 法 预 测蛋白质的抗原优 势 表 ，、得抗原优势表 位 肽段 的 一 种 重要方法 即 省 时 省 力 本 ，，位 并 通 过 体 外 合 成 其 肽 段 进 行 试 验 验 证 是 目 前 。，，型 中 国 大 陆 代 表 株 的 细 胞 抗 原 表 位 的 存 在 对 幼 鼠 的 保 护 效 果 明 显 起到与灭活全 病 毒 , ，,,, ,, ,。疫 苗 相 同 的 抗 病 毒 保 护 作 用 包 含 的 ,,:, ,,: ，蛋 白 的 二 级 结 构 以 无 规 则 卷 曲 和 片 层 为 主 、、、，,为 氨 基 酸 片 段 与,,,,,,,:,,,,,,,,,, :::β 螺。α,本次预测结果 有 核心 重 合 区 域 同时说明生物 信 息 ，旋 较 少 而 影 响 蛋 白质抗原表位形 成的主要因素为 。 学方法对抗原 位 点的 预 测 具 有一定可行性 本 次 研 ，。 具 有 较 多 的 无 规 则 卷 曲 与 理 论 相 符 结 合 ，，,,究 为 的 抗 原 性 分 析 提 供 理 论 材 料 有 助 ，,,,，,,, 。新型疫苗的研 究 和生 物 学 试 剂的研发 , , 参 考 文 献 、、蛋 白 的 亲 水 性 柔 韧 性 表 面 可 能 性 分 析 的 ,,, ,,，，，,,,,,～,,，,～,,;，，;,,;,,,,,，,,,,:,;:～,,,，,:,～,,!, 重 ,,,,:,,,,;,;,,:,,,,,,,,,，,,,:,,,,,;,;,,,:,,,:，,,:, ,,!!，，,:,，,:,,::,,, ,,,,,,,,,，、、、, 合 区 域 第 ,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,,::::: ,,，，,,,,,,;,，,,,,,,，,,:,,:,,,,:, ,;,～:,,:,,;,,:,,,,:,,,,, 。位氨 基酸 残基成为 抗原表位的可能性较大 除 了 这 ,,;,,,;::,,,,,,,～:,～,;,,:,,,,,:,:,,,;～;,:;，,,;,～:,, ，!,，，,,,,,,:,,,,,,,,,,,:,,,,!, ，，四 个 区 段 还 存 在 其 他 抗 原 指 数 较 高 的 区 段 在 蛋 ,,，,,,,;,,;, :,,:,, ,,,;::,,,,,,,～:,～,;,,,,,,;,,!,白 成熟 的过 程中许多 抗原指数高的区段会发生构象,,，,,，, ,;,～:,,,,::～;, ,,,,,::,,,,,,,,,,, ,,，,，,,,～,,,,:～～,,,,，,,,;,,:,,:,:,:～,,,,,;,,,,,,,,,,:,!,, ，，变 化 被 外 层 的 氨 基 酸 残 基 或 糖 基 所 遮 蔽 所 以 预 ,,，，,,,,;,,,，,，,,～,,,,,;,:～,,,;,,,,,,,,,,,,,,,, 测 结 ,,，，，冯 起 甲 徐 智 吴 国 明 等 脂 多 糖 结 合 蛋 白 的 细 胞 抗 原 表 位 预,,, 。 ，果 仍 需 要 进 一 步 实 验 证 明 图 可 见 不 同 株 , :,,,，，,,,测 及 其 效 应 初 步 分 析 第三军医大学学报 ，,,::,,:, 基 因 亚 型 的 细胞抗 原表位软件, ，,,, ,,, , ,,,,,,,, 分析 ，结 果 基 本 一 致 可 以推测同一基因 亚型内抗原,,，,,檀 晓 娟 许 文 波 肠 道 病 毒 型的分子流行病学现况 中 国,,,, ，, 。表位 非 常 相 近 ，，,疫 苗 和 免 疫 ,::,,,,,,,,,,, ，感 染 可 引 起 多 种 临 床 症 状 其 感 染 引 发 ,,，，，，,,,赵 生 仓 姜 双 应 刘 桂 香 等 青海省分离到肠道病毒 型 及 其,,,, ,,，区基因特征分析 中华实验和临床病毒学杂志 ，,,, ，,,:,:的 神 经 症 状 常 引 起 儿 童 死 亡 长 期 以 来 人 们 研 究 ,,,,,,,,,,,,,，。 的 毒 力 位 点 但 并 未 得 到 确 定 答 案 ，,,,,:,,,, ,,，，，,,,,,,;, ，,,:,,;,,,,，,,;,:,,,～,,,:～,,,;,，,,,～;, , 等 对 年 澳大利亚流行的 基 因 亚 型 ,,,, :, ，,,, ,,，，，,;:,;,,,;～,,,::,:～,,,,,,::,，,，:,,, ,,:,:,,:,,::,,,,, ，区 进 行 分 析 发 现 表 现 为 的 分 离 株 ,,,，,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,, 与 ,,，，，,,～:～,,:～;,,:，,～ ,，;,,,,，,,;,,,:,:,,;::,,,,,,,, 具有 神经 毒性的分 离株主要区别在于第 位 氨 基,,: ,,,,:,;,,:,;,,;,:,,,～,,,,,,,;,;,:,;,,:,,;,:,:,:,,,,,,,, ，，，,,酸 的 不 同 前 者 为 丙 氨 酸 后 者 为 缬 氨 酸 可 能 是 ,,,:,,;,;:,,:,:,，,,,,,,;:,,:,，,:～,,;,;:～,,,,;,;,,!,,, ，，,,,此 ,;,,,,,,,:,,,,:,,,,,:,:,::,,,,,,,,,,,,! , ,,，，，，，氨 基 酸 的 变 化 改 变 的 蛋 白 的 空 间 结 构 从 而 ,::,，:,;,,,:,,,:,, ,，;,,,,,:,,,,,;～,;,,,:,,,,,;,,!,,,, ,～:,;,,,～,,,::,,;,:,;:,,, ,～,,,; ,:,;,:,，,,;,:,,,～,,,,，。 使 毒 力 发 生 根 本 性 改 变 但这点并 未得到实验证实 ,,，，,;,:;～,,:,;,,,,, ,,,,,, ,,,;,,; ，,， ,,,:,,::,,,,!, ，本 研 究 的 为 基 因 亚 型 其 位 氨 基 酸 ，,,, :,,,,: ,,,,,,,, ，为 丙 氨 酸 生 物 学 软件综合分析发 现其抗原潜力并 ,,朵 建 英 小鼠模型的建立及其在疫苗评价总的中应用 ,,,，,,, ，，不 大 将 位 的 丙 氨 酸 人 为 更 改 为 缬 氨 酸 后 抗 原 ,,:,,,，,北 京 中国协和医学院 ,,,:,:,,,,,, ，潜 力 无 明 显 改 变 第 位氨 基酸的是否为毒力位 ,,: 收 稿 日 期 ,,修 回 日 期 ,,:,,:,,,,:,,:,:,,,,, ，点 仍 需 动 物 实 验 来 验 证 并 且 不 同 型 别 的 毒 ，,,, 。力 位 点 可 能 存 在 差 异 根 据 ,:: ,,, ，,,, ,, , 蛋 白 的 氨 基 酸 序 列 合 成 了 段有 部分重叠的肽,, ，段 ，与 载 体 连 接 后 免 疫 小 鼠 取血清进 行中和抗体试 ，验 ,,,,其 中 和 片 段 能 够 ,,,,,,,,,,,,,:,:,,,,:: ，，诱 发 中 和 抗 体 其 中 具 有 高 度 保 守 性 成 为 ,,,: 。多 肽 疫 苗 的 候 选 肽 段 和 分 别 与 ，,,,,,,, ,,,: 本 次 预 测 的 和 区 段 有 一 致 区 ,,,,,, ,,,,,, ::,,,,。 ，域 朵 建 英 等研 究 亚 单 位 疫 苗 其 中 ，,,,,,:,