【doc】加味五子衍宗方及有效组分对记忆障碍小鼠中枢胆碱能系统的影响

【doc】加味五子衍宗方及有效组分对记忆障碍小鼠中枢胆碱能系统的影响 加味五子衍宗方及有效组分对记忆障碍小 鼠中枢胆碱能系统的影响 ChineseJournalofInformationonTCMFeb.2006Vo1.13No.2 ?实验研究? 加味五子衍宗方及有效组分对记忆障碍小鼠 中枢胆碱能系统的影响 褚松龄,王学美,富宏,刘庚信 (北京大学第一医院,北京100034) 摘要:目的研究加味五子衍宗方及有效组分对东莨菪碱所致记忆获得障碍模型动物中枢胆碱能系统的影 响.方法用氢溴酸东莨菪碱iP致小鼠记忆获得性障碍模型,Morris水迷宫实验之后,采用比色法检测小鼠脑乙 酰胆碱含量及乙酰胆碱酯酶活性的变化.结果模型组小鼠脑乙酰胆碱含量,乙酰胆碱酯酶活性均显着低于空白 对照组(P<0.01)与模型组比较,加味五子衍宗复方组,总多糖组及总黄酮组小鼠脑乙酰胆碱含量显着升高 (P<0.05,尸<0.01),其中总多糖组明显超过复方组(尸<0.05);总多糖组小鼠脑乙酰胆碱酯酶活性显着升高 (尸<0.05),其余各组有升高趋势,但无显着性差异(P>0.05).结论加味五子衍宗方及其有效组分能够通过改变 脑乙酰胆碱含量及乙酰胆碱酯酶活性提高中枢胆碱能系统功能,对东莨菪碱所引起的小鼠学习记忆障碍具有保护 作用. 关键词:五子衍宗丸;黄酮类;多糖类;东莨菪碱;学习障碍;记忆障碍;乙酰胆碱;乙酰胆碱酯酶 中图分类号#R285.5文献标识码:A文章编号:1005—5304(2006)02.0018—02 lgtlteets0fJiaweiWuziYanzongPillandIts CHUSong-ling,WANGXue—mei, FUHong(TheFirstHospitalofPekingUniversity,Beijing100034.ChinaJ Almmet:Ob|eetiveToinvestigatetheeffectsofJiaweiWuziYanzongPillanditscomponents oncentralcholinergicsysteminthemodelmicewithlearningandmemorydisordersinduced byscopolamine.Mcth~IsMiceweretreatedbyJiaweiWuziYanzongPillanditscomponentsfor 15daysandinducedbyipscopolamine.AftertheexperimentinMorriswatermaze,thecontent ofacetylcholineandtheactivityofacetylcholinesterasefrombrmnsofmiceweredetermined bycolorimetry.R?IIl缸 Significantdifferenceswereobservedbetweenmodelgroupandnaked groupthatthecontentofacetylcholineandtheactivityofacety1cholinesterasefrombrainsof modelmiceweredecreasedIP<0.01).Comparedwithmodelgroup,JiaweiWuziYanzongPilland itscomponentstreatedgroupsincreasedthecontentofacetylcholineIP<0.05,P<0.01),and thecontentofacetylcholineofflavonoidsgroupwashigherthanthecompoundgroupof JiaweiWuziYanzongPillIP<0.05),theactivityofacetylcholinest~raseofflavonoidsgroup weremarkedlyincreasedcomparedwithmodelgroupIP<0.05)andthatofothergroupsinclined tobeincreasedbutsignificantdifferenceswerenotobservedfP>0.05).ConclusionJiawei WuziYanzongPillanditscomponentscouldimprovethefunctionofcentralcholinergicsystem byincreasingthecontentofacetylcholineandtheactivityofacetylcholinesteraseandpossesses acertainpreventiveeffectsonmicewithlearningandmemorydisordersinducedbyscopolamine. Keywords:WuziyanzongPill:flavonoids;polysaccharides:scopolamine:memorydisorders: learningdisorders;acetylcholine;acety1ch0linesterase 学习记忆障碍是包括阿尔茨海默病(AD)在内的多种中枢 神经系统疾患的主要现,寻求安全有效的治疗手段目前已 成为神经学科领域临床及基础研究人员的重要任务.中医认 基金项目:北京大学985资助项目;首都医学发展科研基金 (中医药重点项目,03一II一04) 为"肾主智",肾虚髓空是智不足之根本,主张补肾益智.加 味五子衍宗方是在补肾填精的古方五子衍宗丸基础上加味而 成,主要由枸杞子,菟丝子,五味子,车前子,覆盆子以及 淫羊藿等药物组成.本研究在以往研究基础上,采用氢溴酸 东莨菪碱建立小鼠记忆获得障碍模型,探讨加味五子衍宗方 及其有效组分总黄酮,总多糖对记忆障碍小鼠脑乙酰胆碱 2006年2月第13卷第2期中国中医药信息杂志?19? (Ach)含量及乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响,探讨该方药对 中枢胆碱能神经系统的作用机制. 1材料与方法 1.1动物 雄性昆明小鼠72只,体重18~22g,购自北京维通利华 实验动物有限公司,许可证号:京动许字(2000)第004号总 049号,每日光照12h,自由进食饮水. 1_2药物及试剂 加味五子衍宗颗粒由江苏省江阴市天江药业提供,每袋 3g,含原药材12g(样品实际批号0207318){加味五子衍宗 方有效组分总多糖及总黄酮于北京大学药学院采用醇提法提 取.银杏叶提取物由上海信谊百路达药业有限公司提供,每 粒胶囊含总黄酮醇苷9.6mg,批号040303~氢溴酸东莨菪碱 由上海禾丰制药有限公司生产,规格0.3t~g/mL,批号 4A18003乙酰胆碱酯酶及总蛋白测试盒购自南京建成生物 工程研究所.其余所用试剂为国产纯. 1.3仪器 7250型分光光度计,上海分析仪器厂生产. 1.4分组和给药 72只小鼠采用随机数字法随机均分为6组,即空白对照 组,模型组,加味五子衍宗复方组,总黄酮组,总多糖组, 银杏叶对照组,每组12只.用药量为成人临床剂量,即:加 味五子衍宗复方9g/(kg?d),总多糖743mg/(kg?d),总 黄酮139mg/(kg?d),银杏叶提取物28.8mg/(kg?d),其 中总多糖组,总黄酮组用量按原复方原药材量比例折算,含 原药材量与复方组相同.诸药均以蒸馏水配成溶液 0.5mL/20g,每日1次灌胃,空白对照组和模型组均以等体 积蒸馏水灌胃,连续15d于水迷宫训练前15min,除空白 对照组外其余各组均ip氢溴酸东莨菪碱0.5mg/kg,空白对 照组ip等体积生理盐水 1.5脑乙酰胆碱含量测定 Morris水迷宫实验后,立即处死小鼠,在冰盒上迅速取左 半侧大脑称重,用冷生理盐水进行1:10(w:V)匀浆,取匀浆 液O.8mLI加蒸馏水1.4札混匀,加1.54mmol/L水杨酸毒 扁豆碱0.2mL,缓慢滴加1.84mol/L三氯乙酸0.8mL,充分 混匀,3000r/min离心15min,取上清液再离心10min (3000r/min),取完全澄清滤液用于测定,测定方法用碱性 羟胺比色法. 1.6脑乙酰胆碱酯酶含量测定 Morris水迷宫测试结束后,立即处死小鼠,取小鼠右半 ,用生理盐水按 侧大脑置于冰冷生理盐水中洗去血迹,称重 1:9(W:V)制成10%脑匀浆,4?,3000r/min离心10min, 取上清液按测试盒说明书进行乙酰胆碱酯酶活性测定.蛋白 用双缩脲方法测定. 1.7统计学方法 采用SPSSIO.0统计分析软件,单因素方差分析(One— WayANOVA),组间两两比较采用LDS方法.所有数据均以s 表示,显着性水平?=0.05或0.01. 2结果(见表1) 表1对东莨菪碱致记忆障碍小鼠脑Ach含量及AchE活 性的影响(矗s,/7-12) 注:与空白对照组比较,?aP<O.01:与模型组比较.?P<O.05, ??P(O.0l 3讨论 中医认为,肾主智,肾虚则智不足,认知障碍与肾虚髓空 关系密切.大量实验和临床研究也表明,老年.肾虚者多脑功 能下降,神经递质含量及受体数量下降Il_:流行病学研究也 发现老年性痴呆临床前期以肾虚髓空者居多,占总病例的 93.18%-2].本研究根据"寓阳于阴"的中医理论,结合临床 经验及以往研究结果,由五予衍宗丸加味淫羊藿研制了加味 五子衍宗方.该方主药枸杞予,菟丝子,淫羊藿的主要有效 成分均含有多糖类及黄酮类化合物.本研究则观察了加昧五 予衍宗方及其总多糖,总黄酮对记忆障碍小鼠脑乙酰胆碱含 量及乙酰胆碱酯酶活性的影响,旨在探讨该方药对中枢胆碱 能系统影响可能的作用机制,以及其复方与有效成分之间作 用的异同.' 研究结果显示,加味五子衍宗方组及其有效组分总黄酮 组,总多糖组的小鼠脑乙酰胆碱含量明显较模型组升高,总 多糖组乙酰胆碱酯酶活性较模型组显着升高,提示加味五子 衍宗方及其有效组分能使中枢胆碱能系统功能活跃,递质水 平上升,代谢加快.总黄酮组分与复方作用相当,而总多糖似 有优于原复方效果的趋势,此结果与本研究小鼠在Morris水 迷宫中的行为表现一致. 本研究显示了加味五子衍宗复方及有效组分能提高氢溴 酸东莨菪碱所致记忆获得障碍模型小鼠中枢胆碱能系统功能 对学习记忆障碍具有保护作用.但该方药对乙酰胆碱代谢过 程作用的具体环节,以及该方诸有效成分与学习记忆相关性 研究等尚有赖于今后进一步深入探讨.而对该方与目前报道 的其他补肾促智中药之间共同的和特有的物质基础,也有必 要进行与中医证本质相关的研究,以求为中药益智探寻可行 之路. 参考文献: ,赖世隆.补.肾益智方对老年性痴呆模型动物空间探索学习记 [1]张魁华 忆功能的改善作用[J].中草药,2002,33(12):1093—1095. [2]宋萍,王学美.轻度认知障碍中医辨证分型与自由基代谢和胆碱酯 酶的相关性研究[J].中医杂志,2005,46(4):291--293. (收稿日期:2005-06—20,编辑:华强)