滋阴补肾丸的毒理学研究

滋阴补肾丸的毒理学研究 滋阴补肾丸的毒理学研究 ? 390?华北国防医药2006年12月第18卷第6期MedJNatDefendingFarcesinNorthChina,Dee.2006,Vo1.18,No.6 等报道的方法,我们改变了梯度洗脱时问,使干扰更 小,分离度更高.本次试验条件除了能满足对霉酚酸 的测定,对MPAG的分离度也很好,MPAG虽然在药理 学上是非活性的,但它大部分可以分泌入胆汁,并进入 小肠,在肠道中再次水解为霉酚酸而发挥作用,提示可 以用这个条件对MPAG做进一步研究.Jones等和 Na—Bangchang等采用HPLC法对人血浆中的MMF, 霉酚酸和MPAG的浓度进行测定,最低检测限为 0.17rag/L;采用半自动HPLC法分离测定血浆中的霉 酚酸和MPAG,取样量为0.5ml,霉酚酸最低检测限为 0.1mg/L,回收率和精密度很好,但取样量较多,且最 低检测限较高.我们建立的HPLC测定方法取样量为 0.1ml,最低检测限为4g/L,具有准确,简单,迅速的 特点,更适于临床对患者血浆霉酚酸进行常规监测. 参考文献: [1]刘晓琰,施安国,费艳秋,等.免疫抑制剂研究进展[J].中 国新药杂志,2001,10(1):17.2O. 滋阴补肾丸的毒理学研究 邓源,于弘,李秀敏,杨锋,赵汉臣 (北京军区总医院a.药剂科;b.医务部,北京100700) SanquerS,BreilM,BaronC,eta1.Troughbloodconcentra- tlonsinhmg?termtreatmentwithmycophenolatemofeti[J]. Lancet,1998,351:1557-1561. 郭宏波,张玉海.霉酚酸酯(MMF)在肾移植中的应用 [J].中国新药杂志,1998,7(6):444_446. ShipkaovaM,NiedmannPD,ArmstrongVM,ela1.Simultane- OBSdeterminationofmycophenolicacidanditsglucuronide,in humanplasmausingasimplehigh--performanceliquidchro-- matographyprocedure[j].ClinChem,1998,44:1481-1488. JonesCE,TaylorPJ,JohnsonAG,eta1.High-performance liquidchromatographydeterminationofmycophenolicacid anditsglucuronidemetaboliteinhumanplasma[J].JChro— matogrBBiomedSciAppl,1998,708:229-234. Na-BangchangK,SupasyndhO,SupapornT,eta1.Simple andsensitivehigh?performanceliquidchromatographic[J].J ChromatogrBBiomedSciAppl,2000,738:169-173. (收稿时间:2006~8-23修回时间:2006?10-20) 摘要:目的:观察动物对滋阴补肾丸的急性及长期毒性反应,为临床用药安全剂量 提供参考.方法:?昆明种小鼠4O只,随机分成 给药和对照组2组.?Wistar大鼠160只,随机分成4组,每天2次灌胃给药,连续灌 胃26周.观察一般情况,并进行病理学检查, 检测血常规,生化及血凝指标等.结果:滋阴补肾丸的毒性较低,1次最大给药量为 63.9g/kg,1日最大给药量为191.7g/kg.长期 灌胃此药,大鼠体重,脏器,血液学指标和病理组织学检测均未见异常.结论:滋阴补 肾丸是一种安全,毒性低的药物. 关键词:植物刺荆;剂型改进;急性毒性试验;毒性试验,慢性;鼠 中图分类号:R931.7l:11965.3文献标识码:A文章编号:1009_0878【2006)06-0390-04 AToxicologicalStudyofZiyinbushenPills DENGYuan,YUHong,LIXiu.min,YANGFeng,ZHAOHan.then(a.DepartmentofPharma cology;b.DepartmentofMedicalAdminis. tration,GeneralHospitalofBi~ingMilitaryArea,Beijing100700,China) Abstract:0bjectivc:Toobservetheacutetoxicityandthelong-termtoxicityreactionofziyinb ushenwan(ZYBS)andprovidethereference dosageforhumanbeings.Methods:? 40mice(KunMiagkind)wererandomlydividedinto2groups, 【hedrugtestgroupandthecontrol group.? 160Wistarratswererandomlydividedinto4groupsandweregivendrugs(}rallytwicea(1ayf or26weeks.Theindexesofpathologi- calandbiologicaltests,bloodtestandbloodcoagulationtestwerestudied.Results:Toxicityof ZYBSisverylow.Themaximumamountwas 63.9g/kgperdosageand191.7g/kgperday.Therewasnoabnormalchangeintheweight,thein testinalorgans,hemologyandpathology aftercontinueduseofZYBS.Conclusion:ZYBSissafeandlowintoxicity. Keywords:Plantpreparations;Agenttypeimprovement;Acutetoxicitytests;Toxicitytests, chronic;Rats 滋阴补肾几具有滋阴补肾等功效,临床用于头晕 :耳鸣,腰膝酸软,遗精盗汗等阴虚肾亏的病症.为研究 该药物的毒性反应,我们按新药审批办法的有关规定, 对其进行了相关的安全性评价.现如下. 1材料和方法 1.1仪器Bakersystem9120+全自动血球计数仪 (美国BioChem[mmunoSystem公司提供).Lab一500型 全自动生化仪(南京桃园应用生物技术有限公司 生产). 1.2药物与试剂研究用滋阴补肾丸浸膏由北京军 区总医院提供,每毫升浸膏相当于2.13g生药.碱性 磷酸酶(ALP),血糖(GLU),尿素氮(BUN),丙氨酸转 1J1J]J1j1J 23456 rLLrLrLrL 堡j垦堕匿药2006年—筹18卷第 6MedJNatDefendingForcesinNoMhChina,Dce.2006,Vo1.18,No.6 氨酶(ALT),肌酐(Cr),天冬氨酸转氨酶(AST),总胆 红素(TBIL),总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)试剂盒均由 中生北控生物科技股份有限公司提供;总胆固醇(TC) 由温州东瓯生物工程有限公司提供;全自动血球计数 仪试剂由美国BioChemImmunoSystem公司提供;尿八 联试纸由高尔宝生物技术有限公司生产,批号 20031008. 1.3动物及饲料昆明种小鼠40只,雌雄各半,体重 (224-2)g,由山东鲁抗医药集团有限公司提供,合格证 号:鲁动质字D2002092I号;Wistar大鼠160只,雌雄 各半,体重(1104-10)g,由山东大学西校区动物中心提 供,合格证号:鲁动质字第20021024号.颗粒鼠饲料 由济南康大饲料有限公司与山东省试验动物中心联合 生产,许可证号:鲁动饲字2001001. 1.4小鼠急性毒性试验取禁食12小时的昆明种小 鼠40只,随机分为给药组和对照组,每组20只.经预 试验,滋阴补肾丸浸膏与蒸馏水以2.13:1配制灌胃 给药组动物,对照组灌胃等容量蒸馏水,给药剂量为 0.3ml/10g,1天3次,每次给药时间间隔为7h,给药 后即刻观察动物反应,连续观察14d,记录动物毒性反 应症状及死亡情况…,观察结束后,对小鼠进行尸检, 肉眼观察记录病变情况. ,随机 1.5大鼠长期毒性试验取Wistar大鼠160只 分为4组,即空白对照组,滋阴补肾丸高剂量组 (63.9g?kg..?d),中剂量组(21.3g?kg一? d),低剂量组(7.1g?kg,?d),每组40只.每 天灌胃2次,连续灌胃26周.高剂量动物原液给予, 其他各组药物用水等比稀释,每次给药容积 1.5ml/100g,对照组灌胃等容量溶剂. 1.5.1一般症状及死亡情况:给药期间每天定时观察 动物外观体征,行为活动和饮食情况,记录症状变化, 发现有严重中毒反应的动物取出单笼饲养,重点观察, 发现死亡或濒死动物及时尸检. 1.5.2体重测定:给药及停药期间每周测定体重,与 药前比较求出体重增减值. 1.5.3血液学和生化学检测:于给药13周取对照组 和高剂量组各1/4动物,给药后26周每组各取1/2动 物,停药4周后取剩余所有动物腹腔注射1%戊巴比妥 钠溶液浅麻,腹主动脉取血,分别用于测定血液学指 标,血清生化指标及血凝指标.血液学指标包括红细 胞计数(RBC),白细胞计数(WBC),血红蛋白(Hb)和 血小板(PLT).血清生化指标包括ALT,ALP,AST,血 糖,总胆固醇,总蛋白,白蛋白,尿素,总胆红素及肌酐. - 391? 血凝指标包括凝血酶时问(TT),活化部分凝血活酶时 间(APTT)及凝血酶原时问(PT). 1.5.4病理组织学检查:给药13周后取高剂量组和 对照组各1/4动物,给药26周后每组各取1/2动物, 恢复期结束后取剩余所有动物进行剖检,行肉眼观察, 测脑,心,肝,脾,肺,肾,肾上腺,胸腺,睾丸,附睾,前列 腺,子宫,卵巢和甲状腺湿重,求出脏器系数,并将上述 脏器及胃肠等脏器以10%中性福尔马林固定,常规石 蜡包埋后切片,HE染色镜检j. 2结果 2.1小鼠急性毒性试验给药组小鼠灌胃后即刻活 动明显减少,有5只小鼠俯卧不动,0.5,1h后逐渐好 转,给药后2天内动物粪便呈药物色,后恢复正常,连 续观察14d,小鼠未见明显异常及死亡.观察结束后 剖检所有小鼠,肉眼观察心,肝,脾,肺,肾,脑等各主要 脏器,给药组与对照组比较未见明显异常.给药组1 次最大给药量为63.9g/kg,1日最大给药量为 191.7g/kg. 2.2大鼠长期毒性试验 2.2.1一般行为与体重变化:给药期间,高剂量组大 鼠有3只给药后2—4周出现给药前流涎和给药时挣 扎,吐药,给药后活动减少,行为邋遢,后渐恢复.用药 期间滋阴补肾丸低,中,高剂量组雄性大鼠体重增长分 别为(365.64-34.2),(360.1土40.1)及(350.74- 44.0)g,雌性大鼠体重增长分别为(216.84-24.5), (214.64-30.6)及(208.94-32.7)g,与对照组(367.3 4-43.7)g(雄性)及(228.7?45.3)g(雌性)比较,无统 计学差异(P>0.05). 2.2.2血常规及血凝指标变化:口服给药13周高剂 量组大鼠RBC明显低于对照组(P<0.05),但其数值 均在正常范围之内,其余各项血常规及血凝指标与对 照组比较,无统计学差异(P>0.05),o给药26周以及 停药4周时,各项血常规及血凝指标与对照组比较,无 统计学差异(P>0.05).结果见1. 2.2.3血液生化学指标的变化:高剂量组在给药26 周和停药4周分别死亡2只和1只大鼠.给药13周, 26周及停药4周大鼠血清生化检测指标与对照组比 较,均无统计学差异(P>0.05).结果见表2. 2.2.4大鼠脏器系数及病理组织学变化:给药l3周, 26周及停药4周,滋阴补肾丸各剂量组动物脏器系数 与对照组比较,无统计学差异(P>0.05).结果见表 3,4.组织切片检查结果显示,所有动物各脏器均未见 明显的病理改变. ? 392?华北国防医药2006年12月第18卷第6期Med卫!望!塑!!!望些:!!:!!: 表1口服滋阴补肾丸对大鼠血常规及血凝指标的影响(.4-s) 注:与对照组比较,?P<O.05 表2口服滋阴补肾丸对大鼠血液生化学指标的影响(x.4-s) 堡北国防医药2006年12月第18卷第6期MedJNatDefendingForcesinNorthChina,Dee.2006.Vo1.18,No.6 3讨论 滋阴补.肾丸是以地黄,泽泻,牡丹皮等几味药材经 超临界萃取,膜分离等现代中药提取精制而成,以 牡丹皮,泽泻的超临界萃取物作成滴丸,外裹其他药材 提取物制成泛丸,此项技术已申报国家专利.为考察 生产工艺改进和剂型改革对药物安全性的影响,我们 进行了滋阴补.肾丸的急性和长期毒性试验.结果证 实,小鼠灌胃1次最大给药量为63.9g/kg,1日最大给 药量为191.7g/kg;大鼠长期连续灌胃滋阴补肾丸,除 高剂量组外,其余各组大鼠一般行为及体重变化,血液 学指标,凝血时间,血液生化学指标,脏器病理组织学 检查均未见异常.高剂量组给药2—4周后大鼠活动 ? 393? 减少,给药13周对红细胞影响显着,但数值仍在正常 范围内,给药26周,停药4周后该组分别有2只和1 只动物死亡,可能为个体差异造成.由此可知,滋阴补 肾丸安全用药剂量为21.3g?kg一?d,,其中毒剂量 为63.9g?kg一?d一,分别为临床用药剂量的l45, 435倍,为拟定人用药安全剂量提供了参考. 参考文献: [1]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版 社,2000.118-120. [2]袁伯俊,王治乔,主编.新药临床前安全性评价与实践 [M].北京:军事医学科学出版社,2000.44-45. (收稿时间:2006-08—27修回时间:2006.10—30) 葛根提取物抗糖尿病大鼠氧化应激的实验研究 曾明,陶凯忠.郑水庆,徐宏发 (1.北京军区总医院药理科,北京100700;2.第二军医大学海军医学系,上海200433;3.第二军医大学药学院, 上海200433;4.华东师范大学生命科学院,上海200062) 摘要:目的:探讨葛根提取物防治糖尿病血管病变的机制.方法:采用链脲霉素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型,以氨基胍作为阳性 药物对照,以葛根总提取物和总黄酮为受试药物,测定各实验组大鼠血糖,超氧化物歧化酶,丙二醛,一氧化氮及一氧化氮合酶,观 察葛根提取物对糖尿病大鼠的作用与影响.结果:与正常对照组相比,模型组血糖,血浆超氧化物歧化酶和丙二醛有显着差异(P< 0.05,P<0.01);葛根总提取物,葛根总黄酮可降低糖尿病大鼠血糖,与模型组比较有显着差异(P<0.05);氨基胍,葛根总提取物和 葛根总黄酮可提高糖尿病大鼠血浆超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的产生,与模型组比较有显着差异(P<0.05,P<0.01).结 论:葛根提取物具有抗氧化应激的作用,可防治糖尿病血管病变的发生. 关键词:葛根提取物;糖尿病;氧化性应激;大鼠 中图分类号:R587.I;R931.71文献标识码:A文章编号:1009—0878(2006)O6-0393-03 ExperimentalStudyofKudzuExtractsonAntioxidativeStressinDMRats ZENGMing,TAOKai—zhong,ZHENGShut— qing,XUHong?fa(1.DepartmentofPharmacology,GeneralHospitalofBeijingMilitaryArea, Beijing100700,China;2.DepartmentofNauticalMedicine,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China;3.CollegeofPhar— maey,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China;4.LifeScienceAcademy,theEastChinaNormalUniversity,Shanghai 200062,China) Abstract:Objective:ToinvestigatetheprotectiveeffectsandmechanismsofKudzuextractsondiabeticangiopathyinratsinducedbystrepto— zotoein.Methods:DMratswereinducedbySTZ,withAGaspositivecontroldrugandEPLandTEPastesteddrugstotestthebloodsugar, SOD,MDA,NOandNOS,andtoobservetheeffectofKudzuextractsonDMgroups.Results:Comparedwiththatofthecontrolgroup,there wasanobviousdifferenceinbloodsugar,plasmaSOD,MDAintheDMgroup(P<0.05,P<0.O1).AG,EPLandTEPimprovedtheactivi— tiesoftheplasmaofSODofthediabeticrats,andreducedtheproductionofMDAwithanobviousdifferencefromthatofthemodelgroup(P <0.05,P<0.O1).Conclusion:TheKudzuextractsmayactasanantioxidanttopreventdiabeticangiopathy. Keywords:Kudzuextracts;Diabetes;Oxidativestress;Rats 最近的研究显示,氧化应激与糖尿病及其并发症 的发生,发展密切相关,高糖引起细胞内氧化应激参与 了糖尿病血管损伤,而血管损伤的主要表现之一为血 管内皮功能紊乱,应用抗氧化治疗可逆转氧化应激对 组织的损伤,从而阻止或延缓糖尿病及其血管病变的 发生,发展….本研究主要观察了葛根提取物对糖尿 病大鼠的抗氧化应激作用,以探讨葛根提取物防治糖 尿病血管病变的机制. 1材料和方法 1.1材料与仪器 1.1.1实验药材:葛根总提取物(EPL)提取自野葛 [Puerarialobata(Willd.)Ohwi,采自西安],70%乙醇提