十八味诃子利尿丸质量标准的研究

十八味诃子利尿丸质量标准的研究 十八味诃子利尿丸质量标准的研究 【摘 要】目的:建立十八味诃子利尿丸质量控制。方法:采用tlc法同时鉴别制剂中红花、山矾叶、小檗皮;采用hplc方法测定制剂中没食子酸的含量。色谱柱:agilent-c18柱(250mm×4.6mm，5?m)。甲醇-水-磷酸(10:90:0.01)为流动相。流速为1.0ml?min-1，波长273nm，柱温:30?.结果:没食子酸在0.412 -2.06?g范围内线性关系良好，r=0.9998，平均回收率为99.8%，rsd为0.5%(n=5).结论:该方法灵敏、准确、分离效果好，可用于该制剂的质量评价。 【关键词】tlc; 没食子酸;十八味诃子利尿丸;hplc 【中图分类号】r927.2 【文献标识码】a 【文章编号】1004—7484(2013)10—0121—02 十八味诃子利尿丸为我州柴达木高科技药业有限公司的制剂产品，由诃子、红花、豆蔻、、山矾叶、紫草茸、余甘子、小檗皮等十八味药制成，具有益肾固精，利尿。临床上用于肾病，腰肾疼痛，尿频，小便混浊，糖尿病，遗精等症。原标准收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药第一册，其检验项目为丸剂的常规项，为了进一步控制制剂质量，本文对该制的质量控制方法进行了实验研究，建立了处方中红花、山矾叶、小檗皮的薄层鉴别方法，同时采用hplc法对诃子中没食子酸的含量测定研究，取得了良好的效果。 1仪器与试药 美国agilent1260高效液相色谱仪，美国agilent1260紫外检测器，agilent1260汉字色谱工作站，甲醇为色谱纯，水为新制重蒸馏水，红花对照药材(中国生物制品检定所，批号:120907-201010);小檗皮对照药材(中国生物制品检定所，批号:121001-201003);盐酸小檗碱对照品(中国生物制品检定所，批号:110731-200911)没食子酸对照品(中国生物制品检定所，批号:110831-200803)，十八味诃子利尿丸(柴达木高科技药业有限公司，批号:20130405，20121202，20111001)。 2方法与结果 2.1薄层色谱 2.1.1红花的薄层鉴别【1】 取本品细粉2g，，研细，加甲醇15ml，加热回流30分钟，冷却，滤过，滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取红花对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录? b)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(15:3:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品均无干扰。结果见图1 1 2 3 4 5 6 1.阴性样品 2-4.样品 5-6.红花对照品 图1 红花tcl色谱图 2.1.2山矾叶的薄层鉴别【2】 取本品细粉2g，，研细，加甲醇15ml，加热回流30分钟，冷却，滤过，滤液，浓缩至5ml，作为供试品溶液。另取山矾叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录? b)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚(60-90?)-甲酸乙酯-甲酸(5:5:1)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%硫酸乙醇溶液，在105?加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品均无干扰。结果见图2 1 2 3 4 5 6 7 1-3.样品 4-5.山矾叶对照药材 6-7.阴性样品 图2 山矾叶tcl色谱图 2.1.3小檗皮的薄层鉴别【3】 取本品细粉7.5g，加水30ml、盐酸2ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液加氯仿振摇提取2次，每次20ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。另取小檗皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典》2010年版一部附录? b)试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠硅胶g薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性样品均无干扰。结果见图3 1 2 3 4 5 6 7 8 1.阴性样品 2-4.样品 5-6小檗皮对照药材 7-8.小檗碱对照品 图3小檗皮tcl色谱图 2.2含量测定 2.2.1色谱条件[3] 色谱柱:agilent-c18柱(250mm×4.6mm，5?m)。流动相:甲醇-水-磷酸(10:90:0.01)为流动相。流速为1.0ml?min-1，检测波长273nm，柱温:30?.理论板数按没食子酸峰计算不得少于2500。 2.2.2线性关系考察[4] 2.2.2.1对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品9.15mg(含c7h6o5为90.1%计)，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密吸取1.0ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，为对照品溶液。 2.2.2.2 线性关系测定 精密吸取贮备液0.5，1，1.5，2.0，2.5ml置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10?l进样，按上述色谱条件测定峰面积，以没食子酸峰面积积分值(x)为横坐标，以进样量(?g)(y)为纵坐标，经线性回归，回归方程为y=2.05×106x+7.86×103，r=0.9998，在0.412-2.06?g范围内呈良好的线性关系。 2.2.3 精密度试验 取对照品溶液，重复进样5次，没食子酸峰面积均值为2524842.6，rsd为0.35%，精密度良好。 2.2.4重复性试验 精密称取同批样品5份，按样品含量测定方法测定含量为4.04mg?g-1，rsd为0.9%，明方法重复性良好。 2.2.5稳定性试验 取同一批样品溶液，按上述色谱条件，分别在放置0，2，4，6，8，10，12h后，依法测定没食子酸峰面积均值为176321，rsd为1.4%，说明样品溶液12h内稳定性良好。 2.2.6回收率试验 精密称取已知含量112.4?g?ml-1的样品5份，分别精密加入对照品溶液(41.2?g?ml-1)1ml，按样品溶液制备方法，制备供试液，照样品含量测定方法测定，结果见表1 2.2.7 样品溶液制备 取本品适量，研细取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液转移至25ml量瓶中，用甲醇洗涤残渣与滤纸，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取滤液，即得。 2.2.8 阴性对照溶液的制备 除诃子外，按处方比例称取其他各药材，按工艺制成不含诃子制剂，照供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液，即得。 2.2.9 专属性考察 分别精密吸取对照品溶液，样品溶液及阴性对照溶液各10?l注入色谱仪，色谱图，见图4。 从图1可见，阴性对照品溶液对测定无干扰。 2.2.10样品测定 取3个批号样品，按样品溶液的制备方法制备，同法制备对照品溶液，分别进样10?l，记录色谱图，按外标法计算，结果见表2。 诃子为方中君药，主要含没食子酸，故以没食子酸为指标成分进行定量测定。 b) 流动相的选择 我们采用不同的流动相乙腈:水(13:87)，乙腈:0.1%磷酸溶液(14:86)，甲醇-水-磷酸(10:90:0.01)，结果表明采用流动相甲醇-水-磷酸(10:90:0.01)的色谱图基线较稳。 c) 提取溶剂的选择 我们采用不同的提取溶剂水，甲醇，稀乙醇，结果表明采用甲醇的色谱图杂质峰比较少，分离度较好。 参考文献: [1] 中国药典〔s〕.2010年版.一部.141 [2] 谭少云，范宜涛，叶放，杨放，陈溪，邹瑜.更年康胶囊质量标准研究[j].中国药品标准，2009，6(6):417-421. [3] 国家药品中药标准(内科 肾系分册)[s].161 [4] 欧阳春华.芪丹颗粒的质量标准[j].中国药师，2011，7(12):980-982