雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达

雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性达 第 32 卷 第 4 期解剖学报 Vol132 ,No14 ACTA ANATOMICA SINICA 2001 年 10 月 Oct . 2001 雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠 睾丸中的期依赖性表达 3陈雪雁陈实平金淑敏程凯董红燕陈克铨 ( )中国医学科学院 中国协和医科大学基础医学研究所 ,北京 100005 () ( ) [ 摘要 ] 目的 确定雄激素受体 AR和卵泡刺激素受体 FSHR在大鼠睾丸中的细胞定位和表达变化 。 方 法 利用地高辛标记的 cRNA 探针 ,在成年大鼠睾丸冰冻切片上进行原位杂交 ;同时利用透光显微切割技术将成年 32 α大鼠曲细精管分为 ?, ?、?, ?、?, ?、??, ?4 个阶段 ,提取总 RNA ,用2P 标记的 cDNA 探针进行斑点杂 交 ,观察 AR 和 FSHR mRNA 表达的细胞定位和期依赖性变化 。利用图像系统 ,对阳性杂交信号单位面积平均辉度进行定量分析 。 结果 AR mRNA 阳性杂交信号位于支持细胞和间质细胞 ,于 ?, ?期最强 , ?, ?期最弱 ; ( FSHR mRNA 阳性杂交信号位于支持细胞 ,于 ??, ?期最强 , ?, ?期最弱 。各阶段之间具有非常显著性差异 P ) ) ) (( < 0101。 结论 AR 和 FSHR 期依赖性表达的不同规律提示 T睾酮和 FSH 卵泡刺激素作用于精子发生的不同阶段 ,说明睾酮和卵泡刺激素协同作用调节成年大鼠的精子发生 。这一结论将为人类生育调控和不孕症的治疗 提供新思路 。 [ 关键词 ] 雄激素受体 ;卵泡刺激素受体 ;期依赖性 ;分子杂交 () [ 中图分类号 ] R321 [ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 052921356 2001042365 STA GE2D EPEND ENT EXPRESSIO N OF AND RO GEN RECEPTO R AND FS H RECEPTO R IN AD UL T RAT TESTIS 3CHEN Xue2yan , CHEN Shi2ping , J IN Shu2min , CHENG Kai , DONG Hong2yan , CHEN Ke2quan ( )Department of Cell Biology , Peking Union Medical College , Beijing 100005 , China [ Abstract ] Objective To determine the cellular localization and expression pattern of AR and FSHR in adult rat testis must be helpful to understand the action site and mechanisms that T and FSH regulate spermatogenesis. Methods We applied in situ Hybridization to detect the expression of AR and FSHR on adult testis , in which Dig2labeled cRNA probe was used to carry out the experiment on frozen sections ; at the same time , following the technique of transillumination2assisted microdissection we ( ) separated seminiferous epithelium into four stages?2 ?, ?2 ?, ?2 ? and ??2 ?, extracted total RNA and carried out dot 32 α hybridization , using2P labeled cDNA probe , in order to test qualitatively and quantitatively the location of AR and FSHRmRNA and their expression pattern in adult rat testis. Results Our results showed that the positive signal of AR mRNA was locat2 ed in Sertoli cells and Leydig cells. The signal in Sertoli cells began to appear in ?2 ? stages , strongest in ?2 ? stages and ( ) weakest in ?2 ? stages P < 0101. The positive signal of FSHR mRNA was located in Sertoli cells strongest in ??2 ? stages , ( ) weakest in ?2 ? and intermediate in the other stages P < 0101. The different pattern of stage2specific expression of AR and FSHR in adult rat testis suggested that T and FSH act on different stages during spermatogenesis. Conclusion We suppose that there is a coaction at regulation spermatogenesis between T and FSH. From this point of view , it may provide new ideas for design2 ing contraceptive strategies and treating human infertility. [ Key words ] Androgen receptor ; FSH receptor ; Stage2dependent ; Molecular hybridization ( ) () 卵泡刺激素 FSH和黄体生成素 L H是垂体分 泌的两种促性腺激素 。它们对于精子发生过程的起 (始和维持是必不可少的 。但 FSH 和 L H 后者主要是 210228 [ 修回日期 ] 2000204225 1999[ 收稿日期 ] ) 通过睾酮 ,T对精子发生过程的调节机制虽然经过 ()国家“九五”攀登预选项目资助课 952预233 [ 基金项目 ] () ( ) [ 作者简介 ] 陈雪雁 1972 —,女 汉族,江苏省人 ,硕士 。 近 60 年的研究仍未澄清 ,特别是关于 FSH 对成年动 ( )3 通讯作者 To whom correspondence should be addressed 物精子发生的调节作用更存在颇多争议 。本研究试 () ( ) BCIP2DIG/ 缓冲液 ?,静置避光显色 15 h , TE 缓冲液 图从雄激素受体 AR和卵泡刺激素受体 FSHR入 ( ) 手 ,探讨 T 和 FSH 在成年大鼠精子发生过程中的调 Tris2EDTA 缓冲液终止反应 ,甘油明胶封片 。 原位 () 控作用 。目的在于阐明 T 和 FSH 调节精子发生过 杂交切片对照采用 : 1杂交液内去除标记 () () 程的事实和可能机理 ,为人类生育调控和不孕症的 探针 ; 2杂交液内加入未标记探针 ; 3杂交液内加 入正义 cRNA 标记探针 。治疗提供新思路 。 213 特 定 阶 段 曲 细 精 管 的 分 离 及 RNA 的 提 材料和方法 2取 :90 d Wistar 大鼠断颈髓处死 ,取出睾丸 ,剥去白 ,置冷生理盐水中 。解剖镜下借助透光显微切割膜 11 材料 2 α 技术按照管腔的明暗 、管内细胞折光斑点的强弱 、 111 菌种 :大肠杆菌 DH5为本实验室保存 。 TM () 112 质粒 : 1pCR?2AR ,内含大鼠 AR 基因的 长参考光 谱 、并 经 切 片 确 认 , 将 曲 细 精 管 分 为 ?2 ?、 为 319pb 的 DNA 片段 , 该片段由本实验室扩增 、 ?2 ?、?2 ?、??2 ?4 个阶段 。曲细精管 RNA 的提 TM 取按 RNAzol 试剂盒说明书进行 。当 RNA 样品 18S测序 ,克隆于质粒载体 pCR?的 E. coR ?酶 切 位 TM ( ) 和 28S 完整 、A / A 大于 118 时用于实验 。样品存 点 ; 2pCR?2FSHR , 内部含有大鼠 FSHR 基因的 260 280 长为 215 bp 的 DNA 片段 ,该片段由本实验室扩增 、 于 - 70 ?。1 A= 40 mgRNA/ L 。 260 TM 214 斑点杂交 : cDNA 探针的标记按 prime2a2gene 测序 ,克隆于质粒载体 pCR?的 E. coR ?酶切位 labelling system 操作指南进行 。以特定基因的 cDNA 点 。 32 () α片段 25 ng为 模 板 , 2P dCTP 和 3 种 未 标 记 的 113 试 剂 : 限 制 性 内 切 酶 、同 位 素 标 记 试 剂 盒 dATP 、d GTP 、dTTP 在大片段酶作用下 ,合成出高比活 ( ) prime2a2gene labelling system Promega; Dig RNA La2 μμ度的双链 cDNA 探针 。RNA 样品与 20l 甲酰胺 、7l ( ) beling Kit SP6/ T7 、Dig Nucleic Acid Detection Kitμ37 %甲醛 、2l 20 ×SSC 按 1 ?219 混合 ,68 ?温育 15 ( ) ( Boehringer Mannheim Biochemica ; RNAzol Wak2 min ,冰浴 冷 却 样 品 。利 用 多 孔 过 滤 点 样 器 将 RNA ) Chemic Medical GMBH;DNA 快速纯化回收试剂盒 、 样品点样于经 20 ×SSC 浸润 30 min 的硝酸纤维素膜( ) 高 效 液 相 杂 交 试 剂 盒 BioDev ; DEPC 、SDS 、for2 32 上 。室温晾干后 ,80 ?干烤 2 h 。4 ?保存 。 杂交按( ) α( mamide 、硫酸葡聚糖 Sigma; 2P dCTP 3 000 Ci/ ) ) ( mmolΠL ,10 CiΠL北京福瑞公司; 其他各种试剂均 高效液相杂交试剂盒说明书进行 。将杂 为进口或国产分析纯试剂 。 交膜浸入预杂交液中 ,65 ?预杂交 1 h 。加入 NaOH ( 114 动物 : 90 d 雄性 Wistar 大鼠 中国医学科学 变性的探针 ,65 ?杂交过夜 。 ) 院实验动物中心,体重 300 g 。 洗膜条件 :2 ×SSC/ 015 %SDS 溶液洗 2 次 ,每次 21 方法10 min ;再用预热到 55,60 ?的 015 ×SSC/ 015 % SDS 211 基因片段的制备 :将各种质粒分别转化感受 溶液洗 2 次 ,每次 25 min 。室温晾干 ,样品膜两面各 ( α) 态细胞 E. Coli . DH5,制备质粒 DNA ,用相应的限 放 1 张 X 线片置于曝光夹中 , - 70 ?加增感屏放射 制性内切酶消化 ,用 DNA 快速纯化回收试剂盒回收 自显影 48 h 或更长时间 ,于暗室显影及定影 。 目的基因片段 。斑点杂交以含有特定基因的 cDNA 片段的质粒 作为阳性对照 ,以大鼠肾组织 RNA 作为阴性对照 。 212 原 位 杂 交 : cRNA 探 针 标 记 和 检 测 按 Dig 215 统计学处理 : 利用图像分析系统 , 分别对 4( ) RNA Labeling Kit SP6/ T7和 Dig Nucleic Acid Detec2 只大鼠 ,20 个切面的阳性杂交信号单位面积平均辉 1 tion Kit 说明书操作 。主要步骤为: 取新鲜或液氮 度进 行 定 量 分 析 。结 果 采 用 Student Newman2Keuls ( μ) 冻存的组织进行冰冻切片 厚 6m,切片经 4 %多 ( ) SN K进行统计分析 。 P < 0105 被认为具有显著性 聚甲 醛/ PBS 溶 液 固 定 20 min , 再 依 次 经 PBS 、5 差异 。 mmolΠL MgCl/ PBS、20 %乙酸溶液 、011 molΠL Gly/ 0112 ( molΠL Tris〃Cl 、2 ×SSC 等预处理后 , 滴加杂交液 探 μ) 针浓度 5gΠL于湿盒中 50 ?杂交 16,22 h 。其后经 结果 ( ) 浓度递减的枸橼酸盐溶液 SSC漂洗和 RNaseA 消化 () 后 ,滴加 DIG 抗体/ 缓冲液 ?1?2 000室温作用 1 h , 11 原位杂交检测 AR 和 FS HR 在睾丸中的定位和期 经 DIG 缓 冲 液 ?漂 洗 后 滴 加 1 ?50 稀 释 的 NBT/ 依赖性变化 在 90 d 的 大 鼠 睾 丸 中 用 地 高 辛 标 记 的 AR 和 Vol . 32 ,No . 4 陈雪雁等 . 雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达 〃367 〃 表 1 AR mRNA 在不同期曲细精管原位杂交信号辉度变化 FSHR antisense cRNA 探针进行原位杂交 ,结果显示 Table 1 Densitometric quantification of in situ AR mRNA 的阳性信号呈蓝色 ,位于支持细胞和间质 hybridization analysis of AR mRNA expression in 细胞中 ,生精细胞无表达 。在支持细胞中的表达具 different stages of seminiferous tube ( ) 有明显的期依赖性改变 , ?, ?期中等 图 1, ?, 任意光密度单位 分期 ?, ? ?, ? (( ) ) ?期最高 图 2, ?, ?期较低 图 3 ,4; FSHR mR2 # ( )stage A . U. NA 的蓝色阳性信号位于支持细胞中 ,其表达也具有 0. 0824 ?0 . 0078 ?, ? ?, ? 3 0. 1302 ?0 . 0074明显的期依赖性改变 , ?, ?和 ?, ?期中等水平 ?, ? 3 3 0. 0310 ?0 . 0065(( ( ) ) 图 5 ,7, ?, ?期最低 图 6, ??, ?期最高 图 3 3 0 . 0348 ?0 . 0040 ??, ? ) 8,生精细胞无表达 。3 组对照片均呈阴性 ,未见蓝 ()3 P < 0105 ,具有显著性差异 means significant difference 色阳性信号 。 () # A . U. 任意光密度单位 Arbitrary densitometric units 21 原位杂交信号单位面积平均辉度统计学分析表 2 FSHR mRNA 在不同期曲细精管 统计学分析表明 ,AR mRNA 在 4 个不同时段曲 原位杂交信号辉度变化 ( ) 细精管中的表达具有非常显著差异 P < 0101, ? Table 2 Densitometric quantification of in situ hybridization , ?期与 ?, ?、?, ?、??, ?期以及 ?, ?期 analysis of FSHR mRNA expression in different ( stages of seminiferous tube 与 ?, ?、??, ?期之间分别具有显著性差异 P ( 任意光密度单位 分期 ) ) < 0105 , 其 他 各 期 之 间 的 差 异 无 显 著 性 表 1 ; ?, ? ?, ? ?, ? ( )A . U. stage FSHR mRNA 在 4 个不同时段曲细精管中的表达具 0 . 0839 ?0 . 0136 ?, ? ( ) 有非常显著差异 P < 0101, ?, ?期与 ?, ?、? ?, ? 3 0 . 0530 ?0 . 0038 , ?、??, ?期之间 , ?, ?期与 ?, ?、??, ? 3 3 0 . 1079 ?0 . 0055?, ? ? 3 3 ?, ? 3 0 . 1399 ?0 . 0060期之间以及 ?, ?和 ??, ?期之间分别具有显著 ()3 P < 0105 ,具有显著性差异 means significant difference ( ) 性差异 P < 0105, 其他各期之间的差异无显著性 () cDNA探针进行斑点杂交 ,结果显示 ,AR mRNA 的表 表 2。 达于 ?, ?最 高 , ?, ?期 较 低 , ?, ?期 中 等 ; 31 不同期曲细精管的斑点杂交检测 AR 和 FS HR 在 FSHR mRNA 的表达于 ??, ?期最高 , ?, ?期最 睾丸中的表达 32 () α低 , ?, ?和 ?, ?期中等水平 图 9 ,10。分 别 用 [2 P dCTP 标 记 的 AR 和 FSHR 的 32 α图 9 [2P dCTP 标记的 AR cDNA 探针斑点杂交的结果 1,21 阳性对照 3,41 ?, ?期 5,61 ?, ?期 7,81 ?, ?期 9,101 ??, ?期 11,121 阴性对照 32 α图 10 [2P dCTP 标记的 FSHR cDNA 探针斑点杂交的结果 1,21 阳性对照 3,41 ?, ?期 5,61 ?, ?期 7,81 ?, ?期 9,101 ??, ?期 11,121 阴性对照 32 α Fig. 9 Dot hybridization of total RNA from different stages of seminiferous epithelium in adult rat with 2P dCTP 2labeled AR cDNA probe . 122 ,positive control 324 , ?2 ? stage 526 , ?2 ? stage 728 , ?2 ? stage 9210 , ??2 ? stage 11212 ,negative control 32 α Fig. 10 Dot hybridization of total RNA from different stages of seminiferous epithelium in adult rat with 2P dCTP 2labeled FSHR cDNA probe . 122 ,positive control 324 , ?2 ? stage 526 , ?2 ? stage 728 , ?2 ? stage 9210 , ??2 ? stage 11212 ,negative control 41 斑点杂交阳性杂交信号辉度扫描统计学分析 在 4 个不同时段曲细精管中的表达具FSHR mRNA ( ) 统计学分析表明 ,AR mRNA 在 4 个不同时段曲 有非常显著差异 P < 0101, ?, ?期与 ?, ?、? ( ) 细精管中的表达具有非常显著差异 P < 0101, ? , ?、??, ?期之间 , ?, ?期与 ?, ?、??, ? , ?期与 ?, ?、?, ?、??, ?期以及 ?, ?期期之间以及 ?2 ?和 ??, ?期之间分别具有显著性 ( ( ( ) 与 ?, ?、??, ?期之间分别具有显著性差异 P 差异 P < 0105,其他各期之间的差异无显著性 表 ( ) ) ) < 0105 , 其 他 各 期 之 间 的 差 异 无 显 著 性 表 3 ;4。与原位杂交结果相符 。 表 3 AR mRNA 在不同期曲细精管斑点杂交信号辉度变化 β泌外 , 2神经生长因子 、转铁蛋白 、SGP21 、SGP22 等一 Table 3 Densitometric quantification of dot hybridization 些低 丰 度 的 支 持 细 胞 分 泌 蛋 白 均 是 T 依 赖 性analysis of AR mRNA expression in different stages 6 ,8 的 。它们很可能作为旁分泌因子 , 调节精子形 of seminiferous tube 成的过程 。 我们在支持细胞和间质细胞胞浆内检任意光密度单位 分期 ?, ? ?, ? 测到 AR ( )A . U. stage mRNA 的表 达 , 而 生 精 细 胞 内 却 未 发 现 阳 性 信 号 。 0. 3345 ?0 . 0318 ?, ? 9 3 ?, ? 0. 4990 ?0 . 0523这与 Anthony 等的 AR 蛋白免疫组织化学研究结 3 3 ?, ? 0. 1950 ?0 . 0127果是一致的 。上述结果再次表明 , T 并不直接作用 3 3 0 . 2095 ? 0 . 0212 ??, ? 于生精细胞 ,而是通过睾丸中的体细胞 ,尤其是支持 ()3 P < 0105 ,具有显著性差异 means significant difference 细胞来介导其对精子转型的调节作用 。AR 在间质 表 4 FSHR mRNA 在不同期曲细精管斑点 细胞中的表达说明间质细胞是自身所分泌的 T 的靶 杂交信号辉度变化 细胞 ,接受 T 的自分泌调节 。我们还观察到睾丸间 Table 4 Densitometric quantification of dot hybridization analysis of FSHR mRNA expression in different stages 质血管中的内皮细胞中也有 AR mRNA 的表达 ,提示 of seminiferous tube T 有可能通过睾丸间质血管内皮细胞中的 AR 直接 任意光密度单位 分期 调节睾内血流和微循环 。 ?, ? ?, ? ?, ? ( )A . U. stage 10 最近 Suarez2Quiah 等在 对 大 鼠 及 小 鼠 AR 0 . 7160 ?0 . 0537 ?, ? mRNA 及蛋白的研究中发现 AR mRNA 及蛋白表达 ?, ? 3 0 . 5560 ?0 . 0311 不同步 。AR mRNA 于 ?期表达于支持细胞和细线 ?, ? ?3 3 0 . 9385 ?0 . 0219 3 3 ?, ? 3 1 . 0825 ?0 . 0919期初级精母细胞 ,而 AR 蛋白在 ?期支持细胞可检 ()3 P < 0105 ,具有显著性差异 means significant difference 测出来 ,于 ?期达到高峰 ,并表达于长形精子细胞胞 浆中 。而我们的实 验 结 果 和 以 前 的 报 道 都 提 示 了 讨论 AR mRNA 和 AR 蛋白表达的同步性 。我们用原位杂 T 是精子发生过程中不可缺少的调节激素 。已 交和斑点杂交的不同方法分析 AR mRNA ,均得出相 有研究 , T 对曲细精管不同时期的作用明显不 同结论 , 方法可靠 。彼此结果的不同 , 常常由于材 同 。例如 , ?, ?期曲细精管内蛋白的分泌量比其 料 、方法 、试剂 、探针的不同和机体状态的不同 。事 3 他期更易受 T 的影响,体内 T 缺乏时 , ?期曲细精 实上 ,对于 AR 期依赖性表达及 T 通过 AR 调节精子4 管细胞 形 态 的 改 变 较 其 他 期 显 著。一 般 认 为 , T ,仍是一个有待于深入研究的问题 。发生过程的机制 对睾丸的作用需要 AR 来介导 ,调节特异靶基因的关于 FSHR 在成年大鼠睾丸中的表达规律目前 11 转录 。我们的结果显示 ,AR mRNA 主要位于支持细 仍存在争议 。Heckert 等给予大鼠维生素 A 缺乏 胞和间质细胞内 。在精子发生周期中 ,AR 在支持细 的饮食 ,使大鼠曲细精管的发育同步于特定的几个 胞中的表达自 ?, ?期开始出现 ,于 ?, ?达到高 期 ,运 用 Northern 杂 交 方 法 分 析 RNA , 发 现 FSHR 峰 ,在 ?, ?期处于较低水平 。我们的观察提示 , T mRNA 水平于 ??, ?期最高 , ?, ?期最低 。他们 12 的期特异性效应可以认为是 AR 期依赖性表达的结 的工作和 Kliesch 等的结论相矛盾 。后者利用组 果 。 织切片原 位 杂 交 方 法 , 却 发 现 FSHR mRNA 特 异 杂 AR mRNA 在 ?, ?期的高水平表达表明 , T 在交信号于 ?, ?期最强 , ?, ?信号强度减低 , 而 圆形精子细胞向长形精子细胞的转变过程中 ,可能 ??, ?期则无杂交信号 。这两种方法各有其局限 5 发挥重要的调控作用 。与其他类固醇激素一样, T 性 。维生素 A 缺乏饮食的大鼠模型中 ,曲细精管的 最重要的作用方式是通过靶细胞内的 AR 调节特异 某些阶段占优势 ,有可能伴有未知的旁分泌调节途 基因的表达 。T 与受体的复合物进入细胞核后 , 与 径的激活和代谢的变化 ,使基因的表达与正常大鼠 靶基因的顺式作用元件相结合 ,作为基因转录的增 不完全相同 。Kliesch 等利用 pBluescript 质粒作为克 强子或抑制子 ,最终导致特异蛋白分泌的变化 。可 隆载体制备探针 , 而最近有报道认为 pBluescript 克 隆载体的多克隆位点可能会导致原位非特异的杂交 以推测 ,T 通过影响支持细胞中特异蛋白的分泌来13 介导调控功能 。已经证实 , T 除参与调控 ABP 的分信号 ,这一现象以及 Kliesch 等原位杂交中使用的 Vol . 32 ,No . 4 陈雪雁等 . 雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达 〃369 〃 本文图 1,8 见插图第 17 页 探针来源于猴 FSHR cDNA 的事实可能造成其实验 图 版 说 明结果的误差 。我们利用透光显微切割技术分离不同 图 1,4 DIG2AR 的 cRNA 探针在成年大鼠睾丸中的原位杂交结果 。 ×400 阶段的曲细精管 ,提取 RNA 进行斑点杂交 ,同时在 图 1 ?, ?期 ; 图 2 ?, ?期 ; 图 3 ?, ?; 图 4 ??, ?期 睾丸切片上进行原位杂交 ,其探针来源于大鼠 FSHR 图 5,8 DIG2FSHR 的 cRNA 探针在成年大鼠睾丸中的原位杂交结 果 。 ×400 cDNA , 实 验 方 法 更 为 可 靠 。我 们 观 察 到 FSHR 图 5 ?, ?期 ; 图 6 ?, ?期 ; 图 7 ?, ?; 图 8 ??, ?期 mRNA的杂交信号全部位于支持细胞 ,于 ??, ?期 Explanation of figures Fig. 124 In situ hybridization with DIG2AR cRNA probe in adult rat testis. 最强 , ?, ?最弱 ,在 ?, ?期和 ?, ?期处于中等 ×400 水平 ,这些结果表明 FSH 有选择性的作用于成年大 Fig. 1 ?2 ? stage ; Fig. 2 ?2 ? stage ; Fig. 3 ?2 ? stage ; Fig. 4 ??2 ? stage 鼠曲细精管的特定时段 。可以推测 FSH 主要作用 Fig. 528 In situ hybridization with DIG2FSHR cRNA probe in adult rat tes2 tis. ×400 于 ??, ?期 ,调节精原细胞的分裂和精母细胞的 Fig. 5 ?2 ? stage ; Fig. 6 ?2 ? stage ; Fig. 7 ?2 ? stage ; Fig. 8 减数分裂过程 ,决定进入精子形成期的圆形精子细 ??2 ? stage 胞数量 ,而对 ?, ?期圆形精子细胞向长形精子细 参 考 文 献 1 ] 路建平. 非放射性杂交技术 M. 海口 : 南海出版公司 ,1996 : 672 胞的转变过程不起主要调节作用 。 77 . 2 根据多年来学者们各方面的研究 , T 对于青春 Parvinen M , Vanha 2Perttula T. Identification and enzyme quantitation of the stages of the seminiferous epithelial wave in the rat J . Anat Rec , 期精子发生过程的起始 ,成年后精子发生作用的维 () 1972 ,174 4:4352450 . 125 Orth J , Christensen AK. Localization of I2labeled FSH in the testes of 3 持 ,以及以实验手段抑制精子发生过程后的再起始 hypophysectomized rats by autoradiography at the light and electron mi2 14 都是必需的。FSH 被 认 为 是 起 始 过 程 中 的 关 键 () croscope levels J . Endocrinology ,1977 ,101 1:2622278 . 4 Bartlett JMS , Kerr JB , Sharpe RM. The effect of selective destruction 因素 ,能够直接影响精原细胞的数量和精子形成过 and regeneration of rat Leydig cells on the intratesticular distribution of 14。而 FSH 在成年动物中 ,尤其是啮齿类动物中程 testosterone and morphology of the seminiferous epithelium J . J An 2 () drol ,1986 ,7 4:2402253 . 的作用目前仍存在争议 。我们的研究表明 T 和 FSH Parker MG. Mechanisms of action of steroid receptors in the regulation 5 () of gene transcription J . J Reprod Fertili ,1990 ,88 2:7172720 . 协同作用是调控生精细胞发生所必需的 。Louis B G , Fritz IB. Stimulation by androgens of the production of an 2 6 首先 ,我 们 的 原 位 杂 交 和 斑 点 杂 交 结 果 显 示 , drogen binding protein by cultured Sertoli cells J . Mol Cell Endocri 2 () nol ,1977 ,7 1:9216 . AR 和 FSHR mRNA 在 支 持 细 胞 中 的 表 达 具 有 期 依 Persson H , Le Lievre CA , Soder MJ , et al . Expression of beta 2nerve 7 赖性的变化 。由于 T 和 FSH 都是通过各自的受体 growth factor receptor mRNA in Sertoli cells downregulated by testoster2 () one J . Science ,1990 ,247 4943:7042707 . 发挥生理功能 ,因此 ,AR 和 FSHR 的变化反映了这 Hugly S , Roberts K , Griswold MD. Transferrin and sulfated glycopro 2 8 两种激素在精子发生过程中的 有 序 表 达 和 整 体 功 tein22 messenger ribonucleic acid levels in the testis and isolated Sertoli ( ) cells of hypophysectomized rats J . Endocrinology , 1988 , 122 4 : 能 ,它们在 T 和 FSH 的作用下 , 共同调节精子发生 139021396 . Anthony CT , Kovacs WJ , Skinner MK. Analysis of the androgen recep 2 9 过程中的程序性基因表达 。其次 , T 和 FSH 在生精 tor in isolated testicular cell types with a microassay that uses an affinity 细胞的发生中具有互补或叠加的作用 。缺少其中的 ligand J . Endocrinology ,1989 ,125 :2628 22635 . 10 Suarez 2Quian CA , Oke BO , Vornberger W , et al . Androgen receptor 任何一种激素都会导致精子发生的障碍 :缺乏 T ,则 ( ) distribution in the testis. In : Claude D ed . Cellular and Molecular 不能完成精子细胞的变态 ,而缺乏 FSH ,则会导致粗 Regulation of Testicular Cells M . New York : Springer 2Verlag ,1996 : 15 1892212 . 线期精母细胞的程序性死亡,更谈不上圆形精子 11 Heckert LL , Griswold MD. Expression of follicle 2stimulating hormone 细胞的发生 。两者协同作用 ,共同维持正常的精子 receptor mRNA in rat testes and Sertoli cells J . Mol Endocrinol , () 1991 ,5 5:6702677 . 发生过程 。 12 Kliesch S , Penttila TL , Gromoll J , et al . FSH receptor mRNA is ex 2 pressed stage2dependently during rat spermatogenesis J . Mol Cell En 2 总之 ,AR 和 FSHR mRNA 在支持细胞中表达的() docrinol ,1992 ,84 3: R452R49 . 期依赖性变化反映了曲细精管 发 育 周 期 中 存 在 着 13 Millar MR , Sharpe RM , Maquire SM , et al . Localization of mRNAs by in2situ hybridization to the residual body at stages ?2 ?of the cycle of AR 和 FSHR 受体基因的有序性表达和相互关联 ,为 the rat seminiferous epithelium :fact or artiface J . Int J Androl ,1994 , () 17 3:1492160 . 深入探讨 T 和 FSH 对精子发生的协同作用提供了 14 Roberts KP , Zirkin BR. Androgen regulation of spermatogenesis in the 新的论据 ,也为研究精子发生过程中复杂的激素调 () rat J . Ann N Y Acad Sci ,1991 ,637 1:902106 . 15 Shetty J , Marathe GK , Dighe RR. Specific immunoneutralization of 控问题提供了新思路 。能否采取措施干扰 T 和/ 或 FSH leads to apoptotic cell death of the pachytene spermatocytes and FSH 对支持细胞的作用 ,从而影响生精细胞的发生 、 () spermatogonial cells in the rat J . Endocrinology ,1996 ,137 5:21792 2182 . 增殖和分化 ,开拓男性节育和不孕症治疗的新途径 , 陈雪雁等 . 雄激素受体和卵泡刺激素受体在成年大鼠睾丸中的期依赖性表达 ( ) 正文见 365 页 ,图说明见 369 页