【doc】荧光素染色在实验诱导性玻璃体后脱离观察中的应用

【doc】荧光素染色在实验诱导性玻璃体后脱离观察中的应用 荧光素染色在实验诱导性玻璃体后脱离观 察中的应用 南通医学院 ActaAcademiaeMedicinaeNamong2003:23(3)?237? [文章编号]l000—2057(2003)03--0237--02 荧光素染色在实验诱导性玻璃体后脱离观察中的应用 朱冬青’,.陈辉 (南通医学院第二附属医院眼科,南通226001;南通医学院附属医院眼科) [摘要]目的:评价巨检加染色法在实验诱导性玻璃体后脱离观察中的可靠性.方法:15只有色素兔随机分为 3组,每组5只.分别在右眼玻璃体腔内注入不同浓度的Dispase制作玻璃体后脱离模型,左眼注入等量磷酸盐缓冲液 作对照.注药1周后观察玻璃体后脱离的形态.结果;巨检对照眼均无玻璃体后脱离;0.25u/ml组和0.1u/ml组均有 不同程度玻璃体后脱离;0.05u/ml组有4眼有玻璃体后脱离.对玻璃体与视乳头问粘连,单纯巨检能辨认者0.25u/ ml组和0.1u/ml组各1眼,0.05u/ml组2眼,巨检加染色法能辨认者0.25u/ml组2眼,0.1u/ml组3眼,0.05u/ml 组4眼;玻璃体退缩后与视网膜附着的边缘,单纯巨检各组均3眼能 辨别,巨检加染色法发现其中部位不相符者0. 25u/ml组2眼,0.1u/ml组和0.05u/ml组各3眼.电镜检查0.1u/ml组 内界膜光秃,无胶原原纤维附着,0.25u/ml和 0.05u/ml组仍能见到少量胶原原纤维附着.结论:巨检加染色法能较 客观地反映玻璃体后脱离. [关键词]玻璃体后脱离;荧光素钠;巨检;兔子 [中图分类号]R776.4[文献标识码]A Theuseoffluoresceindyingofvitreousinobservationofposterior vitreousdetachmentinanimalexperiment ZHUDongqing,CHENHui(DepartmentofOphthalmology,AffiliatedHospital,NantongMedicalCollege,Nan— tong226001) [Abstract]Objective:Toevaluatethereliabilityofmacroexaminationincombinationwithsodiumfluoresceindying ofvitreousinobservationofposteriorvitreousdetachment(PVD).Methods:15rabbitswererandomlydividedinto3 groups.Eachgrouphad5rabbits.Differentconcentrationsofdispasewasinjectedintothevitreouscavityinrighteyes andsameamoutofPBSinjectedinlefteyesascontrols.Onday7afterinjection,macroexamination,macroexamination andsodiumfluoresceindyingofvitreousandelectronmicroscopywereperfor med.Results~A11thecontroleyesshowed noPVD.DifferentscalesofPVDwaspresentin5/5eyes(O.25u/mlor0.1u/m1),4/5eyes(O.05u/m1).Theattach— mentofvitreoustOopticdiscCOuldberecognizedin1/5eyes(0.25u/mror0.1ulmDand21seyes(0.1u/m1)and4/5 eyes(O.05u/m1)bymacroexaminationanddyingofvitreous.ThelineofvitreousattachmenttOretinacouldberecog— nizedin3/5eyesineverygroup,buttheirlocationwasfounddifferentin2/5eyes(O.25u/m1).315eyes(O.1u/mlor 0.05u/m1)bymacroexaminationanddyingofvitreous.Byelectronmicroscopy.thesurfaceofinnerlimitingmem— braneswasbarein0.1u/mleyes?andsparsecollagencouldbeobservedin0.25u/mlor0.05u/mleyes.Conclusion:By thecombinationofmacroexaminationandfluoresceindyingofvitreous,PVDcanbeobjectivelyexposed. [-Keywords]Posteriorvitreousdetachment;Sodiumfluorescein;Macroexamination;Rabbits 玻璃体后脱离在玻璃体视网膜疾病的发生和发 展中的作用早已引起重视.由于机械分离玻璃体后 皮质可引起许多并发症,通过药物诱导玻璃体后脱 离(posteriorvitreousdetachment,PVD)形成的实 验研究正成为这一领域的热点.目前,动物实验中尚 缺乏判断PVD诱导效果的金标准.我们试用巨检加 染色法来摸索一种简易而可靠的观察方法. 1材料与方法 1.1材料取健康青紫蓝家兔15只,3月龄左右, 雌雄不拘,体重2”2.5kg,无眼疾患,由南通医学院 实验动物中心提供.随机分为3组,每组5只.右眼 作为实验眼,左眼作为对照眼. 1.2注药方法实验眼玻璃体腔内注入Dispase (Roche公司产品,Cat.No.210455,用0.1mol/L磷 酸盐缓冲液(PBS)稀释成所需最终浓度,分装于带 25G注射针的Iml注射器内,一2O?冰箱内备用) 浓度分别为0.25u/ml,0.1u/ml和0.05u/ml;对照 眼注入等量0.1mol/LPBS.散瞳后予3戊巴比妥 钠(1ml/kg)耳缘静脉注射麻醉.将装有Dispase的 注射器取出,室温下冻溶.结膜囊生理盐水冲洗,眼 周消毒,铺巾.置平凹型角膜接触镜,在手术显微镜 ?[作者简介]朱冬青,男,生于1971年i,El,汉族.江苏省通州市人,硕士 研究生,研究方向.玻璃体和视网瑛瘸. ?238?南通医学院 下于颞上方角膜缘后2.5ram处进针.进入玻璃体后 针尖尽量靠近视盘下缘视网膜表面,斜面朝下,注入 0.1ml不同浓度的Dispase或PBS,拔出注射针,棉 签压迫片刻.术后予0.250A氯霉素滴眼液滴眼3次 /日,0.5金霉素眼膏,10A阿托品眼膏涂眼. 1.3注药后的观察与处理术后1,3,6d行裂隙灯 显微镜,直接检眼镜检查,观察眼内反应.1周时耳缘 静脉注射空气栓塞致死,快速摘出眼球,剪除球外筋 膜,洗去血迹,置入4?2.5戊二醛液中固定以作大 体和电镜检查,观察有无PVD及形态.10min后在 眼球两侧角膜缘后3mm处各作一3mm长切口,以 利固定液进入眼球内.再入上述固定液中24h.每组 取1只巨检有PVD形成眼作电镜检查,并随机取1 只对照眼以作参照.将用作巨检切开的另一半眼球 于视乳头下方剪取3mm×5ram球壁组织,截取 1ram×3mm组织作透射电镜检查,余3mm×4mm 组织送作扫描电镜检查. 1.4巨检将眼球角膜面向下,用锋利双刃刀片从 视乳头通过角膜缘12点垂直剖开.将任一眼杯后极 部浅层巩膜组织镊起,使角膜向下,观察玻璃体与视 网膜的关系.无PVD者,玻璃体饱满,与视网膜,视乳 头保持附着.由于重力作用,后极部玻璃体呈弧形下 挂;有PVD者玻璃体明显空凹,稀薄或退离切缘处视 网膜,上端与视网膜附着处几呈直角.在有PVD眼, 剖切和倒置眼球时能见到有水样液体流出.单纯巨检 后再用玻璃体荧光素钠染色观察:用lml注射器抽取 2O9/6荧光素钠液,注5滴于5ml水中混匀,将眼球剖 切面向上浸没于其中,3mln后取出,漂洗至球壁褪 色,倒悬于盛水玻璃器皿中,轻微晃动,观察玻璃体运 动时玻璃体与视网膜的附着关系. 2结果 0.25u/ml组和0.1u/ml组2,3d内轻至中度 前房炎性反应,玻璃体内色素性混浊,1周后有所减 轻.0.25u/ml组有3眼,0.1u/ml组有1眼视盘周围 及髓线处有火焰状出血.巨检对照组均见玻璃体饱 满,稠厚,染色浓密,充满整个玻璃体腔,与视网膜和 视乳头保持附着.0.25u/ml组和0.1u/ml组均有不 同程度PVD,0.05u/ml组4眼有PVD.表现为后部 玻璃体明显空凹,甚或达到中周部,玻璃体退缩至晶 状体后表面和周边部.单纯巨检能辨认与视乳头有 粘连者0.25u/ml组和0.1u/ml组各1眼,0.05u/ml 组2眼,可疑者0.1u/ml组2眼,0.05u/ml组1眼. 巨检加染色法能辨认与视乳头有粘连者0.25u/ml 组2眼,0.1u/ml组3眼,0.05u/ml组4眼.单纯巨 检各组均3眼能辨别玻璃体退缩后与视网膜附着的 边缘,巨检加染色法发现其中部位不相符者0.25u/ ml组2眼,0.1u/ml组和0.05u/ml组各3眼.扫描 电镜和透射电镜下对照眼见浓密胶原原纤维覆盖内 界膜;0.1u/ml组内界膜光秃,无胶原原纤维附着, 0.25u/ml组和0.05u/ml组仍能见到少量胶原原纤 维附着. 3讨论 目前,有很多药物被用来进行PVD的诱导实验 研究.1998年,Tezel等[1]应用Dispase玻璃体腔注 射诱导PVD获得成功,我们的实验也证明了Dis— pase诱导PVD效果满意. 参阅文献[2],PVD的观察方法有很多种,如: 巨检,光,电镜,B超,免疫组化和酶消化法等.Roth 和Foos[妇介绍的眼球巨检方法至今仍不失为一种可 利用的病检手段.由于玻璃体的透明性,对玻璃体与 视乳头间很纤细的粘连或视网膜面残余的少量玻璃 体难以依靠反光来确认.荧光素钠染色后,玻璃体颜 色非常鲜明,结合玻璃体运动可清楚地看到玻璃体 与视网膜的附着部位.单纯巨检仅能判断PVD的有 无,而辅以染色法可以窥其全貌,就其具体形态作出 全面评价,有助于区分完全性和部分性PVD,从而 使PVD诱导实现真正的解除或防止玻璃体与视网 膜牵引的目的.需注意的是,要保持充分的染色时 间,还得小心不能漂洗过度.3min的染色时间已足 够.漂洗时应随玻璃体残余量的多少相应改变时间, 量少时应缩短漂洗时间. Tezel等L1]观察PVD时把眼球从锯齿缘后 4mm处切开,倒置后,将晶状体拉出,玻璃体倾出, 如玻璃体与视网膜分离,则谓有PVD.此操作似不 够精细,容易导致人为的PVD. 我们认为应用巨检加荧光素染色法较好地解决 了玻璃体形态学上不易观察的难,既经济又实用 值得推广.在实验诱导性PVD的观察中,能较全面, 直观地提供信息,是必不可少的步骤. [参考文献] [1]TezelTH,DelPrioreLV,KaplanHJ.Posteriorvitre— OUSdetachmentwithdispase[J].Retina,1998,18l7. [2]VerstraetenTC,ChapmanC,HartzerM,eta1.Pharma— cologicinductionofposteriorvitreousdetachmentin therabbit[J].ArchOphthalmol,1993,111l849. [3]VanNewkirkMR,JohnsonMw,HughesJR.B--scan ultrasonographicfindingsinthestagesofidiopathic macularhole[J].TransAmOphthalmolSoc,2000,98l 163. [4]HeegaardS.Morphologyofthevitreoretinalborderre— gion[-J3.ActaOphthalmologicaScandinavica,1997,75. [收稿日期]2OO2—12—27