茵陈等中草药组方对鲫鱼肝脏转氨酶的影响研究

茵陈等中草药组方对鲫鱼肝脏转氨酶的影响研究 茵陈等中草药组方对鲫鱼肝脏转氨酶的影 响研究 ? J?试验研究 3加强畜牧业防疫体系建设, 改革畜牧业经营管理体制,建立 现代畜牧业体制新框架 改革畜牧业经营管理体制,建立 现代畜牧业体制新框架,目前,畜牧业 经营方式为一家一户的分散家庭经 营,既无法实现与市场的有效对接,更 谈不上参与国际市场的激烈竞争.因 此,建立起适合畜牧业发展水平的体 制框架,已势在必行.一是加强畜牧业 服务中介组织建设.要引导农民按照 市场经济原则,通过利益机制联合起 来,成立多形式的合作经济组织,形成 优势互补,分工合作,互惠互利的生产 经营格局,达到扩大规模降低成本,抵 御风险的目的.二是打破区域界限,所 有制界限,行业界限,按产业化经营体 系建立全市性的专业协会,重点配合 好专业协会,为农民和农业企业提供 市场信息,政策法则咨询等方面的服 务,进行反倾销的调查和应诉,制定行 业自律规范,达到组织农民,保护农民 的目的.三是改革政府对畜牧业的管 理体制,彻底打破部门管理分割,产 前,产中,产后分离的局面,建立政府 对市场的监控预警系统,使出入境检 验检疫,动物防疫监督,畜产品加工等 多部门对畜禽产品的进出口情况及时 交流分析,提高政府调控能力. 《中国兽医寄生虫病》(双月刊) 2007年征订启事 《中国兽医寄生虫病)是全国唯一 的一奉兽医寄生虫和寄生虫病学的专 业杂志.1993年创刊以来,深受广大读 者欢迎.为加快科技信息的交流,缩短 稿件刊出周期,本刊自2Oo7年起由季 刊改为舣月刊,奇数月(1,3,5,7,9.11 月)发行,每期5元,全年六期3O元(含 邮费),大l6开,64页. 本刊2007年度征汀工作现已开 始,邮发代号4—748,全国各地邮电局 (所)收订.如错过订期,町卣接向本刊 编辑部订阅.联系人:章力勇.地址:上 海市石龙路345弄3号.邮编:200232. 电话:021—54081080. 本刊尚有1993年以来各期余刊, 欢迎选购. '中国兽医寄生虫病>编辑部 茵陈等中草药组方 对鲫鱼肝脏转氨酶的影响研究 杨加琼,陈鹏飞:杨德强邹红 (1.眉山职业技术学院应用生物系,四川眉山612100; 2.西南农业大学水产学院荣昌校区) 中图分类号:$816.75文献标识码:A文章编号:1008-041412006)10(下)一0014_03 摘要在饲料中添加组方中草药,对鲫鱼的自然鱼体和利用喹乙醇诱 导其肝受损后的鱼体进行试验,并通过测定投喂前后血清生化指标中转氨酶浓 度变化情况,结果表明该中草药组方对自然鱼体的肝脏具有保护作用,同时对 喹乙醇诱导的肝损伤有一定的恢复和治疗作用. 关键词中草药组方肝损伤转氨酶浓度 鱼类生活在水中,因环境因素或 人工投喂的饲料保管不善出现脂肪氧 化,蛋白质变性,淀粉发霉以及长期在 饲料中添加抗菌素和锌,铜等矿物元 素,均会引起急性,亚急性或慢性肝 病.鱼类患肝病后,轻者食欲减退,生 长缓慢,重者死亡率可达50%-60%llJ. 在设法解决鱼类肝病时,笔者考虑到 鱼类的生长安全和鱼类作为食品对人 类的影响,因此,选择具有天然,高效, 毒副作用小,抗药性不显着,资源丰富 以及性能多样等优点的中草药作为添 加剂作为试验材料探索解决鱼类的肝 病等问. 据报道,黄连,大黄及花粉都对鲤 鱼的非特异性免疫功能具有增强作 用121;投喂含1%大蒜添加剂的饵料, 对鲆鱼的厌食症和肝病很有效果,且 减少了鱼的死亡并有增重效果口0;某些 中药制剂能激发中国对虾免疫系统的 功能,诱导血凝素活力,溶菌活力升 高,提高机体的非特异性体液免疫功 能141.但中草药对于鱼类肝脏的保护 和治疗作用却很少见报道,本试验旨 在探索中草药组方对养殖鱼类肝功能 的影响. 1材料与方法 1.1试验对象 由西农水产学院(荣昌校区)实 收稿日期"2006—09—19 习渔场提供的鲫鱼,规格为:(30+5)g, 尾. 1.2药品 (1)喹乙醇:湖北省龙感湖东方兽 药厂生产(倍育偌);(2)茵陈汤组方: 由茵陈,大黄,黄芩,黄连,生地等中草 药组成阁. 1.3实验仪器 日立7o2O全自动生化分析仪,美 国AVL9130电解质分析仪,电子天平 等. 1.4试验方法 中草药根据组方及添加浓度粉碎 后,按试验浓度与饲料粉料充分 搅拌混合待用. 试验在(2.3x1.0x0.8)m水泥池内 进行微流水养殖,水深0.4m.试验鱼 暂养1周,待鱼全部适应环境,正常摄 食后开始试验.试验共分3个阶段,各 组设1个重复,试验数据取平均值.分 组情况分别见表1,表2. 第一阶段(对自然鱼体的保健试 验):选择自然鱼体按照表1的分组情 况进行投喂,饲养10d为一个疗程, 进行血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草 转氨酶(GOT)浓度的测定,并与对照 组进行比较,由此判断中药药组方对 肝功能转氨酶浓度的影响情况. 第二阶段(对自然鱼体的中毒试 验):另选用800尾相同规格的鲫鱼进 行中毒试验,即在试验鱼体饲料中按 照200mg,kg添加喹乙醇,连续投喂 试验研究?15? 10d后随机抽取数尾试验鱼测定血清 转氨酶的浓度,以确定是否中毒. 第三阶段(对中毒鱼体的治疗试 验):按照表2的分组情况将已经喹乙 醇中毒的鱼体随机分组,并按此表投 喂中草药组方,1个周期(10d)和2个 周期(20d)后分别进行血清转氨酶浓 度的测定,分别与自然痊愈组鱼体和 对照组鱼体血清转氨酶浓度进行比 较,由此判断由喹乙醇导致的肝损伤 在中草药组方治疗下的恢复情况. 2结果与分析 2.1关于血清转氨酶 血清生化指标谷丙转氨酶(GPI1) 目前仍被认为是反映肝损伤的敏感指 标,肝损伤较轻时,仅限细胞膜的通透 性增加,细胞浆内的GPrr释放人血, 在肝细胞受损严重时,线粒体里的 GOT方释放人血I6l.本试验结果以GPT 浓度变化为主,结合参照GOT的浓度 变化,来确定两组方的疗效. 2.2对自然鱼体的中毒试验 表1自然鱼体分组表 喹乙醇中毒后在临床上主要表现 为抗应激能力显着降低,一旦受到应激 因子刺激后,很快发生全身体表充血, 出血,呈现典型的"应激性出血症".由 于喹乙醇的代谢主要在肝脏进行,喹 乙醇造成肝脏的损伤,肝细胞变性,坏 死必然造成肝功能障碍,使喹乙醇在 鱼体内蓄积,又加重了毒性反应.本试 验中选用喹乙醇诱导肝损伤,主要是 考虑到生产中喹乙醇使用频繁,中毒 现象比较普遍,使试验结果能服务于 生产养殖. 本试验在试验鱼体饲料中按照 200mkg添加喹乙醇,投喂添加喹乙 醇饲料5d后,各试验组的试验鱼体 的胸鳍和腹鳍基部开始克血发红,肛 门轻度红肿;连续投喂l0d后鱼鳝条 基部的充血发红更加明显,体表粘液 容易脱落,耐密集能力和抗应急能力 明显下降,随机抽取数尾试验鱼测定 血清转氨酶的浓度(见表3),试验鱼 血清谷丙转氨酶的浓度(GPrr)和谷草 mkg 表3投喂喹乙醇和投喂中药组方不同浓度后鱼体血液生化指标IU/L 转氨酶(GOT)都明显的提高.此时解 剖观察,可见肝脏肿大,失去弹性,失 去血色,胆囊异常扩张,胆汁充盈,肠 壁变薄.这与报道的养殖生产中出现 的鱼类喹乙醇中毒的症状基本一致. 2.3对自然鱼体的保肝效果 第一阶段试验过程中,中草药组 方以不同浓度拌饵投喂试验鱼体,鱼 体血清中谷丙转氨酶(GPrr)和谷草转 氨酶(GOT)都不同程度地得到了降低 (见表4),并且随中草药组方在饲料 中添加浓度的升高,鱼体血清中谷丙 转氨酶(GPrr)和谷草转氨酶(GOT)的 下降幅度也随之增大,可以明显的看 出中药组方具有保肝的功效.各试验 组与对照组均未见异常情况,只有高 剂量试验组鱼体摄食量略低于中,低 剂量和对照组试验鱼体的摄食量,这 可能与饲料中添加的中药气味对试验 鱼体有一定影响的缘故. 2.4中草药的保肝效果 第三阶段试验的中毒鱼体在投喂 中药1个周期(10d)后,体表及鳍条 出血症状开始缓解.解剖观察,胆汁颜 色变深.2个周期(20d)后,体表及鳍 条出血症状基本消失.解剖观察,肝脏 颜色和弹性基本恢复正常. 同时,对各试验组试验鱼体进行 血清转氨酶测定(见表3),与对照组 相比,各试验组鱼体的血清转氨酶都 有不同程度的降低(图l),结果表 明中草药组方对喹乙醇中毒鱼体的肝 损伤有一定的恢复和治疗作用.并且 以l00mg,kg和200mg,kg时疗效显 着,但l00mg,kg和200mg,kg之间看 不出有差异. 现代医学证明,茵陈篙中一些黄 酮和香豆素成份有抗四氯化碳或半乳 糖诱发大鼠肝细胞毒性的作用,其作 用强度依次为茵陈色原酮,6,7-二甲 氧基得豆精,茵陈篙黄酮,槲皮素,异 鼠李糖,其中6,7-二甲氧基香豆精对 肝细胞损害呈强抑制作用;对四氯化 碳中毒损害肝脏的大鼠给予茵陈煎 剂,能防止肝细胞坏死,促进肝细胞再 生,降低血清谷丙转氨酶."茵陈合剂" 对四氯化碳导致的鸡化学性肝损害具 有防治作用,能减轻肝坏死和肝肿胀, 从而降低血清转氨酶,升高血清总蛋 白和白蛋白I.另有试验表明栀子提取 昭 m … m 天))天天 醇m加 髓蛆 投投投畎 ? 16?试验研究 物灌胃能使结扎总胆受大鼠升高的天 冬氨环转氨酶活力恢复正常,其有效 成份桷子甙能显着降低血清胆红素含 量,GFF和GOT活性,肘肝细胞有一 定的保护作用II.本试验使用的中草药 组方对喹乙醇中毒诱发的鲫鱼肝损伤 具有治疗恢复作用. 2.5药饵制备 由于水产动物生存环境的特殊 性,其摄食受天气,温度,水体环境等 的影响较大.另外,中药药饵的制备工 艺较为困难,粉剂在水体中损失较大, 煎制成水剂以后对饲料的适口性影响 较大,而提取中药有效成分的较 为复杂,以后在药饵的制备工艺上有 待进一步的研究. 3小结 3.1在饲料中添加中草药组方对自 然鱼体具有保肝的功效,并且随添加 浓度的升高,鱼体血清中谷丙转氨酶 (GPrr)和谷草转氨酶(GOT)的下降幅 度也随之增大. 3.2中草药组方对因喹乙醇中毒而 造成的鱼体肝损伤有一定的恢复和治 疗作用. 参考文献 lll姜礼燔,鱼类肝脏疾病及防治研究,水产 科技情报,l997.24(4):188-192 l2l蔡中华.四种中药对鲤鱼非特异性免疫 功能的影响天津农学院,1998,5(2) l3l王荣华,鱼用中草药添加荆.兽药与饲料 添加荆,1998.3(2):27-29 I4l罗日祥.中药活性制荆对中国对虾免疫 活性物的诱导作用,海洋与湖沼,1997,28 (6):573-578 l5J林义明.白朝勇.中兽医方刺学.成都:成 都科技大学出版社,l995 l6l曹宜.董自波,菌陈蒿汤对小鼠肝损伤 的保护作用,浙江中医学院,2002,26 (001):413 l7l汪开敏.耿毅.鲤鱼急性喹乙醇中毒的 病理学研究.畜牧兽医,2002,33(6): 565,569 『8l梁俊荣.扬玉成.刘海滨.茵陈舍荆对四 氯化碳所致鸡肝损害的防治试验.中兽医 学杂志,1998(2):2-4 I9】朱路佳.韩蓉.顾振纶.茵栀黄注射液对 四氯化碳和硫代乙酰胺致小鼠肝脏损伤的 保护作用,中国野生植物资源,2002,21(6): 64-67 核糖体蛋白S5(RPS5)基因 对羊驼毛色调控的研究 李鹏飞董常生范瑞文 (山西农业大学食品学院,山西 白瑞朱芷葳杜海燕 太谷030801) 中图分类号:S8l3'3文献标识码:A文章编号:1008-0414(2006)10(下)一0016—03 摘要本研究利用southernblotting技术从羊驼皮肤cDNA文库中筛选 出核糖体蛋白S5(Ribostmtalproteins5,R.pss)基因,测序后利用生物信息学方法 对该基因进行了相关分析.经分析发现羊驼RPS5基因序列中存在CCGG位 点,推测羊驼RPS5基因在此位点发生甲基化.RPS5基因通过调节处于不同凋 亡方式的黑色素细胞,保证黑色素数量的产生,从而对羊驼毛色产生调控作用. 关键词羊驼RPS5基因southernblotting黑色素 StudyofeffectofribosomalproteinS5(RPS5) geneoncolourofAlpacafleece LIPeng-fei,DONGChang—sheng,FANRui-wen,BAIRui, ZHUZhi-weiDUHai-yan (CollegeoffoodofShsnxiAculturalUniversity,TaiGuShanxi,030801, China) Abstract:UseingsouthernblottingribosomalproteinS5genewasscreenedfrom thealpacaskinDNAlibrary(RibosomalproteinS5,RPSS),Thegenewassequenced andthenweanalylizedthebioinfortnaticsofRPS5,Ithadfoundoutthatthereisa CCGGsite,andweconferthatribosomalproteinS5weremethylatedatthissit(Ribo- somalproteins5controlthosemelanincellsthatindifferentapoptosisperiod.80asto ensurethequantityofthemelanincellsandcontroltheeolourofAlpacafleece, Keywards:Alpaca;RPS5gene;Southemblotting;melanin 羊驼(alpaca)原产于南美洲的安 第斯山脉,是一种毛用动物,具有很高 的经济价值,这是因为羊驼毛具有以 下特点:(1)羊驼毛手感细腻,光滑,刺 激少于其它动物,具有极好的隔热和 保热性能,耐磨损,脂肪,油或毛脂含 量很低,不散发味道,蓬松不会滞留 水,也不会抵制太阳光的辐射,不会缩 水;(2)羊驼毛呈现不同程度的弯曲; (3)羊驼纤维拉伸强度和弹性强.此外 羊驼毛保湿性能好,有蚕丝般柔顺光 泽,具有22种天然色,染色时不会失 去原有的光泽,羊驼绒毛容易染色,但 收稿日期:2oo6—09一O8 作者简介:李鹏飞(1978一),男,汉族,助 教,硕士,主要从事分子遗传的相关研究 纯天然色的绒毛备受服装加工业的青 睐. 羊驼毛的这些优良特性是由许多 基因调控的,其中毛色受诸多基因调 控.核糖体蛋白S5(m5)是核糖体蛋 白(ribosomalprotein,RP)家族的重要 成员之一,RPS5基因对毛囊细胞的凋 亡起作用,可能通过对毛囊细胞凋亡 的调控来影响动物绒毛的产量和品 质.因此,研究羊驼RPs5基因的序列 结构特点及其功能分析就具有重要意 义. 1材料和方法 1.1材料与试剂 cDNA文库(羊驼皮肤cDNA文 库),探针(经RT—PCR获取,250bp,