T淋巴细胞功能测定

null T淋巴细胞功能测定 T淋巴细胞功能测定 null实验实验内容小鼠摘眼球取血、分离血清 淋巴细胞转化试验教学要求教学要求掌握小鼠血清的分离 掌握淋巴细胞转化试验的基本原理及基本操作淋巴细胞转化试验 (Lymphocyte transformation test)淋巴细胞转化试验 (Lymphocyte transformation test)原理 检测方法 操作步骤 应用实验分组及材料实验分组及材料器材 酒精棉球 若干 无菌纱布块 1块/组 无菌平皿 1块/组 无菌吸头（大、中、小）4盒/room 无菌96孔培养板 1块/组 可调微量加样器 4套/room 细胞计数板 1套/组 显微镜 1台/组 EP管 若干 眼科剪、小镊子 4套/room 细胞培养箱（37℃ 5%CO2)酶标仪 离心机 2个/room 超净台 2个/room 动物及试剂 小鼠 2只/组(NS,OVA) 培养液（IMDM) 无FCS 100ml/room 培养液（IMDM)20%FCS 30ml/room ConA（2.5,5,10µg/ml) 各1.5ml/tube 白细胞计数液（2%冰醋酸）2瓶/room MTT（5mg/ml) 1.5ml/room 二甲亚砜（DMSO) 5ml/组分组： 每组四人，两人一只小鼠，其中一人胸腺，一人脾脏免疫血清分离过程免疫血清分离过程摘眼球取血RT for 2hrsRotation 3000rpm for 20minTransfer serum to a new EPDouble diffusionStore at 4℃ELISA1.5ml EP实验步骤实验步骤单细胞悬液的制备： 小鼠脱臼处死，用酒精棉球擦拭皮毛消毒。 于超净台内取出脾和胸腺组织(各1/2)，分别放入预先盛有2ml IMDM培养液的平皿内。 将3-4层纱布覆盖到组织上，用直头镊子固定组织，用弯头镊子轻压组织，将其捣碎。然后用1000µl加样器隔着纱布将细胞悬液吸出，放入1.5ml EP管中。 细胞计数： 取上述制备好的细胞悬液混匀后取出20µl，加到盛有980µl计数液的EP管中，在显微镜下计数，计数方法见后。 调细胞浓度至1×107/ml，所需量为1.5ml，设需要的细胞悬液体积为Aml,可按公式：?/ml×A=1.5×1×107 NOTE:在稀释前一定将原细胞悬液混匀，否则细胞长时间沉淀使细胞数不准。细胞计数板细胞计数板查出四个大方格的总细胞数(X) 算出每个大方格的细胞数：Y=X/4 每个大方格的体积为V=1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3=10-4ml 制备的细胞悬液的细胞浓度（/ml)=Y ×104×稀释倍数(50)4null细胞培养： 按图所示加板。 将板做好标记，在倒置显微镜下观察细胞，然后放于37℃ 5%C02培养箱中，培养48小时。 MTT掺入：（隔一天 下午2:00） 在终止培养前2小时，在显微镜下观察细胞转化情况。 每孔内加入MTT（5mg/ml) 10µl，加完后轻轻搕板，使MTT和细胞混匀。 在37℃ 5%C02培养箱中继续培养2小时，然后离心2000rpm，5min，轻轻弃去上清，（注意不要将孔底部的颗粒物弃出）。 加入100µl 二甲亚砜（DMSO)，将颗粒溶解。 （隔一天 下午4:00） 结果测定： 结果测量：用酶标仪测定光密度值：A570nm（用空白孔调零），记录结果。 结果判定： SI（刺激指数）=Con A刺激孔 A值 / 对照孔A值预习内容预习内容单克隆抗体的制备（理论P70，实验P106） 双向免疫扩散（理论P241，实验P116）null八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺 每孔加入100 µl调好的细胞悬液 1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液， 100 µl 4-6孔加入2.5 µg/ml的Con A, 100 µl 7-9孔加入5 µg/ml的Con A, 100 µl 10-12孔加入10 µg/ml的Con A, 100 µl NOTE:ConA用10%FCS-IMDM培养液配制N.S.OVAN.S.OVA加 样 方 法 返回null八个人一块培养板，两人加脾，两人加胸腺 每孔加入100 µl调好的细胞悬液 1-3孔加入10%FCS-IMDM 培养液， 100 µl 4-6孔加入2.5 µg/ml的Con A, 100 µl 7-9孔加入5 µg/ml的Con A, 100 µl 10-12孔加入10 µg/ml的Con A, 100 µl N.S.OVAN.S.OVA加 样 方 法感谢您浏览感谢您浏览需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎 fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台 需要相关的仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入