bradford法测定蛋白的浓度

bradford法测定蛋白的浓度 Bradford法测定蛋白质的浓度 原理 Bradford测定蛋白质浓度的和考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度一样～是利用蛋白质-染料结合的原理～定量地测定微量蛋白质浓度的快速灵敏的方法。 , 该法是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford 法研制而成～实现了蛋白浓度测定的快速～稳定和高灵敏度。 , 利用此方法检测速度极快～10，20个样品只需不足10分钟 即可完成。 , 灵敏度高～检测浓度下限达到25ug/ml,最小检测蛋白量达到 0.5ug,待测样品体积为1，20ul。 , 且在50，1000 ug/ml浓度范围内有较好的线性关系。 , Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的 影响。样品中-巯基乙醇的浓度可高达1M～二硫苏糖醇的浓 度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.01%～Triton X-100低于0.05%～Tween 20, 60, 80低 于0.015%。 试剂和仪器 一、 试剂 试剂盒自备:G250 染色液、BSA标准蛋白。 BSA标准蛋白浓度已稀释至500μg/ml～-20?保存。 二、 测试样品 待测样品蛋白浓度稀释在50-500μg/ml范围内为宜。 三、仪器 96孔酶标、酶标仪。 操作方法 标准品编号 1 2 3 4 5 6 7 8 500ug/mlBSA/μl 0 1.5 3 6 12 18 24 30 蒸馏水/μl 30 28.5 27 24 18 12 6 0 分别于小离心管中混匀后～取20μl加入到对应酶标孔中 待测样品编号 9 10 11 12 13 14 15 …… 待测样品稀释后～各取20μl加入到相应酶标孔中 G250/μl 200 μl/孔 反应3-5min 1. 用酶标仪测定A595nm处的吸光值。 2. 根据标准曲线计算待测样品的蛋白浓度。