银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血的保护作用.doc

银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血的保护作用.doc 银杏叶提取物对大鼠局灶性脑缺血的保护 作用 【摘要】 目的观察银杏叶提取物(GBE)对大鼠局灶性脑缺血的保 护作用，并探讨其作用机制。方法采用线栓阻断大鼠大脑中动脉建 立局灶性脑缺血模型，观察GBE对模型大鼠神经损伤症状、脑梗塞 范围及血清SOD活性、MDA含量的影响。结果GBE能显著改善局 灶性脑缺血大鼠神经症状，降低脑梗塞范围及血清MDA含量，提 高血清SOD活性。结论 GBE对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用， 其机制可能与抗氧化作用有关。 【关键词】 银杏叶提取物; 大鼠; 局灶性脑缺血; 梗塞范 围; 脂质过氧化 Effect of Ginkgo biloba Extract on Cerebral Ischemia-reperfusion Injury in Rats WANG Guang ming Guangdong Chemical and Pharmaceutical Professional College,Guangzhou 510520,China Abstract:ObjectiveTo observe the effect of Ginkgo biloba extract(GBE) on cerebral ischemia injury in rats and explore its mechanism.MethodsRat cerebral ischemia injury model was induced by middle cerebral artery occlusion, the nerve injury symptoms were evaluated ,the infarction area and the level of SOD and MDA in serum wrer determined.ResultsGBE could improve the nerve injury symptoms,reduce the infraction area of brain and the level of MDA,increase the activity of SOD.ConclusionGBE has protective effect on cerebral ischemia injury in rats and its mechanism may be associated with antioxidant activity. Key words:Ginkgo biloba; Rats; Cerebral ischemia injury; Infarction area; Lipid preoxidation 银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba的叶，性味苦、涩、平， 主要功能为活血化淤、通络活络。当前，其提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)被广泛用于治疗心脑血管疾病及其后遗症等。研究表 明，GBE的主要活性成分为黄酮苷和萜内酯,1,。本研究采用线 栓阻断大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型，观察GBE对大鼠局 灶性脑缺血的保护作用，并初步探讨其作用机制，为临床防治脑血 管疾病提供参考。 1 1.1 动物雄性SD大鼠，体重(200?20)g，由广东省医学科 学研究所提供。实验前适应性饲养1周。 1.2 药品与试剂银杏叶提取物(商品名:天宝宁片)，浙江康 恩贝集团制药有限公司，规格40 mg(其中含银杏总黄酮苷9.8 mg)，批号030124。尼莫地平，天津市中央药业有限公司生产，批号031220。2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)，纯，上海医药集团上海化学试剂公司。SOD，MDA试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号分别为20040128，20040120。 1.3 仪器电子分析天平，上海精科分析仪器厂。LXJ-IIB低速大容量离心机，上海安亭科学仪器厂。754紫外可见分光光度计，上海分析仪器厂。 2 方法 2.1 动物分组及给药取大鼠60只，随机分为6组，即GBE高、中、低剂量组(剂量分别为48，24，12 mg/kg)，尼莫地平组(剂量为2 mg/kg)，模型对照组和假手术组，每组10只。各组分别于造模前给药，1次/d，共给药4次，给药容量均为10 ml/kg。模型对照组和假手术组给等容量的生理盐水。 2.2 模型制作方法末次给药后1 h，参照文献方法,2，3,，用10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰卧固定，常规消毒皮肤，颈部正中切开，钝性分离右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉。沿颈内动脉向下分离出翼腭动脉，并电凝。用动脉夹夹闭颈总动脉，于颈内动脉上近颈总动脉向下分离出翼动脉，并电凝。用动脉夹夹闭颈总动脉，于颈内动脉上近颈总动脉分叉处剪一切口，将一鱼线(直径约0.30 mm)沿颈内动脉缓慢插入至大脑中动脉口，略感阻力时停止，插入长度约(18.0?0.5)mm，结扎固定鱼线。结扎颈内动脉近心端，取下动脉夹，恢复颈外动脉血流。假手术组除不插鱼线阻断大脑中动脉外，其余操作同手术组。 2.3 观察指标 2.3.1 神经症状评分参照文献方法,4，5,，按受损程度拟定神经症状评分等级。无神经损伤症状为?级;不能完全伸展左侧前爪为?级;不能完全伸展左侧前爪，向左侧转圈为?级;不能完全伸展左侧前爪，向左侧倾倒为?级;不能自发行走，意识丧失为?级。按上述，于造模后24 h，采用单盲法对各组大鼠进行神经症状评分。 2.3.2 血清SOD活性及MDA含量测定造模后24 h ，水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉取血，离心分离血清，按试剂盒操作方法，比色法测定血清SOD活性及MDA含量。 2.3.3 脑梗塞范围测定断头取脑，去除嗅味、小脑，生理盐水洗净，滤纸吸尽水分，将大脑沿冠状面切成厚约5 mm脑片，置1%TTC磷酸盐缓冲液中37?避光温孵10 min，洗去染色液，再用10%中性甲醛溶液固定24 h，取出称总染重，然后切取梗塞区称 重，计算梗塞范围。梗塞范围=梗塞区重×100%/总染重。 2.4 统计分析结果采用?s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，数据统计采用SPSS13.0FOR Windows软件处理。等级资料统计采用Ridit检验。3 结果 3.1 对神经损伤症状的影响由表1可知，给药后24 h，GBE高剂量组大鼠神经损伤症状显著改善，与模型对照组比较有显著性差异(P,0.05)。表1 对神经损伤症状的影响(略) 3.2 对梗塞范围的影响由表2可知，GBE高、中剂量组大鼠脑梗塞重量显著降低，与模型对照组比较有显著性差异。GBE高剂量组大鼠脑梗塞范围亦显著降低，与模型对照组比较有显著性差异。GBE中、低剂量组大鼠脑梗塞范围有下降趋势，但与模型对照组比较无统计学差异(P,0.05)。表2 对梗塞重量及梗塞范围的结果(略) 3.3 对血清SOD活性及MDA含量的影响由表3可知，GBE高剂量组大鼠血清SOD活性显著升高，和模型组比较有显著性差异(P,0.05)。GBE高、中剂量组大鼠血清MDA含量明显下降，与模型对照组比较有显著性差异(P,0.05)。表3 对血清SOD活性及MDA含量的影响(略) 4 讨论 缺血性脑血管疾病以其高发病率、高致残率和高死亡率而严重危害人们的健康。脑缺血可导致严重的迟发性神经元损伤，影响患者的预后和功能恢复。临床上脑缺血最多见于大脑中动脉，其供血区脑组织由于缺血缺氧、能量代谢耗竭而导致缺血性坏死，相应支配区出现运动、感觉和语言障碍，学习记忆能力减退。大鼠大脑中动脉线栓法脑缺血模型操作简便，无需开颅，制备部位较恒定，脑梗塞范围差异较小，被广泛用于研究药物脑保护作用,6,。因此，本实验采用大鼠大脑中动脉线栓模型观察GBE对脑缺血的保护作用。 正常生物体内自由基生成与清除处于动态平衡，脑缺血时，大量的自由基生成，使脑内脂质过氧化作用加强，导致细胞及细胞屏障损害，神经元坏死或凋亡，引起和加重缺血脑组织水肿。SOD为抗氧化酶，是体内主要的自由基清除剂，能催化超氧自由基发生歧化反应，生成过氧化氢和氧，而超氧自由基的产生是其它自由基产生和增殖的关键步骤，SOD活性可以间接反映机体清除自由基的能力。MDA是脂质过氧化反应的最终产物，反映组织中自由基含量及细胞的损伤程度,7,。因此，测定这些物质的活性或含量变化可反映药物抗脑缺血损伤作用的强弱。 实验结果表明，GBE能显著改善局灶性脑缺血大鼠神经症状，降低脑组织梗塞范围及血清MDA含量，增强血清SOD活性，改善缺 血脑组织病理变化，对局灶性脑缺血损伤具有保护作用。 【