北豆根及刺五加提取物对正常小鼠血液流变学作用的比较

北豆根及刺五加提取物对正常小鼠血液流变学作用的比较 刘 蔚，车玲，孔华丽，刘 洁，温筱煦，孙 玲，冯端浩 (中国人民解放军总医院第二附属医院药剂科，北京 100091) 摘要 目的 研究比较北豆根提取物及刺五加提取物对小鼠血液流变学的作用。方-1-1法 实验一小鼠分别给予浓度为0.25g?,,和1.0g?,,的北豆根提取物～实-1-1验二小鼠分别给予浓度为0.25g?,,和1.0g?,,的刺五加提取物(n=12,ig)～ 连续给药3wk～并设生理盐水组和维生素E组作为对照。血细胞仪进行常规血 细胞测定～荧光偏振法测定红细胞膜流动性和微粘度。结果 北豆根提取物可使平 均血细胞容积,MCV,显著降低～血小板数量,PLT,显著升高～低浓度北豆根可显 著增加红细胞数量,RBC,～高浓度北豆根可显著降低白细胞数量,WBC,,低浓度北 豆根可显著增加红细胞膜流动性～降低微粘度～而高浓度北豆根的作用不明显。高 浓度刺五加提取物可显著性增加血小板数量,PLT,及红细胞膜流动性～降低微粘度～ 低浓度刺五加的作用不明显。结论 一定浓度的北豆根提取物及刺五加提取物可以 增加红细膜流动性～从而降低血液粘度～改善血液流变学指标。 关键词 北豆根,刺五加,血液流变学,红细胞膜流动性,微粘度 Comparative Studies on Extracts from Radix Rhizoma Menispermi and Radix Acanthopanacis senticosi in Influencing Mice Blood Rheology LIU Wei , CHE Ling , KONG Huali , FENG Duanhao, et al. (The Second Hospital Affiliated to PLA General Hospital,Beijing 100091,China) Abstract Objective To study the effect of Rhizoma Menispermi and Acanthopanax senticosus extracts on blood rheological changes in mice.Methods The first study two groups of mice were administrated by different doses of Rhizoma Menispermi extracts -1(0.25,1.0g?,,,n=12,ig) for 3wk. The second study two groups of mice were administrated by different doses of Acanthopanax senticosus extracts (0.25,1.0g?,, -1,n=12,ig) for 3wk. NS and vitamin E were set as controls. Blood ingredients were determined by blood cell analyzer, and erythrocyte membrane fluidity and microviscosity were measured by fluorescence polarization technique. Results Compared to the control group,Rhizoma menispermi extract decreased MCV and increased PLT significantly,RBC count was raised in low group,WBC count was decreased in high group; The erythrocyte membrane fluidity was increased and microviscosity was decreased in low group, but there was no significant change in high group. Acanthopanax senticosus extracts increased PLT count and LFU ,lowerde the microviscosity significantly in high group, but there were no significant change in low group.Conclusion Certain concentration of Rhizoma Menispermi and Acanthopanax senticosus extracts can significantly increased erythrocyte membrane fluidity, decreased blood viscosity and hemorheology factors are improved. Key Words Rhizoma menispermi; Acanthopanax senticosus; hemorheology; erythrocyte membrane fluidity; microviscosity 北豆根是防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauric-um DC.的根茎，是一种较常用的中药，在临床上已广泛应用，主要作用是抑菌消炎、镇咳祛痰、肌松和抗心率失常等。现已有成药北豆根片问世，功效为清热解毒、消肿止痛，可用于治疗气管 [1]炎等。实验证明，北豆根水提取物(RMW)和醇提取物(RME)对肿瘤细胞具有广谱的抑制作用，并能诱导肿瘤细胞凋亡，而北豆根多糖成分(RMP)虽没有抑瘤作用， [2]2+但有免疫调节作用。据文献报道，北豆根里的蝙蝠葛碱阻滞Ca通道，抑制血小板激活，亦可参与血小板聚集的抑制，此作用对改善心肌缺血、防止血栓形成，阻抑血小板活性增高所致冠心病和动脉粥样硬化的发生和发展、治疗缺血性心脏病诱发 [3]的心律失常，具有一定的意义。 中药刺五加是五加科植物刺五加,;,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,,(,,,,.,,,,,,,),,,,,的根和根茎,在我国使用已久。《本草纲目》称刺五加“补中益气,久服轻身耐老”。刺五加属滋补性中药,具有扶正固本、 [4]补肾健脾、益智安神的功效,主治脾肾阳虚、体虚乏力、腰膝酸软、食欲不振。实验研究明,刺五加能够降低全血低切、中切和高切黏度以及血浆黏度,抑制血栓形 [5,6]成,从而改善血液流变学指标。现代临床和药理动物研究表明刺五加在急性脑梗死、冠心病等心脑血管病的治疗方面显示出良好的前景。 本文观察比较了北豆根及刺五加提取物对小鼠血液流变学的作用，为它们在心脑血管方面的临床应用提供实验依据。 1材料与 1.1仪器 K-4500型血细胞分析仪(日本东亚公司);荧光分光光度计(日本日立公司,F-4000型);离心机(上海医疗器械厂)。 1.2药物与试剂:1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH,美国Sigma 公司,批号:103F 0483);淋巴细胞分离液(TBD生物技术发展中心,批号:20020320),北豆根(北京琪- 景饮片厂,批号:051185)，刺五加(北京海淀药品批发公司, 批号:051185)，维生素E(北京化学试剂公司, 批号:051073),其余所用试剂均为分析纯。 1.3药物制备 分别称取北豆根及刺五加各500g，用5000mL蒸馏水浸泡2h后加蒸馏水煎煮3次，过滤，合并3次滤液，加热浓缩至500mL，使每毫升煎剂含生药1g，煎剂原液为高浓度。单取100mL煎剂原液加蒸镏水稀释4倍制成低浓度提取物，置4?冰箱备用。称取60mg维生素E加食用油100mL,混匀配成油溶液为阳性对照，置 4?冰箱备用。 1.4动物 昆明种键康小鼠购自军事医学科学院实验动物中心(实验动物使用许可证号:SYXK11-00-0025),体质量(26?2)g,雌雄各半，适应环境2d后进行实验。 1(5实验分组与给药 1.5.1 北豆根实验 48只小鼠随机分为4组，正常对照组(0.9%氯化钠注射液),阳性对照组(维生素E),低浓度组(北豆根煎剂低剂量,0.25g/mL), 高浓度组(北豆根煎剂原液,1g/mL),灌胃给药，每日1次，每次0.5 ml/只,连续给药21d。 1.5.2 刺五加实验 48只小鼠随机分为4组，正常对照组(0.9%氯化钠注射液),阳性对照组(维生素E),低浓度组(刺五加煎剂低剂量, 0.25g/mL), 高浓度组(刺五加煎剂原液, 1g/mL),灌胃给药，每日1次，每次0.5 ml/只,连续给药21d。 1(6 血常规测定 于停药次日将小鼠摘眼球取全血20uL，kEkEDTA抗凝。用血细33 胞分析仪进行血液成分检测。 1(7 红细胞膜脂流动性的测定 于停药次日将小鼠摘眼球取全血，10g/L肝素抗 [7]7 凝,用淋巴细胞分离液分离得到RBC,参照文献制备红细胞悬液并稀释至1×10mL–1,配制DPH荧光探针并标记，在37? 孵育30min，荧光偏振法测定。测定参数:激发波长(EX)354nm，发射波长(EM)430nm，根据下列公式分别计算偏振度(P)，膜脂流动性(LFU)和微粘度(η):P=(Iv –Ih)/(Iv+Ih)式中Iv为起偏器和检测器光轴均在垂直方向的光强度，Ih为起偏器光轴在垂直方向，检测器光轴在水平方向的光强度。LFU=(P/Pr -1)/Pr 式中P=0.5, Pr为P的实测值。η=2Pr/最大最大 (0.46-Pr)式中0.46为常数。 1(8 统计学处理方法 组间数据用配对t检验,采用SPSS11.5统计软件完成。 2 结果 2(1北豆根及刺五加提取物对小鼠外周血象的影响 表1结果显示:阳性对照药维生素E可显著性升高正常小鼠外周血的红细胞(RBC)计数(P<0.01),北豆根提取物可使平均血细胞容积(MCV)显著降低(P<0.05)，血小板计数(PLT)显著升高(P<0.01)，低浓度北豆根可显著增加红细胞计数(RBC)(P<0.05)，高浓度北豆根可显著降低白细胞计数(WBC)(P<0.05);与正常对照组比较，高浓度刺五加提取物可显著性增加血小板计数(PLT)(P<0.05)。 表1 北豆根及刺五加提取物对小鼠外周血象的影响(x?s) Table 1 Effect of RM and RAS extracts on mice peripheral blood count(x?s) 9-112-1-19-1组别 N WBC/×10?L RBC/×10?L MCV/fL PLT/10?L 正常对照 12 4.50?1.91 9.20?0.57 52.13?1.58 1179.67?155.80 维生素E 12 4.80?1.79 10.10?0.56** 51.41?1.60 1118.00?160.57 低浓度北豆根 12 4.16?2.82 9.72?0.20* 50.08?0.87* 1699.00?191.92** 高浓度北豆根 12 3.76?2.40* 9.20?0.38 49.09?0.91** 1794.73?226.15** 正常对照 12 4.58?1.19 9.17?0.41 56.34?1.20 1015.45?239.86 维生素E 12 4.88?1.79 10.07?0.55** 55.40?1.60 968.00?160.56 低浓度刺五加 12 4.42?1.69 9.10?0.86 54.84?2.68 1102.78?178.05 高浓度刺五加 12 4.81?1.07 9.30?0.55 55.61?1.44 1129.90?161.30* *P<0.05, **P<0.01,与正常组比较 2(2北豆根及刺五加提取物对小鼠红细胞膜脂流动性的影响 表2结果显示，与正常对照组比较，北豆根提取物低浓度组可明显增加小鼠LFU，降低η，北豆根提取物高浓度组的作用不明显。刺五加提取物高浓度组显著增加小 P<0.05)，刺五加提取物低浓度组的作用不明显。同样条件下，鼠LFU，显著降低η( 维生素E使LFU明显增加，η显著降低(P<0.05)。 表2 北豆根及刺五加提取物对小鼠红细胞膜脂流动性和微粘度的影响(x?s) Table 1 Effect of RM and RAS extracts on mice LFU and microviscosity(x?s) -1-1组别 N LFU/mPa?s η/mPa?s 正常对照 12 1.560?0.064 5.023 ?0.395 维生素E 12 1.727?0.179* 4.551?0.263* 1.715?0.179** 4.487?0.191** 低浓度北豆根 12 高浓度北豆根 11 1.604?0.177 4.733?0.202 正常对照 12 1.531?0.156 5.227?0.586 维生素E 12 1.695?0.112* 4.736?0.263* 低浓度刺五加 12 1.562?0.199 5.183?0.723 高浓度刺五加 12 1.606?0.104* 5.030?0.233* *P<0.05,**P<0.01,与正常组比较 3讨论 血液流变学是一门新兴的学科，主要研究全血以及血细胞，尤其是红细胞、白细胞、血小板的流变特性，血管的力学特性以及微循环血液流变学，肺循环血液流变学等。血液的正常流动是维持生命活动的重要前提，在人体内任何一个有生命的细胞、组织、器官若得不到良好的血液供给，其生理功能将很快下降，甚至发生不可逆转的改变，最终导致机体的死亡。血液流变性质的异常将会引起机体血液循环障碍，其中尤以血液粘度为重要因素，诸多研究表明，像高血压、缺血性疾病甚至癌 [8,9]症等，虽有诸多治病因素，但均与血液粘度异常有关。维生素E是经典的抗氧化剂，能健全生物膜，保护血细胞。 本实验中将维生素E作为阳性对照，结果表明维生素E能提高红细胞膜脂流动性、 [10,11]降低微粘度，并能增加红细胞计数，显示出良好的改善血液流变学指标的作用。相同实验条件下，北豆根提取物低浓度组(0.25g/ml)与生理盐水组相比均可明显增加红细胞膜脂流动性、降低红细胞膜微黏度(P<0.01)，北豆根提取物高浓度组(1.0g/ml)对红细胞膜脂流动性及微黏度没有作用。刺五加提取物高浓度组(1.0g/ml)可以显著增加小鼠红细胞膜脂流动性、降低微粘度，刺五加提取物低浓度组(0.25g/ml)的作用不明显，说明不同种类的中药都有各自特定的治疗剂量，提示临床应掌握好恰当的使用剂量。 同时在我们的实验中还发现，在对小鼠血液成分检测中，与生理盐水组比较，北豆根水提物低高浓度二个剂量组均可显著增加小鼠的血小板数量(PLT)，显著降低平均血细胞容积(MCV)，其中低浓度组还可显著增加小鼠的红细胞数量(RBC)，此结果是否提示北豆根可以用于血小板低下的患者，还有待进一步的实验证明。北豆 [12]根提取物高浓度组可显著降低小鼠的白细胞数量(WBC)，与文献报道北豆根可以抑制炎性渗出和血细胞向炎症部位聚集(趋化)相一致，白细胞减少时，神疲乏力，容易感染，结合红细胞膜流动性数据结果，高浓度北豆根提取物对LFU无影响，提醒临床在北豆根的使用过程中，并不是浓度越高效果就越好，有的中药浓度高了不仅没有疗效，反而副作用增加，因此临床使用应严格掌握适应症，选取合适的剂量，适宜的疗程，并在用药过程中注意血常规的检测。 在对小鼠血常规检测中，刺五加提取物有轻微增加小鼠WBC、RBC及PLT的趋势，其中对PLT的作用较显著。在中医学上，刺五加为补益类中药，临床上可用来治疗 白血球减少症，具有活血作用可提高骨髓造血功能，本文实验结果也初步证实了刺五加的活血养血作用。 以上研究结果为北豆根及刺五加辩证施治血淤症提供了实验依据，提示北豆根 及刺五加在心脑血管病和微循环障碍防治方面均具有一定的应用前景，同时在临床 应用中还要注意其使用剂量、疗程、适应症及可能出现的不良反应，做到安全、合理、有效地利用中药资源。当然这些研究结果仅限于一种正常的动物，有一定的局限性，未来更深入的研究必将有助于对其药理作用的全面认识。 参考文献 1.高学敏.中药学[M] 北京:人民卫生出版社,2000:532. 2.梁文杰，刘东青，北豆根提取物对小鼠和人淋巴细胞及巨噬细胞作用的体外实验研究[J] 中国免疫学杂志，2005:21(1),56. 3.李仪奎,姜名瑛,李锐等.中国药理学,1992:70-71. 4.王志睿,林敬明,张忠义.刺五加化学成分与药理研究进展.中药材,2003,26(8):603-606. 5.睢大员,韩丛成,于晓风,等.刺五加叶皂苷对高脂血症大鼠血脂代谢的影响及其抗氧化作用.吉林大学学报(医学版),2004,30(1):56-59. 6.陶明飞,杨卫东.刺五加注射液对家兔血液流变学的影响.中国血液流变学杂 168. 志,2004,14(2):166- 7. 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