808_薄层扫描法测定妇炎康片中苦参碱的含量

808_薄层扫描法测定妇炎康片中苦参碱的含量 薄层扫描法测定妇炎康片中苦参碱的含量 刘丰丰 贵阳医学院附属医院 550004 王海宁 贵州省药品检验所 550004 摘要 目的建立妇炎康片中苦参碱的含量测定。方法采用薄层扫描法测定妇炎康片中苦参碱的含量。使用硅胶G薄层板展开剂苯- 丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液2?3?4?0.2显色喷以碘化铋钾试液再喷以少量5亚硝酸钠溶液至斑点显色清晰双波长锯齿扫描波长为流动相检测波长为480nm参比波长650nm。结果线性关系良好平均回收率为101.22RSD为2.8。结论本方法简便、快速重现性好。可用妇炎康片的质量控制。 关键词妇炎康片 苦参碱 薄层扫描法 妇炎康片收载于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第10册》但由于原质量标准过于简单仅有鉴别项无含量测定项1无法控制产品的质量根据标准整顿提高的要求增加本品的含量测定项在此采用薄层扫描法测定本品中苦参所含有效成分苦参碱的含量。薄层扫描法操作简便、重现性好好、稳定、结果可靠。本文采用薄层扫描法测定妇炎康片中苦参碱的含量提高了药品质量标准可用于控制成品的质量。 1 仪器与试药 1.1 仪器 CS-9301双波长飞点薄层扫描仪日本岛津公司CX-250型超声波清洗机中国北京医疗设备二厂硅胶G薄层板中国青岛海洋化工厂。 1.2 材料及试药 硅胶G薄层板中国青岛海洋化工厂妇炎康片及缺苦参药材的阴性样品由天方制药厂提供苦参碱对照品由中国药品生物制品? ㄋ 峁?? 坎舛ㄓ谩,健? 醋酸乙酯、浓氨均为纯。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 取苦参碱对照品适量用甲醇稀释成0. 5mg/ml即得。 2.2 供试品溶液的制备 取本品20片除去 片精密称定置具塞锥形瓶中精密加入浓氨试包衣精密称定求得平均片重研细取约2 液饱和过的氯仿50ml称定重量水浴上回流提取30分钟放冷用氯仿补足减失重量摇匀滤过精密量取续滤液25ml置蒸发皿中水浴上蒸干残渣加无水乙醇使溶解转移至5ml量瓶中并稀释至刻度摇匀作为供试品溶液。 2.3 薄层色谱分析条件 硅胶G薄层板100×100mm点状点样点样量供试品溶液3μl、对照品溶液2μl与4μl。展开剂苯- 丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液2?3?4?0.2展开晾干后喷以碘化铋钾试液再喷以少量5亚硝酸钠溶液至斑点显色清晰在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板周围用胶布固定。反射法双波长锯齿扫描λS480nmλR650nm。 2.4 线性关系的考察 分别精密吸取苦参碱对照品溶液1、2、3、4、5、6μl按上述条件进行薄层扫描测定求得苦参碱的回归方程Cμg6.3908×10-3A0.1914r0.996线性范围0.51423.0852μg。实验表明各对照品取样量与峰面积均呈良好线性关系但直线不通过原点因此采用外标两面点法计算含量。 2.5 同板精密度试验 取同一硅胶G板分别精密吸取供试品溶液3μl重复点样5次并以对照品溶液2μl、4μl同时点样按上所述条件测定计算RSD为1.13。 2.6 异板精密度试验 取硅胶G薄层板5块分别点5个点每个点点样3μl并以对照品溶液2μl、4μl同时点样按上所述条件测定计算RSD为1.63。 2.7 重现性试验 取一样品按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液分别精密吸取供试品溶液3μl点样并以对照品溶液2μl、4μl同时点样按上所述条件测定计算RSD为1.43。 2.8 加样回收率试验 采用加样回收精密称取已测定含量的样品0.25g再加入苦参碱对照品适量按上所述条件测定计算回收率苦参碱的回收率为101.22RSD为2.89说明本法有较好的回收率。 表1 苦参碱回收率试验 样品取量mg 0.2508 0.2492 0.2516 0.2527 0.2505 平均 RSD 含被测组分mg 1.4196 1.4244 1.4381 1.4304 1.4179 101.22 2.89 加入量mg 1.4264 1.4264 1.4264 1.4264 1.4264 测得量mg 2.8420 2.8094 2.9172 2.8518 2.9009 回收率 99.72 98.07 104.68 99.68 103.97 2.9 空白试验 按处方比例及生产制备方法按“供试品溶液制备” 项下制备阴性溶液点样3μl按上述条件展开阴性样品色谱图在对照品色谱图相应位置无斑点出现表明阴性样品在苦参碱对照色谱相应位置上无干扰。 3.0 测定法 分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪测定即得。 3.1 样品测定 取所有样品按样品溶液制备操作分别吸取对照品溶液2μl、4μl与样品溶液各3μl点样按上述条件测定计算结果见表二。 表二 样品含量测定结果n2 批 号 苦参碱mg/g 平均mg/g 1 2 20040422 0.56 0.58 0.57 20040423 0.76 0.72 0.74 20040424 0.74 0.70 0.72 20040425 0.80 0.86 0.83 4 讨论 本法简便操作快速不需要复杂的提取与分离所用色谱条件经实验重复性较好斑点清晰无干扰专属性强。本实验中苦参碱为生物碱所以采用稀碘化铋钾显色但显色后背景干扰较大影响扫描和定量的准确性如再喷少量5亚硝酸钠溶液可消除背景的干扰。显色后应立即覆盖同样大小的玻璃板周围用胶布固定否则时间过长斑点色会渐渐变淡。展开剂先择时曾采用氯仿- 丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液4?3?4?0.2苯- 丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液4?2?4?0.2苯- 丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液2?3?4?0.2在其他条件相同时采用苯- 丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液?3?4?0.2分离效果较好。 参考文献 1 卫生部药典委员会编卫生部药品标准中2 药成方制剂第十册199145 2 中华人民共和国国家药典委员会编中华人民共和国药典 一部化学工业出版社2000。 3 现代实用中药控制技术与应用北京化学工业出版社2001143