叶绿素测定方法

叶绿素测定方法 一、 实验原理 叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中，并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光、热较敏感;在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种:叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。 叶绿素a 和叶绿素b 在645nm 和663nm 处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm 处。因此测定提取液在645nm、663nm、652nm 波长下的吸光值，并根据经验公式可分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。 二、 仪器、和试剂 仪器: 分光光度计、电子天平(0(01g)、研钵、棕色容量瓶(容量瓶包锡纸代替)、小漏 斗、定量滤纸、吸水纸、擦境纸、滴管。 试剂:丙酮;石英砂;碳酸钙粉 三、 操作步骤 取新鲜蔬菜1g，洗净吸干水分，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3mL80,丙酮，研成均浆，再加丙酮10mL，继续研磨至组织变白。暗处静置3,5min。 取滤纸1张置于漏斗中，用丙酮湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗，滤液流至50mL容量瓶中(外包锡纸);冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。 用滴管吸取丙酮，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用丙酮定容至100mL，摇匀。 取叶绿体色素提取液在波长665nm、645nm下测定吸光度，以丙酮为空白对照。 四、 计算 按照实验原理中提供的经验公式，分别计算植物材料中叶绿素a、b 和总叶绿素的含量。 ρ =12.72A-2.59Aa663645 ρ=22.88A-4.67Ab 663645 ρ =ρ +ρ =20.29A+8.05Aab645663 叶绿素含量=ρ*V /(m*1000) (mg/g) ρ:叶绿素质量浓度，mg/l V:提取液体积，ml m:样品质量，g PS:若处理干燥样品，则用80%丙酮(体积分数)