【doc】 短暂性和永久性局灶脑缺血大鼠大脑皮层中钠-钙交换体亚型mRNA及蛋白表达的变化

【doc】 短暂性和永久性局灶脑缺血大鼠大脑皮层中钠-钙交换体亚型mRNA及蛋白达的变化 短暂性和永久性局灶脑缺血大鼠大脑皮层中钠-钙交换体亚型mRNA及蛋白表达的变 化 约通讯2005年第二卜二卷第! 梗死大鼠血清肌酸磷酸激酶(cK)和乳酸脱氢酶(LDH)活力及缺血区心肌组织中肿瘤坏死因子仅(TNF一仅)mRNA 表达的影响.方法:雄性sD大鼠和雄性Beagle犬,结扎冠状动脉左前降支(LAD)制备心肌梗死模型.结扎冠脉后 24小时,测量大鼠和犬的MIS(N—BT染色法),大鼠血清CK和LDH活力;并采用逆转录一聚合酶链反应(RT— PCR)方法检测TNF—amRNA的表达(与内参的相对表达强度来表示).结果:预先给予SXM95,190mg?kg可使 人鼠的MIS从(21.9?2.0)%减小到(15.2?2.4)%,(13.5?2.0)%(P<0.01),预先给予SXM15,30mg?kg可 使犬的MIS从(9?4)%减小到(2.8?2.6)%,(3.5?2.4)%(P<0.0l,P<0.05);预先给予SXM可使心肌梗死大 鼠血清CK活力较心肌梗死模型组降低18.5%一31.9%(P<0.05,P<0.01),血清LDH活力较心肌梗死模型组降 低9.2%一10.5%(P<0.05)预先给予SXM95mg?kg可明显减少心肌 梗死大鼠缺血区心肌组织TNF—amRNA 的表达[(0.24?0.15),S(0.6(0.3),P<0.05]结论:预先给予SXM能够减小急性心肌梗死大鼠和急性心肌梗死 犬的MIS,降低血清CK和LDH活力,其机制可能与其减少缺血区心肌组织中TNF—amRNA的表达有关. 羟基红花黄色素A促缺血性脑组织新血管生成作用及其机制初探 张岭朱海波 中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所北京100050 本文探讨从传统活血化瘀名药红花中分离提取的单体化合物——羟基红花黄色素A(HydroxysaffloryellowA, HSYA)促缺血性脑组织新血管生成的作用及其初步作用机制.采用线栓塞法阻断大鼠大脑中动脉造成局灶性脑 缺血模型(MCAO),神经行为学评分,Trc染色,计算梗死面积比;以免疫组织化学等方法检测HYSA给药后脑组织 新血管生成数目和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平表达;采用内膜消化刮取法获取犬胸主动脉内皮细胞;分别 在常氧(21%)/低氧(10%)低糖两种条件下,以噻唑蓝(M1Tr)法观察HSYA对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响, VEGF作为阳性对照;并且观察VEGF抗体及其两种酪氨酸受体(Fit一1和KDR)的抗体对HSYA促VEC增殖作及 分泌VEGF水平的影响,采用ELISA法检测VEGF水平.采用生物分子相互作用仪检测HSYA与VEGF,Fit一 1和KDR的相互作用一结果表明,大鼠脑缺血30min后单次舌下静脉注射HSYA发现其呈剂量依赖性改善脑缺血 模型大鼠的行为障碍,减少脑缺血区面积;HYSA呈剂量依赖性增加缺血脑组织周围区域内新血管的生成.对 VEGF的蛋白表达有上调作用;HSYAI×10,mol?L,1×10,mol?L在常氧条件下孵育72h,96h和120h时或 在低氧低糖条件-F孵育24h,48h,72h时对VEC都有明显促增殖作用,并具有浓度和时问依赖性,HSYA1×10.mol ? L与VEGF2.6×10m01.L..在同样条件下对VEC的促增殖作用强度相当;lOng?mL的VEGF,Fit一1和 KDR的抗体均能明显抑制1×10m01.LHSYA的促VEC增殖作用,尤其lOng?mL的VEGF和Fit一1的抗体 能明显抑制1×10mol?L..HSYA的促VEC分泌VEGF作用.大分子相互作用结果表明,HSYA与VEGF,Fit一1 硬KDR均无明显结合一 综上所述,羟基红花黄色素A对大鼠局灶性脑缺血损伤有明显的保护作用,并能促进缺血脑组织周围区域内 新血管生成,其机理可能与增强VEGF信号转导通路从而促进血管内皮细胞增殖作用有关.但HSYA的促VEC增 殖作用不是通过直接作用于VEGF及其受体而实现的. 短暂性和永久性局灶脑缺血大鼠大脑皮层中钠一钙 交换体亚型mRNA及蛋白表达的变化 李了了王晓良 中国医学科学院中国协和医科大学药物研究所北京100050 目的:研究大鼠短暂性和永久性局灶脑缺血模型中大脑皮层钠一钙交换体亚型mRNA和蛋白表达的变化. 方法大脑中动脉阻断(McAO)造成短暂性和永久性局灶脑缺血;用RT—PCR的方法检测大脑皮层中三种钠钙交 换体亚型NCXI,NCX2和NCX3mRNA表达的变化;用westernbl0t 的方法检测大脑皮层中NCX1蛋白的表达变化. 结果:大脑中动脉阻断2小时再灌2小时,6小时时NCXlmRNA分别降低42.1%和27. 8%,再灌12小时和24小时 时NCXlmRNA水平恢复至正常水平,NCX2和NCX3mRNA在不同的时间点均无显着性变化;NCX1蛋白表达在大 2l 2oo5年第二十二卷第三 脑中动脉阻断2小时再灌2小时时降低34.4%,再灌24小时后其表达恢复正常.大脑中动脉阻断2小时,6小时, 12小时和24小时时,NCX1.NCX2和NCX3都无明显变化;NCX1蛋白在大脑中动脉阻断2小时时表达下降 42.9%,缺血6小时时恢复至正常水平,缺血12,24和24小时时,其表 达分别增加2.2.2.6和2.7倍.结论在大脑 中动脉阻断引起的短暂性和永久性局灶脑缺血的病理损伤过程中NCX1可能发挥一定的调节作用. 双醋瑞因对成骨细胞增殖分化及对OPG/RANKL表达的影响 王霖王文杰 中国协和医科大学中国医学科学院药物研究所北京100050 研究目的:双醋瑞因是一种新型IL一1抑制剂,对骨关节炎具有确切的治疗作用,并能改善关节破坏.骨关节 炎,类风湿性关节炎中的关节破坏主要包括关节软骨及软骨下骨的破坏.IL一1B是诱导关节骨侵蚀的重要炎性因 子:已有报道证明双醋瑞因具有软骨保护作用,本文通过观察双醋瑞因对IL一1B作用下成骨细胞前体细胞 MC3T3一E1增殖,分化的影响确定双醋瑞因是否影响成骨细胞介导的骨形成过程.OPG与RANKL是破骨细胞分 化,活化的重要调控因子,通常表达于成骨细胞,OPG与RANKL的比例是调控骨代谢的关键.本文通过观察双醋 瑞因对MC3T3一E1细胞中OPG/RANKL表达的影响,确定双醋瑞因是否影响成骨细胞对破骨细胞的调控过程. 结果:0.1Ixmo1.L,一5txmo1.L双醋瑞因可以拮抗IL一1B对MC3T3一E1细胞增殖,分化的抑制作用. 0.1Ixmo1.L,一5ixmo1.L双醋瑞因在蛋白水平及基因水平均可抑制IL一1B刺激的RANKL表达,同时促进IL一1p 刺激的OPG表达.结果显示5I~mo1.L一1双醋瑞因可使0PG/RANKLmRNA比例上调1.94倍.结论:双醋瑞因可 通过促进成骨细胞前体增殖,分化而阻断IL一113对骨形成的抑制作用.双醋瑞因可作用于成骨细胞,使OPG与 RANKL表达的比例上调,有可能对破骨细胞性骨破坏也具有抑制作用.综上所述,双醋瑞因可能具有促进骨修复 及抑制骨破坏的作用,为其应用于炎症性骨破坏的治疗提供了实验依据. 雪莲细胞培养物总黄酮抗炎作用的机理研究 杨伟鹏周钟鸣 中国中医研究院中药研究所北京100700 目的:通过观察野生雪莲总黄酮,雪莲细胞培养物总黄酮对炎症大鼠血清中炎性因子IL一1B,NO,PGE的影 响,以及研究雪莲细胞培养物总黄酮对炎性因子PGE2分泌以及COX一2,iNOS,NF—KB,o6smRNA表达和对NF— xB,o6S,ERK1,p38蛋白表达的影响,来探讨其抗炎机理.方法:采用角叉菜胶致足肿胀法造成大鼠炎症模型,分离 血清,观察野生雪莲总黄酮(W)和雪莲细胞培养物总黄酮(C)对炎症大鼠血清中炎症介质和细胞因子的影响.其 中IL一1B用I标记RIA试剂盒,PGE含量用H标记RIA试剂盒测定;NO含量用Griess法测定;逆转录聚合酶 链式反应方法检测小鼠巨噬细胞COX一 2,iNOS,NF—KB,p65mRNA表达情况;蛋白质印迹检测NF—KB,o6S, ERK1,p38蛋白表达的情况.结果:野生雪莲总黄酮和雪莲细胞培养物总黄酮各剂量组与模型组相比均可明显抑 制IL一1B,NO,PGE:的分泌,P<0.01或P<0,05,野生,培养组间无显着差异;雪莲细胞培养物总黄酮可明显降低 COX一2,iNOS,NF—KB,p65mRNA表达,降低NF—xB,P65,ERK1,p38的蛋白表达.结论:野生雪莲总黄酮,雪莲细 胞培养物总黄酮对IL—l(,NO,PGE2的分泌均有抑制作用,雪莲细胞培养物总黄酮的抗炎作用与抑制炎性因子 PGE2分泌有关,抑制COX一2,iNOS,NF—KB,p65mRNA表达可能是雪莲细胞培养物总黄酮的抗炎机理之一;转录 因子NF—KB,P65,蛋白激酶ERK1和p38可能参与了对炎症介质的调控,雪莲细胞培养物总黄酮抗炎作用的机理 可能与此有关 22 蜂毒肽MP一1抗菌/抗内毒素作用的体内外实验研究 郭毅斌郑江 第三军医大学西南医院综合实验研究中心重庆400038 目的:明确蜂毒肽Mastoparan一1(MP一1)的抗菌/抗内毒素(LPS)作用以及对脓毒症模型小鼠的保护作用,并