HPLC法测定参桂调经丸中丹皮酚的含量

HPLC法测定参桂调经丸中丹皮酚的含量 【摘要】 目的 建立HPLC法测定参桂调经丸中丹皮酚的含量。方法 采用Agilent Hypersil-ODS-C18柱(250 mm×4.0 mm,5 μm),以甲醇-水(70?30)为流动相;检测波长 为274 nm,流速为1.0 mL/min。结果 线性范围为0.052,0.84 μg(r,0.999 9),平均回收率为 99.94%(RSD,1.63%)。结论 本法简便、灵敏、准确,可用于该制剂的质量控制。 【关键词】 参桂调经丸;丹皮酚;高效液相色谱法 Content Determination of Paeonol in Shengui Tiaojing Pill by HPLC WANG Yong-jian, WEI Xian-chun, TANG Ying Foshan Fengliaoxing Pharmaceutical Co.,Ltd., Foshan 528000, China Abstract:Objective To establish a method of HPLC for determining the Paeonol in Shengui Tiaojing Pill. Method Agilent Hypersil-ODS-C18 (250 mm×4.0 mm, 5 μm) was used, the mobile phase consisted of methanol-H2O (70?30). The flow rate was 1.0 mL/min. The detecting wave length was at 274 nm. Results The method was linear at the range of 0.052,0.84 μg for Paeonol (r=0.999 9). The average recovery was 99.94%. Conclusion The method is simple, sensitive, accurate and can be applied to the quality control of Paeonol in Shengui Tiaojing Pill. Key words:Shengui Tiaojing Pill;Paeonol;HPLC 参桂调经丸是由党参(炙)、川芎(制)、牡丹皮等多味中药制成的中药制剂,具有温经活血 之功效,临床用于月经不调、经前后虚冷腹痛、月经过多。本品标准收载于《中华人民共和 国卫生部药品标准》中药成方制剂第十四册[1],原标准中无含量测定项。本品处方中牡丹皮 具清热凉血、活血化瘀之功,为处方之主药,其主要成分为丹皮酚。笔者参考文献[2]建立了 HPLC测定其中丹皮酚含量的方法。通过方法学研究,证明本法准确、灵敏、重现性好、专 属性强,可用于本品的质量控制。 1 仪器与试药 安捷伦Agilent1100高效液相色谱仪。丹皮酚对照品(批号110708-200506,由中国药品生 物制品检定所提供);参桂调经丸(佛山冯了性药业有限公司提供,批号0405002、0111027、 0111903、0201001、0211006、0212007)。甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。 2 色谱条件 色谱柱:Agilent Hypersil-ODS-C18(250 mm×4.0 mm, 5 μm);以甲醇-水(70?30)为流 动相,流速为1.0 mL/min;温度:室温;检测波长:274 nm。理论塔板数按丹皮酚峰计算不 少于3 500。 3 方法与结果 3.1 溶液的制备 3.1.1 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1 mL含15 μg的溶液。 3.1.2 供试品溶液的制备 取重量差异下的本品,剪碎,混匀,取1 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精加70%甲醇50 mL,密塞,称定重量,超声处理(功率250 W,33 kHz)35 min,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足失重,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 3.1.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例及工艺, 制备不含牡丹皮的阴性对照样品,并按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。按上述色谱条件,将上述3种溶液各进样10 μL,采集色谱图,阴性样品在丹皮酚峰位置无干扰峰。结果见图1。 3.2 线性关系考察 精密称取丹皮酚对照品约5 mg置50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,再分别精密吸取0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL置10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,各进样10 μL,照上述色谱条件测定峰面积。以进样量(μg)对峰面积积分值进行线性回归,得回归方程:Y,9 855.792，2 066 694X,r,0.999 9,线性范围为0.052,0.84 μg。 3.3 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液l0 μL,按上述色谱条件重复进样6次,丹皮酚峰面积积分值RSD,0.87%。 3.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液(批号0405002),按上述色谱条件,分别每隔1 h进样,丹皮酚峰面积在12 h内性质稳定,RSD,0.70%。 3.5 重现性试验 取同一批供试品(批号0405002)6份,照供试品溶液制备方法制备,依法测定含量,结果RSD,1.00%。 3.6 加样回收率试验 采用加样回收法,取已知含量的供试品(批号0405002)9份,每份1 g,精密称定,其中3份分 别精密加入0.445 0 μg/mL丹皮酚对照品溶液0.5 mL,3份分别精密加入1 mL,另3份分别精密加入2 mL,混匀,其余按供试品溶液制备方法制备供试液,依法测定,计算回收率。结果见表1。表1 回收率试验结果(略) 3.7 样品测定 取不同批号的样品,按供试品溶液的制备方法制备,分别取供试品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪,各进样10 μL,用外标法计算丹皮酚含量。5批样品含量测定结果见表2。表2 参桂调经丸中丹皮酚含量测定结果(略) 4 讨论 来用流动相配制的对照品溶液,测定其紫外吸收光谱,丹皮酚的最大吸收波长为274 nm,故确定以此为HPLC的检测波长。 根据丹皮酚的溶解性,选用甲醇、50%甲醇、70%甲醇为提取溶媒,提取方法选择超声处理,结果70%甲醇为提取溶媒提取效果最理想。超声时间选用25、30、35、40 min,结果35 min提取已完全。 本试验建立的方法简便,专属性及重现性好,结果准确可靠 【参考文献】 ,,,张随学,汪爱民.重视人本管理 提高护理质量,,,. 中国教育期刊学会. (08) ,2,Stillman PL,Wang Y,Ouyang Q,et al.Teaching and assessing clinical skills:A competencebased programme in China,,,.Med Educ，1997,31(1):3340. ,3,赵洪云，张随学.人文关怀在护理操作中的作用,,,. ,26(10):10351038. ,4,马燕兰.浅谈美国医院以病人为中心服务的实践与思考,,,. 中国科教期刊学会; ,20(7):17631765. ,5,张萌物.走出人本管理的误区,,,. www.cpa1992.com，2005(1):72. ,6,张随学,刘翔，朱士俊.努力实现又好又快发展,,,.中国医学期刊学会,24(1):13. ,7,沈春玲，张随学.,,,,循环在人性化护理服务中的应用,,,.国际护理学杂志，2007,26(10):11321134. ,8,National League fr Nursing.Position statement:Transforming nursing education ,,,. ,中国工业期刊学会.2005,26(3):195. ,9,林菊英.医院管理学,,,. www.cnqkxh.com:人民卫生出版社，2003:167. ,10,段国方，张随学.推行人性化服务 树立医院新形象,,,. 中国中医药期刊学会. ,22(3):284285. ,11,AAMC. Emerging trends in the use of standardized patients,R,.Contemporary Issues in Medical Education,AAMC,1998 ,12,刘启华，王玉玲.以人为本的理念在护士长管理中的应用,,,.中华护理杂志，2006,41(1):5758. ,13,陈梅 张随学.人体管理思想在护理管理中的应用,,,. 中国高教期刊学会. ,13(1):39. ,14,董玲玲，吕淑红.人性化护理对急性心肌梗死病人急性期心理状态的影响,,,. 中国实用护理杂志，2007,(11):6061. ,15,Klass DJ.Development of a performancebased test of clinical skills for the United States Medical Licensing Examination,C,.Papepresented at the 8th Annual Ottawa International Conference, Philadelphia, PA, 1998. [6]佚名.王永健 HPLC法测定参桂调经丸中丹皮酚的含量.中国医学期刊学会