液相色谱法检测维生素AD浓缩剂中维生素D

液相色谱法检测维生素AD浓缩剂中维生素D 液相色谱法检测维生素AD浓缩剂中维生素D 液相色谱法 〔适合于每克维生素AD浓缩油剂，粉剂和水悬浮液中，维生素D的含量大于等于5 000IU/g。〕 A 原理 将维生素AD油溶液溶解在流动相中。用溶于水的酶处理干的浓缩剂和水悬浮剂，并抽提。通过液相色谱将维生素D和维生素D前身从维生素A酯和杂质中分离出来。使用转换因子将维生素D前身按维生素D计算。维生素D是维生素D和维生素D前身的总和。 B 仪器 B.a 液相色谱 具有254nm波长，紫外检测器。典型的操作条件:纸速:1cm/min;流动相流量:2.6ml/min〔约100atm〕;检测器灵敏度:0.008AUFS;温度:室温;阀进样容积:20μl。如果系统适应性试验符合，则可以替代不同柱长的和不同牌号的填充料，且进样容积可以在10,250μl范围内改变。 B.b 色谱柱 不锈钢材质，250×4.6〔内径〕mm，充填柱粒度5μm，通过系统适应性试验。流动相为含有0.3%(v/v)正戊醇的正已烷。维生素D前身和维生素D的保留时间分别为9min和18min。 C 试剂 C.a 正已烷 色谱级。通过其内装填500g，50,250μm硅胶的60×8cm柱子干燥。该硅胶预先在150?干燥4h。 C.b 正戊醇 试剂级。 C.c 流动相 正已烷和正戊醇(997+3)。如果必要，则可调整组分的比例，使之符合适应性试验。 C.d 甲苯 试剂级。 C.e 维生素D溶液 准确称量约12.5gUSP胆钙化醇参比标准置于100ml棕色容量瓶中。加入10ml甲苯，不用加热使之溶解，且用流动相稀释定容。从中移取10ml置于100ml容量瓶中，用流动相稀释定容〔浓度,500IU维生素D/ml〕。 C.f 适应性标准溶液 制备每克植物油含2mg维生素D3和0.2mg反式维生素D3的溶液。将0.25g此溶液溶解在10ml甲苯-流动相(1+1)中。反式维生素D3与维生素D3前身应有约相同的峰高。若必要，则可在90?温热油溶液约45min，使维生素D3含量增加。在5?贮存油溶液。 C.g 酶 链霉蛋白酶E，70000PUK/g。 D 系统适应性试验 化工原料,化学试剂,化玻仪器,食品添加剂，医疗辅料 将每份为20μm的适应性标准溶液用色谱检验6次。通过计算标准偏差和相对标准偏差来确定峰高的恒定性。相对标准偏差,标准偏差×100/平均峰高。相对标准偏差应小于等于1%。$$确定维生素D3前身和反式维生素D3的峰分辨率(R):$$R,2D/(B+C)$$式中C,维生素D3前身和反式维生素D3的最大峰间的距离;B,维生素D3前身的峰宽;C,反式-维生素D3的峰宽;对于维生素D3前身/反式-维生素D3，峰分辨率应大于等于1.0。 E 转换因子的测定 吸取4ml维生素D标准溶液于25ml容量瓶中，加入1ml甲苯，并用流动相稀释定容。贮存于冰浴中。通过进样阀向柱子注入20μm样液，并调整操作条件使之得到最大峰高。重复进样，取平均峰高〔,K〕。$$吸取5ml维生素D标准溶液(e)，于250ml容量瓶中，加入几粒丁基化羟基甲苯结晶体。用氮气置换空气且接上回流冷凝管，在通氮条件下暗处90?水浴中加热，冷却。用流动相稀释并定容。在上述同样条件下向柱进样20μl，测定加热过的维生素D的峰高〔L〕和形成的维生素D前身的峰高〔M〕。计算:$$ CF,[(5K/4),L]/M F 样品的制备 F.a 在维生素A酯存在下，维生素D的浓度大于等于5000IU/g的维生素D油剂 精确称取维生素含量约为25 000IU的油溶液，于50ml容量瓶中。用流动相溶解、稀释并定容。 F.b 在维生素A酯存在下，维生素D的浓度大于等于5 000IU/g的维生素D干制剂和水悬浮液 精确称取含维生素D约20 000IU的样品，于锥形瓶中。加入少量链霉蛋白酶约20μg和20ml水，在37?温热30min。冷却。用60ml乙醇和100ml正戊烷将其移至分液漏斗中。剧烈摇动1min。待分层，将下层〔水相〕溶液移至第二个分液漏斗中。用50ml正戊烷振摇水层，排去水相。合并戊烷提取液，并用一份50ml水洗涤。排除最后几滴水，将2张9cm滤纸剪成的条状置于分液漏斗中，摇动。将洗涤的戊烷提取液移至200ml容量瓶中，用戊烷洗涤分液漏斗和滤纸，且用其稀释定容〔溶液A〕。溶液A在小于等于40?水浴中，真空旋转蒸发至干。在流水下冷却，通氮气恢复常压。立即用10ml流动相溶解残留物。 G 测定 G.a 分析 通过进样阀向色谱柱注入20μl维生素D标准溶液和制备的样品溶液，调整检测器的操作条件以得到最大峰高，重复注入标准溶液和样品溶液，测量维生素D和维生素D前身的峰高。 G.b 计算 维生素D，IU/g,([P^D^+(P^p^×CF)]×W’×V×40，000)/P’×W×V’)。$$式中P^D^,样品中维生素D的峰高;P^p^,样品中维生素D前身的峰高;P’,标准溶液中维生素D的峰高;CF,维生素D前身/维生素D的转换因子;W,样品重量，(g);W’,标准重量(mg);V,样品溶液总毫升数;V’,标准溶液总毫升数;40，000,IU维生素D/mg参比标准。 液相色谱法，维生素AD浓缩剂中维生素D ----------------------------------?????------------------------------------- 昆明能振商贸有限公司供应/提供液相色谱法检测维生素AD浓缩剂中维生素D化学试剂及大批量的液相色谱法检测维生素AD浓缩剂中维生素D工业级/食品级/医药级原料或检验方法，天天为客户发货至:云南省内各州市，含昆明、曲靖、玉溪、昭通、楚雄、红河、化工原料,化学试剂,化玻仪器,食品添加剂，医疗辅料 文山、普洱、西双版纳、大理、保山、德宏、丽江、怒江、迪庆、临沧等辖下县级市 (www.nengzhen.com.cn )。 化工原料,化学试剂,化玻仪器,食品添加剂，医疗辅料