甘油脱氢酶基因_dhaD_与二羟丙酮激酶基因_dhaKL_共表达

甘油脱氢酶基因_dhaD_与二羟丙酮激酶基因_dhaKL_共表达 (dhaKL)共表达 1 1 2郑 艳 ，管艺飞 ，刘长江 (1.沈阳农业大学食品学院，辽宁 沈阳110161;2.辽宁省人民政府，辽宁 沈阳1 摘要:以肺炎克雷伯氏菌 As1.1736 的基因组为，通过 PCR 技术成功地扩增了 dhaD 基因 和 dhaKL 基因的共表达载体。序列分析结果表明: dhaD 基因全长 1104bp，编码 367 个氨基酸残 电泳结果表明:dhaD 和 dhaKL 基因均获得了有效表达;上清液中酶活性分别为甘油脱氢酶 23.2U酶 25.6U/ml。 关键词:dha D ;克隆;dha KL ;共表达 lacI XhoI SacI ginx Amp dhaDdhaKL pMD19-TS/dhaD 2000bp ET-28a(+)/SacI XbaI 4085bp 1000bp 6613bp 750bp SacI 500bpi lacI 250bp 100bpOri XhoI/SacI XhoI/SacI dhaKL M.DNA Maker DL 2000;1.dhaD 基因 RC T-28a(+)/dhaKL 图 2 dhaD 基因 PCR 扩增产物电脉图6581bp Fi g.2 Agarose el ect rop horesis of PCR ampli fi dhaD/XhoI/SacIg e n e s lacI 重组细胞经诱导表达后分别在23130bp 9416bp6557 4316bp对应的 4 0kD和二羟丙酮激酶亚基 2322bp 2000bp 2027bp 23kD 的位置上出现了特异性条带( 1000bp 750bp 500bp 活性分别为甘油脱氢酶 23.2U/ml， 250bp 100bp ml 。 # 1 2 3 4 5 6M M1.DNA Marker λHind ?;1.4克隆质粒;M2.DNA Marker DL 2 000 。 图 3 重组质检 XhoI、SacI 酶切鉴定的琼脂糖凝胶电泳图谱 Fi g. 3 Id en ti fi ca ti on o f co mb in ed p la smid wit h Xh oI an d S ac I M 1 23130bp 9416bp 6557bp 4361bp 2322bp 2027bp 1. pET-28a(+)菌体总蛋白;2.上清液中 pETpET-28a(+)菌体蛋白;4.菌体总诱导蛋白; 诱导蛋白;M.蛋白分子量标准。 图 6表达产物的 SDS-PAG e le ct ro ph oresis o f SDS-PAGE Fig .6 # 克隆质粒。M.DNA Marker λHind ?;1.1 c o e x p re ssi n 图 4 重组质粒的琼脂糖凝胶电泳 Ag arose el ec troph oresis o f co mb in ed p la smid Fi g. 4 3讨论 肺炎克雷伯氏菌对甘油的厌氧 1 M2 M1 还原途径，两个代谢途径的协调主 完成，这个调节子被 Lin 等人称为 调节子只存在于少数几种微生物中 23130bp 9416bp 菌外还有巴氏梭菌(Clostridium p 6557bp 4316bp菌(Clostridium butyricum)、弗氏 2322bp 2000bp 2027bpfreundii)、梭菌(Clostridium per 1000bp 750bpdha 调节子共有 15 个开放阅读框架 500bp dha KL 基因、dha D 基因、gld A B 250bp 100bp 一个调节蛋白(DhaR) 、一个甘油