卡氏肺孢子虫GMS染色

卡氏肺孢子虫GMS染色 卡氏肺孢子虫GMS染色 AIDS的重要机会性感染之一就是卡氏肺孢子虫感染。卡氏肺孢子虫不能通过常规培养 方法,因此目前实验室主要开展的是组织学染色法。 国外多次证明GMS方法是实验室用 于检测卡氏肺孢子虫最好的组织学染色方法),GMS主要对卡氏肺孢子虫的胞囊壁进行染色。 原理: 通过铬酸氧化真菌细胞壁成分而产生乙醛基团来还原银离子. 标本种类: 肺泡灌洗液,肺泡冲洗液,痰液(包括诱导或非诱导),经支气管镜活检物,胸腔纵隔淋巴 结活检物, 经肺穿刺活检物.(痰液标本的阳性率最低) 质控: 使用真菌的阳性质控 试剂: 2% Chromic Acid: Chromic trioxide 10.0gm Distilled water 500.0ml 混合,溶液有效期6 个月 1% Sodium Metabisufite: Sodium metabisulfite 5.0gm Distilled water 500.0ml 混合,溶液有效期6 个月 5% hypo: Sodium hypo 5.0gm Distilled wanter 100.0ml 混合,溶液有效期3 个月 Methenamine Silver Stock Solution( 储存溶液): 3% Methenime 100.0ml (hexamethylenetetramine) 5% Silver nitrate 5.0ml 混合,保存在耐酸的棕色瓶内,4? 冰箱冷藏溶液有效期3 个月 Work Solution( 工作溶液): Stock Silver Methen: 25.0ml 5% Borax 2.5ml Distilled Water: 25.0ml 使用前混合,使用后丢弃 0.5% Glod Chloride: Glod chloride 0.5gm Distilled water 100.0ml 混匀,保存在耐酸的瓶中,冷藏. 有效期1 年 0.2% Light Green: Light green SF yellow 0.2gm Distill water 1,000.0ml Glacial acetic acid 0.2ml 混匀,有效期6 个月. 安全: 操作时应穿戴手套, 护目镜,和实验室靴子. 注意避免接触和吸入以上试剂 操作步骤: 1.在chromic acid 中氧化1 小时(如果需要事先常规脱蜡至蒸馏水). 2.用自来水清洗 3. 1% Sodium metabisulfite 1分钟室温 4.用蒸馏水清洗3 次 5.预先加热工作溶液56?水浴，然后摇动玻片直到玻片内容物颜色变暗黄*色或灰色 6.蒸馏水冲洗2 次 7. 0.5% Gold chloride 1分钟直到玻片内容物变褐色 8.用蒸馏水冲洗 9. 5% 硫代硫酸钠 3分钟 10.蒸馏水冲洗 11. 0.2% Light Green 1分钟 12.蒸馏水冲洗 13.在无水酒精中脱水干燥 结果 卡氏肺孢子虫-黑色, 涂片背景-绿色。 注意 1.如果chromic acid 变成褐色需要重新配置，2%的chromic acid 好于5% chromic acid，玻片山的内容物不容易脱落 2.如果菌体没有变成黑色检查以下试剂是否过期 A chromic acid B sodium metabisulfite C hypo 3.如果工作银溶液在玻片上变成云雾状或成镜状请使用新的溶液