茜草多糖在抗放射损伤方面的作用.doc

茜草多糖在抗放射损伤方面的作用.doc 茜草多糖在抗放射损伤方面的作用 -->摘 要: 目的:自茜草中提取多糖类成分,并予以分离;测试茜草多糖在抗辐射方面的生理活性;方法:以小鼠为实验对象,测试茜草多糖对其造血组织和免疫系统的保护作用,并以高剂量辐照后小鼠30d的存活率作为抗辐射作用的综合指标;结果:药理实验明,两组多糖与对照组及茜草片组比较,可显著增加受7.5 gyγ-射线照射小鼠的脾重(NP:P 关键词: 茜草; 多糖; 抗辐射 茜草为茜草科茜草属植物茜草Rubia cordifolia L.的根及根茎,为常用中药,主产于陕西、河北、河南、山东等地,以河南、陕西产量最大,品质最佳。其主要功效为行血止血、通经活络、止咳祛痰,用于吐血、尿血、便血、风湿麻痹、跌打损伤、黄疸等症[1],《神农本草经》列为上品。 茜草是一种抗辐射效果较好的中药,已研制成茜草片,于1989年获军特新药证书,已装备部队,其主要成分是小分子的活性成分,机理是对造血系统有保护作用。 由于多糖类物质对免疫系统有重要影响,所以本实验着重研究茜草多糖在抗放射损伤方面的作用,并与作用机理不同的茜草片作以对照。 1(茜草中多糖类物质的提取分离 1.1 实验 1.1.1 茜草 市售品,经兰州军区药检所检验为合格品。 1.1.2 体积分数95%乙醇 兰州大学试剂厂,纯。 1.1.3 无水乙醇 兰州大学试剂厂,分析纯。 1.1.4 氨水 天津化学试剂二厂,分析纯。 1.1.5 DEAE-Cellulose 青岛海洋化工厂,柱色谱用。 1.2 实验方法 4kg茜草加入20L水浸泡过夜,煮沸1h,过滤,药渣重复煎煮1次,合并滤液,经薄膜蒸发浓缩至与原生药比为1?1.5,向浓缩液中缓慢加入体积分数为95%乙醇,充分搅拌,使乙醇最终浓度为体积分数30%,静置过夜,弃去沉淀,取上清液向其中缓慢加入体积分数95%乙醇,充分搅拌,使乙醇最终浓度为体积分数75%,静置过夜,6000r/min离心20min,取沉淀用无水乙醇干燥脱水,自然风干,得粗多糖114g,得率为2.85%。若改变乙醇最终浓度(65%或85%),得率均不超过2.85%。 将粗多糖溶于蒸馏水,经二乙氨基乙基纤维素(deae-Cellulose)柱层析,依次用蒸馏水和8g/L氨水洗脱,水洗脱液浓缩得中性多糖np17.3g,氨水洗脱部分浓缩得酸性多糖ap24.1g。 2. 茜草多糖对造血及免疫系统的影响 脾脏和胸腺是动物体内重要的免疫器官,也是对放射损伤最敏感的器官。造血干细胞和幼稚的骨髓细胞对射线敏感,放射损伤时这些有增殖能力的细胞分裂将受到抑制和破坏,骨髓细胞不断减少,外周血象随之不断降低[2],又以外周血白细胞数变化最为明显,因此,它们可作为评价抗辐射药物的理想指标。本实验选择胸腺重,脾重和外周血白细胞数作为观察茜草多糖对小鼠造血组织和免疫系统保护作用的指标,同时选择受8.5Gyγ-射线照射小鼠30d存活率作为观察茜草多糖对小鼠抗辐射作用的综合指标。 2.1 材料和方法 2.1.1 实验材料 茜草多糖NP和AP(本人分离制得),茜草片(兰州军区68072部队提供)。昆明种小鼠(兰州生物制品研究所动物中心)。60Co放射源(兰州市辐照站提供)。 2.1.2实验方法 将NP和AP分别用生理盐水制成浓度为50mg/mL的水溶液,经灭菌后用作腹腔给药。昆明种小鼠75只,体重20g?2g,雌性,按体重随机分为5组:正常组,对照组,茜草片组,多糖NP组,多糖AP组。60Coγ-射线全身照射小鼠(正常组除外),剂量为7.5gy。茜草片组于照前 60min口服茜草片每只600mg,多糖组于照前30min腹腔注射给药(NP每只600mg,AP每只600mg),照后7d称量小鼠体重,眼眶取血计数外周白细胞数,活杀后称取小鼠胸腺、脾脏重量。 昆明种小鼠80只,体重20g?2g,雌性,按体重随机分为4组:对照组,茜草片组,多糖NP组,多糖AP组。60Coγ-射线全身照射小鼠,剂量为8.5 gy。茜草片组于照前60min口服茜草片每只600mg,多糖NP组和AP组于照前30min腹腔注射给药(NP每只600mg,AP每只600mg),观察30d存活率。 2.2 实验结果 自茜草中提取分离得到的两部分多糖均有一定的抗辐射作用,能提高受照动物的存活率15%25%,尤其是其中酸性多糖AP的抗辐射效果较显著(P 3 讨论 3.1 正常组与对照组比较,各项指标均有极显著差异(P 3.2 药理实验数据表明,茜草中性多糖和酸性多糖对受照小鼠的造血组织和免疫系统均有一定的保护和促进作用,表现为脾脏重量增加,外周血白细胞数明显增加,同时作为免疫系统的胸腺组织重量也有所增加。结合多糖NP组和AP组对高剂量辐照小鼠的防护效价均明显高于对照组,示其具有抗辐射作用,且抗辐射效价优于茜草片组,预示茜草中多糖成分作为抗辐射药品有很好的前景。 3.3 在部队特供药品———茜草片的制备中,仅利用了茜草中的小分子活性成分(萘醌类),而其余诸如多糖等大分子化合物不能得到利用,现如把茜草多糖也研制成具有不同作用机理的抗辐射药品或保健品,不仅在作用机理上可以互补,茜草原料也可以得到充分利用,从而缓解天然药物资源的匮乏。 3.4 经过DEAE—纤维素柱层析粗分而得到的中性多糖和酸性多糖,都依然是两组成分复杂的多糖混合物,设想经过大孔吸附树脂柱或者葡聚糖 -->凝胶柱进行更加细致的层析分离,将有望得到纯净的均一多糖,而 其抗辐射作用极有可能得到增强和延伸,将对茜草中多糖成分的深入了解有重要意义。 3.5 近年来,随着物质文化生活的日益提高,涉及到电磁波的民用产品越来越多,比如电脑、、室内石材装饰等,电磁辐射对人民群众的健康影响也随之成为日常生活的危害之一,解决这一问题已经刻不容缓。所以,作为药学工,我们应该尽早借助传统中药在这方面具有剂量小、毒性低的优点,开发出适合广大人民群众使用的抗辐射药品或保健品。