雏鸡透明骨骼标本的制作

雏鸡透明骨骼标本的制作 雏鸡透明骨骼标本的制作,生物学实验技术与科技活动, 郭庆海 约3119字 摘要 在制备雏鸡透明骨骼标本的过程中，首先进行材料的处理，然后用乙醇固定，氢氧化钾透明，茜素乙醇饱和液染色，氢氧化钾和甘油混合液褪色，甘油保存。最后制得的标本生动形象，易于对骨骼进行原位观察，立体感比较强，能从整体上显现出骨骼系统在体内的自然分布和位置，也能显现动物体内骨骼系统的发育状况，是较为理想的骨骼标本制作方法。 关键词 雏鸡标本 透明骨骼 标本固定 标本制作 中图分类号Q-34 文献标识码B 透明骨骼标本对于研究动物的骨骼及其发育具有重要的参考价值，其可以显示一般解剖方法难以观察清楚的结构，并在保持标本外形完整的情况下显示出体内骨骼部分，从而显示出生物体的骨骼发育情况，因而无论在教学方面还是科学研究方面都有其实际意义。 透明骨骼标本的制作原理是应用化学药品和物理方法作用于肌体组织，使组织的折光率和透明剂的折光率相近，以达到透明的目的。小型动物因骨骼纤细软弱，且小型动物的骨骼各个关节部位没有完全骨化，制作单独骨骼标本很困难，而制作透明骨骼标本解决了这些难点，且制作出来的透明标本清晰美观、有立体感，因此，一般小型的脊椎动物都适合做透明骨骼标本。 透明骨骼染色法简单，易于识别软硬骨，成本低，国外广泛使用，但在国内则应用较少，且由于传统的透明骨骼标本制作技术的透明过程复杂，时间长，有时甚至几个月，国内研究较少。近年来，人们逐渐认识到透明骨骼标本在教学和科研中的重要作用，开始进行透明骨骼标本的制作，李锦和杨振坦等曾对动物透明骨骼标本做过一些研究，但仍存在一些不足。此外还有一些专家学者对鸟类以及动物的胚胎进行了研究，且传统的透明骨骼标本的制作多采用20日龄左右的鸟类，但刚出壳的雏鸡从来没有人做过透明骨骼标本。 为此，本次实验选用1日龄的乌骨鸡雏鸡和3日龄的罗曼蛋鸡雏鸡作为实验材料，于2009年3-5月采用茜素乙醇饱和溶液进行硬骨染色，使雏鸡的全部骨骼在不受任何损伤的情况下清楚的展示出来，制作好的透明标本其肌肉和软组织结构无色透明，而骨化中心和硬骨组织被染成紫红色，界限清晰，易于识别，能提供传统解剖方法不宜得到的信息。现将具体方法及结果介绍如下。 1 材料与方法 1，1供试材料 制作透明骨骼标本的材料新鲜，最好是活体或刚刚死去的动物尸体，不新鲜的组织透明效果不好，我们所选用的实验材料为1日龄的乌骨鸡雏鸡和3日龄的罗曼蛋鸡雏鸡，这些雏鸡均购置于徐州市果园种鸡场，健康且发育良好。 1，2方法 1，2，1材料的处理 使雏鸡窒息而亡，去皮和内脏，去皮时应先从腹下部提起皮肤，开一“+”型小口，分别向前向后撕去皮，腿部及爪部应小心操作，去内脏时从肛前开一小口从中掏出内脏，且一定要去干净，并注意保持形体完整。 1，2，2固定 将经上述处理后的雏鸡，绑在玻璃片上，整理好姿势后浸在95,乙醇中固定5-7 d，使标本有良好的形态，利于观察研究。具体时间要根据动物的体形大小而定，且要求在固定期间更换1,2次固定液，直至雏鸡硬化固定充分为宜。 1，2，3透明 将固定好的雏鸡标本移入1,氢氧化钾溶液中浸泡2-3 d，待肌肉半透明能隐约看到里面 的骨骼时就要停止透明，如果浸制标本没有出现半透明，还要更换一次透明液，直至达到满意效果为止。此步骤的目的是使标本组织膨胀软化，利于骨组织的染色。 1，2，4染色 将透明好的能隐约看到里面白色骨骼的标本放人茜素红乙醇染色液中进行染色1,2 d，至肌肉成冻状，并可看见骨组织染上红色为止。茜素乙醇染色液的配制是:先将茜素红染料溶于95,乙醇制成饱和溶液，然后用1份配好的茜素乙醇饱和液加9份70,乙醇。 1，2，5肌肉的褪色 将1,的氢氧化钾溶液与5,的甘油溶液以1:1的比例配成混合液，将标本浸泡在混合液中，时间为2-4 d，直至肌肉颜色褪为淡红色为止。 1，2，6再透明 为了提高透明质量，把标本放人氢氧化氨甘油中(75mL水中加入20mL甘油和5mL氢氧化氨)进行漂白透明。然后，再将标本放入25,甘油中浸16 d左右，使标本更加透明，再放入50,甘油中浸2-4 d，脱水，直到标本肌肉完全透明为止。 1，2，7标本的保存 将再透明好的标本调整好姿态，使其趋于美观，放人大小适宜的标本瓶中，用100,甘油浸泡保存，并加入少许麝香草酚以防腐败和发霉，瓶口用防水不干胶密封。 2 结果与分析 此次实验选用了雏鸡乌骨鸡与罗曼蛋鸡雏鸡两种材料，获得了一套制作雏鸡透明骨骼标本的初步制作方法。制好的罗曼蛋鸡透明骨骼标本其肌肉和软组织结构无色透明，而骨化中心和硬骨组织被染成红色，界限清晰，易于识别，能提供传统解剖方法不宜得到的信息，显示出雏鸡体内骨骼系统的自然分布和位置，立体感比较强。 但实验中对乌骨鸡虽采用同样的制作方法但效果并不好，可能是由于雏鸡乌骨鸡的肌肉等组织为黑色，不容易观察标本制作过程中的透明效果、褪色效果所致。 整个实验过程均是在室内常温下进行的，且放置于向阳处，保证温度在20-30?之间，因温度高低可影响制作周期，温度高可缩短制作周期，温度低则相反，3、4、5三个月温度刚好适宜。但制好的标本不能让阳光直射，因为透明物质在阳光下会分解，出现浑浊，影响观察标本的效果。 制作好的雏鸡透明骨骼标本其肌肉组织无色透明，因为最初实验时就避免了影响标本“无色透明”的因素，例如，雏鸡选用活的即是新鲜的，去净了皮和内脏，因为腐败和淤血的材料会影响标本的透明度;药品力求纯净清洁，因为杂质可能使标本染上杂色;水选用蒸馏水，因为自来水中有杂质不宜用于制作透明标本。 3 讨论 此次实验是在不断改进中进行的，即实验中因个别环节的失误导致实验效果不佳甚至失败重做。如实验中一开始由于染色液配制的浓度较高，最后经染色的标本在褪色过程中，其肌肉的颜色很难褪去，只好重新开始再做。一般来说，选用低浓度长时间的染色方法的染色效果比高浓度短时间较理想，染色时要经常察看，掌握染色时间和染色程度，否则同样容易产生染色过度，造成脱色困难。 实验中还发现，若标本含有的脂肪组织较多，在固定后应进行脱脂操作，可选用丙酮或二甲苯脱脂3—7 d，这样制作的标本效果较好，若标本含有的脂肪组织较少，可不需要进行脱脂操作，因为固定液乙醇和透明液KOH都具有一定的脱脂能力。 通常制作透明骨骼标本的鸟类大多选用20日龄，实验时特意选用了1日龄和3日龄的雏鸡进行实验，发现1日龄和3日龄的雏鸡同样可以做标本。只是由于1日龄和3日龄的雏鸡肌肉很薄嫩，实验时应该随时注意观察，时间上要灵活掌握，尤其是透明这一步骤，适当降低透明液KOH的浓度会更好，常用的浓度为2,，此时可用1,，不能为了加快速度而提高碱 液浓度。另外实验时一定要随时观察，发现肌肉稍透明，隐约可见骨骼就必须立即取出材料，更换溶液，否则时间过长就会使骨架解离，肌肉腐蚀。因为氢氧化钾是强碱，具有腐蚀性，可使组织膨胀软化，坚实性大为减低。 制作乌骨鸡透明骨骼标本的过程中，发现适当的延长固定以及透明时间很有必要。实验中，透明之后乌骨鸡就能通过肌肉看到里面的骨骼，后来又进行了染色操作，这倒使得骨骼看不大清楚，因而由于乌骨鸡骨骼为黑色可不进行染色操作，只要能够很好的透明，当然若能够去掉肌肉的颜色，效果会更好。至于如何把肌肉等组织带有特殊颜色的小型脊椎动物做成理想的透明骨骼标本，还有待进一步的探索研究。