【doc】用^3H—HRP研究支配牙齿三叉神经节细胞的定位

【doc】用^3H—HRP研究支配牙齿三叉神经节细胞的定位 用^3H—HRP研究支配牙齿三叉神经节细 胞的定位 北窜医科大学 JOURNALOFBEI儿N0MEDICALUNLVERMTYVo!z3No.2l吣l 用.H—HRP研究支配牙齿 三叉神经节细胞的定位' 口腔医学院牙=体牙=髓科王莉梅王满思 北京医科大学 基础医学腕细胞生物学教研室刘鼎新基础医学腕细胞生物学教研室刘鼎新 [提要]用.H--HRP自显影术研究了大鼠上,下颌第一磨牙=感觉神经元在三叉神经节内的解剖学 定位.结果明.这些神经元在三叉神经节内按其所支配的牙齿不同虽有一定分布范围,但也存在明星 交错与重迭现象.连一研究结果为牙=振性牵涉痛发生的机理,提供了解剖学依据. 关键词H—HRP;三叉神经节{放射自显影术;磨牙=;牙=漂性牵涉病 辣根过氧化物酶(horseradishperioxidase 以F简称HRP)是一种糖蛋白,它既可被神 经末梢摄取井通过神经元的轴浆流逆向运至胞 体,也可被神经细胞摄取顺向运至末梢,这取 决于注射部位.HRP可以通过酶组化法而显 色.所以,用HRP研究神经纤维的联系,在国 内外均很广泛 用.H--HRP示踪,自显影显示神经纤维 的联系,不但有着更高的灵敏度,精确度,而 且避免了困显色方法的不同而造成结果上的不 完全一致.这一方法在国外已开始使用. 牵涉蒜是牙髓病的』临床常见症状,患者自 己常难确定患牙,有时主诉为患牙的邻牙,甚 至为对颌牙,因而常易造成误诊或误治. 关于牙=齿牵涉蒜的机理,至今不明.所以, 本研究选用.H--HRP自显影术探讨上,下颁 第一磨牙感觉神经元在三叉神经节中的投射与 定位. 材料与方法 大鼠4只,雄性,体重120~130g.用 1戍巴比妥钠(0.4ml/100g体重)经腹腔 注射麻醉.将动物固定后,分别自秸面将太鼠 左上和右下第一磨牙开髓.先用1/2小圆钻 磨击牙釉质和大部分牙本质,直至透过薄层 本质可见红色牙髓为止.然后再用2手用扩 大器将薄层牙本质钻透,用无菌小棉球吸净血 液,用激量注射装置和玻璃微管(尖端直径为 30,60m)将1,2l.HHRP(比活度7 mCi/ml,中国原子能科学研究院标记)缓慢 注入髓室,5分钟后,用氢氧化钙糊荆盖髓, 羧酸水门汀垫底,银汞充填开髓孔. 术后动物禁食,饮葡萄糖生理盐水,存活 72小时后,再用上述方法麻醉,生理盐水番I 10甲醛液心脏插管灌流固定.取左,右侧三 叉神经节和磨牙(包括颔骨)放人1O甲醛 液内固定3天.最后制成6,7lam石蜡切片, 每5张取1,2张,用国产核一4乳胶浸膜法 制备自显影,在实验抽样监视下曝光5,8个 月,经显影,定影和HE染色后,高倍镜下观 察标记神经元在三叉神经节内的分布. 为了排除假象和本底对结果分析的影响, 取其中一只动物,经上述处理但不给示踪剂, 作为冷对照. 结果 大鼠的三叉神经节位于颅底,为长扁平状 .奉文主要曾在1999年5月中国解剖学台北窜舟 会. 圈1大鼠右侧三叉神经示意图 (图1),与三条主要神经干(眼神经,上颔神 经和下龋神经)相联.其中眼神经和上颌神经 融合为一条神经干即眼一上领神经,向嘴侧延 伸.下领神经自神经节向外侧方分枝延伸后出 颅.在眼一上颌神经与下领神经分枝处附近, 神经束梢膨大即为三叉神经节.光镜下可见其 中有许多呈巢或条索状排列的神经元. 高倍镜下,在给示踪剂动物的三叉神经节 切片中可见标记的神经细胞这些细胞可是单 个的(图2),也可是2,3个聚集在一起(图 3). 观察结果表明,支配大鼠上,下领第一磨 蕾5大鼠右舅曼夏种经节示意图 ^.支配上颌第一磨牙种经元主要分布区l B.支配F镊第一磨牙种经元主要分布区, c.主要交X分布区I D.傲在分布的标记神经元. 牙的神经元多位于神经千分叉处附近.主管上 领第一磨牙:的神经元多分布于眼一上颤神经分 枝的根部外侧区和尾侧区主管下领第一磨牙: 的神经元多分布于分叉处和分叉处以下神经节 的外侧方.丽者的分布区存在着明显的交错与 重迭.此外,还有部分神经元散在地分布于距 主要分布区较远的区域(图4,5). 在注射示踪剂的鼠牙:切片中,可见牙:髓组 织中有少量出血和牙:本质碎片,而未见牙:髓组 织广瑟的损害和示踪剂泄露污染牙周组织等现 象. 在对照组动物的三叉神经节切片中,未见 标记细胞. 讨论 关于牙:源性牵涉痛发生的解剖学机理,国 内尚未见研究报道.国外有关支配磨牙感觉的 神经元在三叉神经节内的定位资料也很少. 虽然Aker等人曾对支配大鼠下颌第一磨牙: 的神经元在三叉神经书内的分布作了调查,得 出这些神经细胞散在分布于整个下颔神经元分 布区内的结论,并推测支配下领其它磨牙的神 经元的分布也是散在的和无固定区域的,但没 有对支配不同领骨上的不同磨牙的神经元在三 叉神经节的分布进行研究. 本研究将支配大鼠上,下颤第一磨牙:的神 经元在三叉神经节中的分布进行对比观察.结 果表明,这些神经细胞在三叉神经节内,按其 所支配的牙齿不同虽有一定的分布范围,但也 存在着明显交错与重迭现象,有些神经元甚至 散在地分布于主要分布区以外较远的区域.虽 然用这一方法还不能直接证明在三叉神经节内 存在一个神经元主管2个或多个牙:齿感觉的现 象,但根据支配不同牙:齿的神经元在三叉神经 节中的这种重迭和无界限的分布特点,可以推 断有这种可能性存在.这一研究对进一步研究 牙:源性牵涉痛发生的解剖学机理是有意义的. H--HRP自显影术用于神经解剖示踪研 究,国内尚未见报道.本实验采用国内标记的 HRP同样获得成功,结果表明,迭一方法能培 出清晰而准确的图像,然而曝光时间较长,尚 有待进一步改进. 参考文献 1.ArvidsgOllJ.LocationofeattrigeminalganglJon cellsannervalJngdentalpuJpofupperandlower caninesstudledbyretrogfadelransportofhorse— radishBrainRes1975l99:i35. 2.ChlegoDJJr.elalH—HRPanalysisofthenerve supplytopdmateteeth.JDentRes198DI59 75B. ?lll? 3.KerrFWL-etalSomatotoplcorganJzationof trigeminalganglionneuyon~.ArehNeurologY1943; 11:593. 4.GreggTM.DixonAD.Somatotoplcorganizatlon ofthetrigeminalganglionintheratArchOral Biol1973}13'437. 5.AkerFD.RelthEJlnnervatioftofratmolarteeth: 1.DistributionofneuYoftaleellbodiesinthe trigeminalganglionfromamandibularmolartoo- th.AnatRe~1931I231:23. (本文图2,3,4见插页第7页) THELOCALIZATIONOFTRIGEMINALGANGLION CELLSINNERVATINGUPPERANDLOWERMOLARS INRATBY.H—HRPAUTORADIOGRAPHY DepartmentofOperativeDentistryandEndodontics,SchoolofStomatology WangLimei,WangManen DepartmentofCellBiology,SchoolofBasicMedical,sciences LiuDingxin Theprimarysensoryneuronsinnervatingtheupperandlowerfirstmolarsoftheratwerestudied by'H—HRPautoradiographywithrespecttotheirlocalizationinthetrigeminalganglion. Theresultsshowedlabelledneuronswerefoundonlyintheganglionipsilateraltotheinjection; thelabelledneuronsinnervatingupperandlowerfirstmolarsmightbedividedintosomatotoplcareas. however.theyintermingledandoverlappedintheganglion. Thepresentfindingswouldseemtobeofvalueforstudingthemechanismsofodontogcnious referredpain. Keywords.H— HRPlTrigcminalganglionsAutoradiography~MolarOdontogeniousreferredpain