甲磺酸酚妥拉明口服液在健康志愿者体内的药代动力学及生物等效性研究（可编辑）

甲磺酸酚妥拉明口服液在健康志愿者体内的药代动力学及生物等效性研究（可编辑） 温州医学院 硕士学位论文 甲磺酸酚妥拉明口服液在健康志愿者体内的药代动力学及生物 等效性研究 姓名:林丹 申请学位级别:硕士 专业:药理学 指导教师:胡国新 20061101温州医学院硕士学位论文 甲磺酸酚妥拉明口服液在健康志愿者体内的 药代动力学及生物等效性研究 摘 要 目的建立人血浆甲磺酸酚妥拉明检测的高效液相色谱的,研究甲磺 酸酚妥拉明口服液在中国健康志愿者体内的药代动力学,并评价国产甲磺酸 酚 妥拉明口服液的相对生物利用度和尘物等效性。 系列;血浆经乙酸乙酯和正己烷萃取 方法?高效液相色谱仪为 ?.×哪, 浓缩,色谱柱为 ,,,保护柱 为保护柱.×. , ,,,流动相为乙腈一. ?~:。一水一 ?“:::,///,流速/, , 柱温?。检测波长为 ,参比波长舢,检测灵敏度为. 内标为卡马西平,对血浆中的甲磺酸酚妥拉明进行检测。?健康志愿者名, 随机双交叉单剂量口服武汉同药药业有限公司研制的甲磺酸酚妥拉明口服 液 试验制剂,和上海东方制药有限公司生产的甲磺酸酚妥拉明分散片参 比制剂,,剂量分别为 ,剂日间隔为周。分别于服药后 内多点 抽取静脉血;用高效液相色谱法测定血浆中甲磺酸酚妥拉明的浓度。 实验制剂和参比制剂的血药浓度用药代动力学程序计算处理,用非房室模 型估算药代动力学参数。以计算相对生物利用度:药代动力学参数 和。。,经对数转换后进行交叉实验的方差分析,同时进行双单侧检验,评价 生物等效性。 结果?甲磺酸酚妥拉明浓度在.~ ?范围内线性关系良好 .;最低检测限为.~;平均相对回收率为.?.%, 平均绝对回收率为.?.%;内、闩『白】精密度变异系数分别为.? .%和.?.%。内标物卡马西平的绝对回收率为.?.%;峰面 积变异为.%。?单剂量口服试验和参比制剂后血浆中的酚妥拉明的。,分别 为.?. 分别为 ?和.?. ?~:。, .?.和.?.:.:分别为.?.‘ 和.?.?~:。,分别为.?.? 和.?.叫。?九:和。。的%可信区间分别为 .~.%、.~.%和.~.%。?试验制剂和参比制剂的相对生 物利用度.?.%。?试验制剂和参比制剂间口?在给药顺 序问即:周期间差异无显著.:试验制剂的。.?%可信区’日】 为.~.%,叫。,的%可信区间为.~.%,巳,。的%可信区间为温州医学院硕士学位论文 .~.%:均符合生物等效性的要求。 结论?本研究采用的反相一高效液相色谱法快速、简便、灵敏、准确,可用于 血浆甲磺酸酚妥拉明的检测和临床药代动力学研究。?试验制剂与参比制剂的 人体相对生物利用度符合要求。?试验制剂与参比制剂的人体相对生物利用度 为.?.%,试验制剂与参比制剂具有生物等效性。 陕键词 甲磺酸酚妥拉明;药代动力学;相对生物利用度:生物等效性;高效 液相色谱法温州医学院硕士学位论文 , .?. ? ?.×啪, ,,, .×. 一. , ,,,?.一一 ?。:::,///,/, ?, ,, . ,. ? ? ,, . . .。。 ,,‘?。, ,. 。 .~ .,; ?~; .?.%: .?.%, .?? ? .%.?.%...?.%; .%.?。。.?. .?.~ ?~:? .?. .?. .?. :.?. ; ‘,?~. .?. .?.?~~: %.~.%、.~.% ‘。 ..温州医学院硕士学位论文 .~.%.多 ..%.互。 .. %.~.%,% .~.%,%四。.~.%. ? ? . ? .? .?.%, . :::: .温州医学院硕士学位论文 月 吾 甲磺酸酚妥拉明,化学名称为一,一二氢一一咪唑一一基甲基一甲苯 基氨基苯酚甲磺酸盐,分子式为.,。。,?,,,分子量.。 甲磺酸酚妥拉明为短效的非选择性肾上腺素~受体阻滞剂,能拮抗血液循 环中的肾上腺素和去甲肾上腺素的作用,使血管扩张而降低周围血管阻力,但对 正常人或原发性高血压患者的血压影响很小,用于诊治嗜铬细胞瘤。能降低外周 血管阻力,使心脏后负荷降低,右心室舒张未压和肿动脉压下降,心搏出量增加, 可用于治疗心力衰竭。也可用于男性勃起功能障碍的治疗。 本品口服后,分钟后起最大作用,持续?小时。药物主要由肝脏代谢; 大约有%的药物以原型从尿中排出。 常见的不良反应有鼻塞、心悸,也有面部潮红、头晕、乏力、胸闷等不良反 应。少数患者可有心率、收缩压、舒张压轻度变化,极个别患者可能出现直立性 低血压。 长期的试验表明,甲磺酸酚妥拉明没有明显的致癌、致突变和生殖毒性。在 对大鼠、小鼠和兔的试验中,未发现甲磺酸酚妥拉明有致畸或胚胎毒性。 武汉同药药业有限公司研制的甲磺酸酚妥拉明口服液属化学六类西药 新药,国家药品监督管理局批准进行人体相对生物利用度和生物等效性试验。 本课题首先建立与评价高效液相色谱法检测人血浆甲磺酸酚妥拉明浓度的 方法,在此法基础上研究国产甲磺酸酚妥拉明口服液在中国健康志愿者体内的 药代动力学和相对生物利用度,并评价生物等效性。以期为临床用药提供药代 动力学依据和质量保证。温州医学院硕士学位论文 参考文献:【 【.: .. . ”.七京:人民甲生山版辛十.,? 【】杨甘:杰.肾上腺受体阻断刺】.见:杨宝峰土编.约理学第八版.北京:人比甲生出版 社,, 【】王秀梅等.酚妥拉明治疗喘憋性肺炎不良反应的观察.护理研究,,: :? 【】李海华等.酚妥拉明致小儿不良反应例分析.临沂医专学报,.:: ? 【建华著.酚妥拉明致婴儿心力衰竭加重例报告 现代医药卫生..: : 【】孔晓红等.酚妥拉明不同给药方法对新生儿肺炎患儿的影响例分析.南京铁道医学院 学报..:: . 【? . :. .. ::?.. 【 一. . ::..【. ? . ;:?. 【】姚海军等.一肾上腺素受体阻滞剂与男性性功能关系的研究进展. . ? ..温州医学院硕士学位论文 第一章 高效液相色谱法检测血浆甲磺酸酚妥拉明的方法学 建立与评价 甲磺酸酚妥拉明的血浆药物浓度很低,已有采用气相色谱“’、高效液相色谱 法“?’和“质谱法检测血浆酚妥拉明浓度的报道。本实验旨在建立 ?法测定血浆中甲磺酸酚妥拉明的浓度,用于甲磺酸酚妥拉明口服液的药 代动力学研究时的血浆药物浓度检测。 第一节 试验材料 . 材料 .药品 甲磺酸酚妥拉明口服液,规格:/,批号:,标示量:. %,由武汉同药药业有限公司研制生产提供。 甲磺酸酚妥拉明分散片,规格:/片,含量:.%,批号:, 由上海东方制药有限公司生产。 .试剂 甲磺酸酚妥拉明化学对照品含量.%;由武汉同药药业有限公司提供: 卡马西平化学对照品公司; 甲醇色谱纯,天津市四友生物医学技术有限公司,: 乙腈色谱纯,天津市四友生物医学技术有限公司,; 乙酸乙酯分析纯,上海试剂总厂经贸公司,; 正己烷分析纯,国药集团化学试剂有限公司,; 磷酸二氢钠分析纯,汕头金砂化工厂, : 氢氧化钠分析纯,兰溪中星化工试剂有限公司; 磷酸分析纯,宜兴市第二化学试剂厂,; 十二烷基磺酸钠,分析纯,华美生物工程公司,; 实验用水均为三重蒸水本实验室自制。 .仪器 高效液相色谱仪为系列: 在线脱气机, 四元泵, 自动进样器, 温控箱, 二极管阵列检测器, 化学工作站 ...。温州医学院硕士学位论文 电子分析天平,梅特勒一托利多上海仪器公司; 旋涡混合器一,上海医科大学仪器厂; 高速离心机,上海安亭科学仪器厂; 石英亚沸高纯水蒸馏器,江苏会坛市月阳门石英玻璃厂。 第二节 方法学研究 .溶液的配制 .甲磺酸酚妥拉明溶液的配制 用灵敏度为.的电子分析天平准确称取甲磺酸酚妥拉明化学对照品 于容量瓶中,用甲醇溶解并定容至,得浓度为/的甲磺酸 酚妥拉明标准储备液。 用三重蒸水稀释成甲磺酸酚妥拉明浓度依次为 /、 /、 ?/、. /的标准应用液临用时配制。 .卡马西平标准品溶液的配制 用灵敏度为.的电子天平准确称取卡马西平标准品,用甲醇溶解, 于容量瓶内定容,最终浓度为/。然后用甲醇稀释成浓度为姐/ 的标准应用液内标应用液。 . ./ ,溶液的配制 用灵敏度为.的电子分析天平准确称取:。?: .,用三 重蒸水溶解并定容至;用磷酸调节.。 . / 溶液的配制 用灵敏度为.的电子分析天平准确称取 .,用三重蒸水溶解 并定容至,得浓度为/ 溶液。 .色谱条件 ?.×, ,, 色谱柱: 。, 保护柱:?保护柱. ,, 流动相:乙腈一./ :一水一/ :::,// 流速:./ 柱温:? 检测波:为,参比波长: 检测灵敏度:.。 .血浆样品的处理 准确吸取待测血浆样品.于具塞试管中,加入?/的卡马西平 内标工作液“,混匀后后加入./ 溶液 碱化血浆。再加 入乙酸乙酯.、正己烷.,漩涡混匀。静止后,转移上层有温州医学院硕士学位 论文 流动 机相.于另一刻度离心管中,?水浴条件下氮气流欢干。用 相复溶,取复溶液于自动进样器的样品瓶中,设定 进样检测。 .方法的专属性 甲磺酸酚妥拉明纯标准品、空白血浆、甲磺酸酚妥拉明血浆标准品以及 健康受试者血浆样品,经分析测定得到的色谱图见图。由图可见在本实 验条件下,甲磺酸酚妥拉明的色谱蜂能完全分离,没有明显的内生杂质峰干 扰。甲磺酸酚妥拉明的保留时间为.,内标的保留时间为.。可见 本方法具有较高的专属性。 . 标准曲线的制备及最小检测浓度 .血浆标准曲线的制备 取支具塞试管,依次加入不同浓度不同体积的甲磺酸酚妥拉明标准 工作溶液,再加入空白血浆.,配成浓度相当于.、.、.、.、.、 .、. /的血浆样品,再按.项处理方法处理后,测定甲磺酸酚妥 拉明峰面积.、内标峰面积。,以。/。为纵坐标,以所对应各点浓度为 横坐标绘制标准曲线。经最小二乘法线性回归,得甲磺酸酚妥拉明的血浆标 准 曲线回归方程为.。/。..。结果见表、图和图。 表 甲磺酸酚妥拉明血浆标准曲线结果 温州医学院硕士学位论文铲融??删?拍巾栅,讲 棚 号 。 簧 。 景 . : 。 一~ 一丽。?蚪俺加‰‘痂?例鲕一匪撕研 聃“ . ? ?: ‘ 一二一:二.二二:一:’可一二一王? ” ”; : ‘ ;誊 宝 .: 』 : : ; ?。:,,:一;??一‘二;.。,.. .舶嘲佰琊?谨糯坷茆面一? 删伸 . 。 . 了?,,?、 譬芒蕈乱晶备卜 : 。 ’ .. 馏 ’一.. 图甲磺酸酚妥拉明的高效液相色谱图:标准品, :空白血浆,; 血浆标准, :样品一口服.后血浆样品,浓度为./,: : . : . , ,:? ./温州医学院硕士学位论文 . . . 《 ..; . , . . . . / 图.甲磺酸酚妥拉明的血浆标准睦线. .最低检测限的确定 按信噪/:,最低可测血药浓度为./。 . 日内精密度试验 取空白血浆份,每份.,各加不同量的甲磺酸酚妥拉明标准工作溶 液,配成低、中、高三种浓度.,.,.。‖的血浆标准品溶液, 每种浓度份,再按.项的血浆样品处理方法处理。各浓度分别在同一同内测 定,计算日内精密度。上述三种浓度测定结果的均小于%结果见表。 表血浆甲磺酸酚妥拉明的日内精密度, ., ? . 日间精密度试验 取空白血浆份,每份.,各加不同量的甲磺酸酚妥拉明标准工作溶温州医学院 硕士学位论文 液,配成低、中、高三种浓度.,.,./的血浆标准品溶液, 每种浓度份,再按项的血浆样品处理方法处理,在连续不同同内重复测定 次,计算开问精密度。上述三种浓度测定结果的均在.%范围内结果 见表. 表血浆甲磺酸酚妥拉明的日间精密度, .,. 相对回收率试验 取空白血浆份,每份.,各加不同量的甲磺酸酚妥拉明标准工作 溶液,配成低、中、高三种浓度.,.,./的血浆标准品溶 液,每种浓度份,再按.项的血浆样品处理方法处理后测定,依据标准曲线 计算检测量。以检测量与加入量的比值计算相对回收率。上述三种浓度测定 结果均在~%范围内。结果见表 表血浆甲磺酸酚妥拉明的相对回收率, . , . 绝对回收率试验 取空白血浆份,每份.,各加不同量的甲磺酸酚妥拉明标准工作 溶液,配成低、中、高三种浓度.,.,./的血浆标准品溶 液,每种浓度份,再按.项的血浆样品处理方法处理后测定,记录甲磺酸 酚妥拉明的峰面积,为该浓度血浆标准的峰面积。另取锥底试管支,三个一 组;每组加入与配制血浆标准品溶液相同的甲磺酸酚妥拉明标准品溶液,挥 干 后直接用流动相此复溶,“进样检测;记录不同浓度甲磺酸酚妥拉明的 峰面积,为该浓度的纯标准品的峰面积。计算血浆标准的峰面积与纯标的峰 面温州医学院硕士学位论文 积的比值,即为绝对回收率结果见表。 表血浆甲磺酸酚妥拉明的绝对回收率,士 . ,士 .样品稳定性 .室温放置和冰冻保存血浆样品的稳定性 配制一定浓度的甲磺酸酚妥拉明标准血浆样品份,其中份在室温下 放置、、、、、小时后再经血浆样品处理方法处理后进样检测,记 录结果。另外份分别在.?冰箱冰冻保存周、周和周后,再经血浆 样品处理方法处理后进样检测,记录结果。 结果显示:甲磺酸酚妥拉明血浆样品在室温放置小时以内测定,结果 没有明显变化;在一?冰箱冰冻条件下冷藏一个月内测定,结果同样没有明 显变化。晚明血浆样品在室温放置和冰冻保存的条件下,均有很好的稳定性 结果见表。 表血浆样品的稳定性试验结果 ..处理后的血浆样品在自动进样器内的稳定性 本试验所采用的高效液相色谱仪的进样器为全自动进样器,最大样品数 有个,第一个样品与最后一个样品的检测时间有较长的时间间隔,故应温州 医学院硕士学位论文 考察处理后的血浆样品在进样器的样品瓶内放旨的稳定性。配置一定浓度的 甲磺酸酚妥拉明血浆标准溶液,按样品处理方法处理后,分别检测在进样器 内放置,,,。小时的浓度,考察其稳定性结果见表。 表处理后血浆样品在自动进样器内的稳定性试验结果 ..分析方法质量控制 本研究采用内标法检测,内标的量直接影响检测结果的准确性,故在血浆 样品的处理过程中,每次所加入的内标的量一定要准确。 配制足够量甲磺酸酚妥拉明血浆标准品溶液作为质控样品,分别于血浆样 品检测的、中、后进行测定,控制分析质量。 当处理的血浆样品,必须当日检测完毕。 为了防止因流动相或其他原因造成的保留时间的偏差,每天检测前要用酚 妥拉明和卡马西平的纯标准品进行定性分析。 第三节 讨论 甲磺酸酚妥拉明的分子结构含有酚羟基,遇水易氧化”,它的水溶液于 内即变为淡红色,加入酸可以抑制其氧化,但时蚓短,不超过 。本实验 使用甲醇作为配制溶液的溶剂:可以很好克服这一问题。 .紫外波长的选择 取甲磺酸酚妥拉明对照品及其分散片细粉适量分别加盐酸一甲醇溶液”制成 约 /的溶液,按照分光光度法,在~波长范围扫描绘制紫外吸 收光谱图,结果在波长处有最大吸收见图。且内标物卡马西平的最大 吸收波长为,与此波长接近,故选择为测定波长,所测甲磺酸酚妥 拉明与内标物在波长处均有较好的紫外吸收,提高了分析检测的灵敏度。温 州医学院硕士学位论文 .图甲磺酸酚妥拉明紫外扫描图 . . 色谱条件的选择 色谱柱 具有独特的单官能团硅烷,带有较大的二异丁基 ?空问位阻侧链基团,保护关键的硅烷键在低条件下免受消解的 进攻,填料不封端,出于其高线度,低酸性的硅胶对酸性,碱性及中性化 合物具有优异的峰形,因此选择 色谱柱为分析柱,其分离效果 及峰形见图均非常理想。 文献”。分别采用醋酸溶液取冰醋酸.加水至,用三乙胺调 节值至.一甲醇:、乙腈一磷酸二氢钾.加水稀释至, 用%磷酸调.:作流动相,其灵敏度及分离效率均不及本方 法。 是阴离子表面活性剂,加入有机改性剂如甲醇至水相中,可提高柱效。 在本试验过程中,曾用乙腈一水:做流动相,但所得甲磺酸酚妥拉明呈 明显拖尾现象,理论塔板数不高:在加用少量后,以乙腈./ :,一 水一/ :::,//做流动相,甲磺酸酚妥拉明的保留时 间稍向后延,峰形得到明显改善,完全扫除拖尾现象,所得甲磺酸酚妥拉明峰 形尖锐,对称,保留时间仅为.,理论塔板数高达。 . 内标物的选择 本实验所用的内标为卡马西平,在较广泛的流动相范围内,均能获得较 .温州医学院硕士学位论文 对称的峰形,冷藏半年和自然存放个月,含量几乎没有变化。且在? 范围内有较好的紫外吸收峰。实验证明卡马西平在较短的时’内既能与甲 磺酸酚妥拉明完全分不,又不致相隔太远且无血浆杂质干扰,且对照品易于 购得,因此选用卡马西平作为内标。 . 提取条件的选择 碱化血浆可以降低甲磺酸酚妥拉明在血浆中的溶解度,有利于甲磺酸酚妥 拉明的萃取,本试验采用./ 溶液碱化血浆,乙酸乙酯一正己烷混 合溶剂提取,结果表明其提取效果理想,回收率稳定,且操作方便,杂质干 扰较小。 在试验过程中曾试图用乙酸乙酯、正己烷、氯仿直接提取,所缛出回收 率明显偏低,杂质干扰也非常严重,尤其是乙酸乙酯。经碱化后,分别用乙 酸乙酯、下己烷、氯仿提取,提取效果有所改善,乙酸乙酯提取效果较好, 但杂质相对较多,芷己烷提取回收偏低,氯仿提取效果较好也存在一定杂质。 由于氯仿毒性较大,本试验选用乙酸乙酯中加入少量的正己烷可以消除部分 杂质干扰。 . 评价 本试验建立的高效液相色谱法检测血浆甲磺酸酚妥拉明浓度,专属性高, 相对回收率均在~%范围内,绝对回收率大于%;日内和日间变异均小 于%,符合生物等效性指导原则关于生物样品分析方法的基本要求,可用于甲磺 酸酚妥拉明人体药代动力学和生物等效性试验的血药浓度检测。温?医学院硕士学位论文 第二章 甲磺酸酚妥拉明口服液的药代动力学及生物等效性评价 关于甲磺酸酚妥拉明口服液的药代动力学和生物等效性研究至今国内未见 报道。本章拟利用第一章建立的高效液相色谱法,参照药物制剂生物等效性指 导原则”。”的有关要求,进行甲磺酸酚妥拉明口服液单次给药的健康志愿者体内 的药物代谢动力学研究,并将武汉同仁药业有限公司研制生产的甲磺酸酚妥拉 明口服液与上海东方制药有限公司生产的甲磺酸酚妥拉明分散片进行比较,考 察甲磺酸酚妥拉明口服液的人体相对生物利用度和生物等效性。 第一节药品及来源 试验制剂 ,:甲磺酸酚妥拉明口服溶液,规格: ,批号:,标示量:.%。武汉同药药业有限公司研制 提供。 参比制剂 ,:甲磺酸酚妥拉明分散片,规格: /片,含量:.%,批号:,由上海东方制药有限公司生产。 第二节健康志愿者的选择、研究方案与样品采集 .志愿者选择”’ 名健康男性志愿者,年龄~,体质量.士.,身高: ,体重指数./。无心、肺、肝、肾、消化道、神经系统、精神 异常及代谢异常等病史,无烟酒等不良嗜好。经体检心率、血压、心电图, 血尿常规、肝肾功能及胸透等项正常见表。试验前两周内未服任何药物。 试验前由本课题负责人向参加试验的志愿者试验目的、药物特性、临床 应用范围及可能出现的主要不良反应等,然后由受试者签署知情同意书并获 校医学伦理委员会批准。 .研究 采用单盲、单剂量、随机、×交叉实验设计。即将名健康受试者随机 分为两组,每组各名。组先服试验制剂,然后服参比制剂,两次服药相 隔二周,以。表示, 即。组服药顺序为。给药前小时进清淡晚 餐后禁食过夜,于次同早晨空腹曰服试验制剂或参比制剂,用 温歼水送服。服药后可以饮水;服药后进统一标准午餐。采血总时间为 小时。 .给药方法及剂量 试验剂量:,参比剂量:,交叉口服。 采用两制剂双周期交叉的试验设计,受试者按随机原则分成组,两周期交温 州医学院硕士学位论文 叉的’隔为。名受试者分别于清晨:口服试验制剂或参比制剂, 温不水送服,服药后方可再饮水,后进统一餐。 .研究条件 .受试者服药前时及采血期间禁用烟、滔、咖啡类及其它含药品的饮料, 服药后禁止剧烈体育运动,办不得长时间卧床。试验前进清淡晚餐后禁 食,于次清晨时按随机分组的安排分别服用试验制剂或参比制齐, 温不水送服。 .服药后方可再饮水,后进统一餐;服药及取血期间均留在期临床试 验室观察。经周清洗期后按同样程序交叉服用两种制剂。 .血浆样品的采集 服药前取空白血,服药后分别于.,,,., .,,.,,,,,,取静脉血,注入肝素化的 试管,离心?.、 取血浆,一?冰冻保存备测。 .临床观察 服药及取血期间均留在期临床试验室观察。试验期间由主治医生在备 有必要的抢救药品及设备的条件下监护,观察受试者有无以下不良反应:过 敏、恶心、乏力、皮疹、面部潮红、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等,详细记录, 必要时及时处理。 第三节数据分析方法 .房室模型参数估算法 对第二节中采集的样本进行不同时间血药浓度的测定,试验结果采用 ,.计 算程序进行数据处理,主要 通过拟合度和法进行判断,确定模型,越大,越小,则认为该模型拟 合得越好。 .非房室模型依赖性参数估算方法 吸收总量用血药浓度.时间曲线下面积,即表示 血药峰值浓度,用。。表示 达峰时间,即药物达到血药峰值时间,用。表示 为平均驻留时间 半衰期用/表示,/按./,求出,九是末端消除速率常数, 用对数血药浓度.时间曲线末端直线部分斜率求得。 其中。。。和。为实测值,按梯形法计算求得。 血浆药物浓度.时间曲线下面积和平均驻留时间分别用温州医学院硕士学位 论文 下列公式计算: 。:?甚?。. ‘一。?。/九 厶??广.“抄五‰去 /《。, 式中。为最后取样点血药浓度,九是末端消除速率常数。 .生物利用度估算方法 用梯形法求得,时间用.,计算公式如下: :??×% 、 × 式中、分别为试验制剂和参比制剂的药时曲线下面积,、 分别为参比制剂和试验制剂的给药剂量。 .统计学分析及生物等效性评价方法 对试验制剂和参比制剂的生物等效性评价,从药物吸收程度和吸收速度 两方面进行。。。和经对数转换后,采用交叉试验设计的方差分析,分 析制剂间、个体间及周期间变异的统计学意义。。。用实测值,采用非参数秩 和检验。 .双单侧检验方法 对。。。和经对数转换后采用双单侧检验。检验假设:无效假设 :.?或.?,备选假设:.。其中 和分别为试验制剂和参比制剂的参数对数均值,取.,.。计 算统计量: :塑二旦二竺圣 ‘’ // 掣 其中,为样本误差均方的平方根,来自方差分析。、服从自由度 为的分布为误差均方自由度,即可由单侧分位数表得到。当 ,、,同时成立,则拒绝,接受生物等效性假设。 .非参数秩和检验方法温州医学院硕士学位论文 对。。采用加符秩和检验,。。用实测值。用加符 秩和检验法区分不同处理所得数据时,差值为零的对子不提供信息,检验时 这些数据被弃掉。将两组。。差值排序后,在序号上加上差值符号,就形成 一系列的加符秩。将秩中同号者求得秩和,将秩和中绝对值较小者与, 时样本容量下临界值相比,当这个秩和小于或等于临界值时即有显著性差 异,为生物不等效制剂;反之,则为生物等效制剂。 .检验标准 以试验制剂的%信限落在参比制剂~%范围内,。。。 的%可信限落在参比制剂~%范围内,。。经非参数秩和检验无 差异,可认定受试制剂和参比制剂的生物等效性。显著水平.。 第四节 试验结果 .血浆药物浓度.时间数据 名健康志愿者随机双交叉单剂量口艮试验的酚妥拉明口服液和 参比的酚妥拉明分散片,用法测得不同时间的酚妥拉明的血浆药物 浓度一时问数据见表、。平均血药浓度.时间曲线见图:。不同时间点的平均 血浆药物浓度比较见图。? ? 卯? ?? 加? 一一昌商一葛扫。。一量墨上山 . 图.名健康志愿者单剂量口服酚妥拉明试验和参比制剂后血浆平均药物浓度 一时 问曲线 . 温州医学院硕士学位论文 .药代动力学计算结果 试验制剂和参比制剂的血浆药物浓度经 ,.计算程序处理,用非房室模型估算药代动力学参数。吸 收总量用血药浓度.时间曲线下面积,表示;血药峰值浓度,用。。表示; 达峰时阃,即药物达到血药峰值时间,用。。表示;为平均驻留时间;半 衰期用/。表示,用浓度.时间曲线末端计算,;./。其中。。。和。。 为实测值,按梯形法计算求得。名健康志愿者单剂量口服试验的酚妥拉 明口服液与参比的酚妥拉明分散片的主要药代动力学参数以及实测值。。。和 。。,分别见表、表和表。平均的药代动力学参数见表。 .相对生物利用度 以试验制剂和参比制剂的时’日的曲线下面积计算,人体相对 生物利用度.:.%。温州医学院硕士学位论文 表单剂量口服甲磺酸酚妥拉明试验与参比制剂的主要药代动力学参数 . .士. .. 。。 .士. 。。.士. . . . . . . . . ‘/ . . . . ’/ .生物等效性分析 单剂量药代动力学参数和。。,经对数转换后进行交叉实验的方差 分析,结果显示试验制剂和参比制剂间和。。,在给药顺序间即:周 期间差异无显著.,在制剂问和个体问均差异显著.,有统 计学意义。同时进行双单侧检验。的%可信区间为.~,%, 的%可信区间为.~.%,。。的%可信区间为.~.%, 均符合生物等效性的要求,见表和表。 对试验制剂和参比制剂的。。进行非参数检验,表明单剂量口服试验制 剂和参比制剂的达峰时间存在明显差异,试验制剂的达峰时间明显比参比制 剂的达峰时间提前,说明试验制剂有较快的吸收速度。 .临床观察 整个研究期间,例健康志愿者中无一例因不良反应而终止试验,其血 液、血液生化、尿常规以及心电图检查在试验前后未见异常,偶有饥饿感的 轻微胃肠道反应。说明本品在试验剂量下表现出良好的安全性。 第五节结论与讨论 .讨论 药代动力学、生物利用度和生物等效性研究是临床药理学的重要组成部分, 同时也是评价药物的体内过程以及吸收程度和速度的主要指标。 生物利用度是指剂型中的药物被吸收进入血液的速度和程度;生物等效性 试验是指一种药物的不同剂型在相同试验条件下,给予相同的剂量,其吸收速 度和程度没有明显的差异。口服或局部用药的制剂,其活性成分的吸收受多种 因素的影响,在这些因素中,已知影响吸收的因素有制剂工艺、药物粒径、晶 型或多晶型,处方中的赋型剂、填充剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、包衣材料、温州医学院硕士学位论文 溶剂、助悬剂等。生物利用度是保证药品内在质量的重要指标,而生物等效性 则是保证含同一药物的不同制剂质量一致性的主要依据一。 在进行生物利用度和生物等效性评价时,首选色谱法,如、以及 .、.联用技术,这些方法分离和检测同时进行,特异性好,选择相 应的监测器灵敏度可达生物样品分析的要求。由于生物样品取样量少、药物浓度 低、内源性物质的干扰等多种因素影响生物样品的测定,为保证方法的可靠性, 必须建立生物样品分析方法,并对方法进行验证。 对普通制剂进行生物等效性评价时,应采用~岁的男性健康志愿者。 同一批试验者年龄不宜相差岁,体重应相近:身体健康,无心、肝、肾、消 化道、代谢异常、精神系统疾病等病史,无过敏史,无体位性低血压。受试者 的 例数应~例。 进行生物等效性评价的试验制剂应为符合临床应用质量标准的放大试验产 品,并提供体外溶出度、稳定性、含量或效价等数据。进行绝对生物利用度 研 究时选用上市的静脉注射剂为参比制剂;进行相对生物利用度和生物等效性 研 究时,应选择国内外同类上市的主导产品作为参比制剂。 通常采用双周期两制剂交叉试验设计,洗净期通常为周或周。服药前取 空白血样,总采样点不少于个点;取样持续到~个半衰期或血药浓度为 。。的,~/。主要药代动力学参数为消除半衰期、。。、峰时间。 和。。。。和。。用实测值表示,不得内推。 进行生物等效性评价时,应先将和。。数据进行对数转换,然后进行 方差分析和双单侧检验处理,如果试验制剂参数的%置信区间落在参 比制剂的%~%范围内,。落在%~%范围内,则认为试验制剂与 参比制剂生物等效。 本研究结果显示,名健康志愿者单剂量口服试验和参比制剂均含 甲磺酸酚妥拉明后,以甲磺酸酚妥拉明计算的试验制剂的。。为.? .?’,参比制剂的。。为..;按照生物等效性 试验的指导原则,最后采样点的浓度为。。的。/~/,本试验的取样点 符合要求。本研究的高效液相色谱法检测的最低检测限为:血浆甲磺酸酚妥 拉 明为./,已经满足检测的需要。 单剂量口服,试验制剂甲磺酸酚妥拉明口服液的。的%可信区间 为.~.%,的%可信区间为.~.%,。。的%可信区间为温州医学院硕士学位论文 ,~.%;按照生物等效性判定标准,试验制的%置信区问落在 标准参比制剂的~%,。。,落在~%,即可认为生物等效‘】。 .结论 名健康志愿者单剂量服试验的甲磺酸酚妥拉明服液和参比的甲磺 酸酚妥拉明分散片后,血浆药物的主要药代动力学参数显示:试验制剂和参 比制剂问和。。。,在给药顺序问即;周期间差异无显著., 在制剂闻和个体间均差异显著.。有统计学意义。达峰时间存在明显 差异,试验制剂的达峰时间明显提前。以试验制剂和参比制剂的计算 人体的相对生物利用度.士.%。试验制剂与参比制剂具有生物学 等效性。 本研究以上海东方制药有限公司生产的甲磺酸酚妥拉明分散片为参比制 剂,对武汉同药药业有限公司研制的甲磺酸酚妥拉明口服液的相对生物利用 度进行了单剂量给药的试验研究。通过对血浆中酚妥拉明浓度的测定,研究 了甲磺酸酚妥拉明口服液的体内血药浓度变化过程。和。。经对数转换 后进行方差分析和双单侧检验,。。。进行秩和检验。结果表明:单剂量口服 试验制剂和参比制剂后,和。。在生物等效性范围内,。。存在显著性差 异。单剂量口服试验的甲磺酸酚妥拉明口服液和参比的甲磺酸酚妥拉明分散片的 人体相对生物利用度为.:.%;统计学分析表明,试验制剂与参比制剂 具有生物学等效性,试验制剂的达峰时间明显提前。察阁 耙呔武米 靶球武张 靶呔氓长 靶咪武长 粑酞武伥 牡呔武怅 靶暾喂长 壮酞武伥 靶政武长 粘咪氓张 壮酞文伥 靶昧武张 靶呔武长 粘呔氓伥 袒咪武张 糨昧武张 粘酞武长 粘暾医张 靶呔武长 粑咪武张 匝目 匝裂牡皓 囤靶船茸 陋挺挺悟 圈垠粘皓 豳拱牡拦 匝辣壮巨 匝犍挺世 匝垛她皓 匝辣靶邕 囝耀轻茸 醴操靶点 圈域粑仨 疆张粘 圈挺她拦 匿挺艇肖 阿犍耗拦 岛梃糨巨 匾挺粑皓 函澳靶 岛挺挺悟 四卜 寸卜 。卜 ?心 。卜 寸心 寸卜 卜 寸? 寸 ? ? 卜 乱岫 卜 心 ? 寸崎 卜 卜.卜 饥.吼岭 占一鼙誉 心. . 吼 ? .吼 .小 ?夺 叶夺 寸小 吼 .? 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. .;: . , , 【】 , . ;:?. 单利,高春生,崔光华,反相高效液相色谱法测定甲磺酸酚妥拉明速崩片的含 量,药物 分析杂忠。,:?。 【翁水旺,沙吉达,法测定甲磺酸酚妥拉明分散片的含量,中国现代应用鲔学 杂忐, ,?。 , 【李文英,常俊兰,测定甲磺酸酚妥拉明片有关物质,中国药学杂志,,: 】魏伟,曾繁典,徐叔云.新药的评价与管理.徐叔云主编.中华临床药物学上 册.北京,人卫生出版社.: 中华人民共和国卫生部约典委员会.中华人民共和国药典二二部【.北京:化 学业 出版社,:附录药物制荆人体生物利用度和生物等效性试验指导原则,附录: ? 】刘吕孝编.实心药物动力学.北京,中国医药科技出版社,:温州医学院硕士 学位论文 附录: 缩词简表 缩写 英文 中文试验制剂参比制剂 曲线下面积 时间曲线下面积 一时间曲线下面积 ?。 时间曲线下面积 ? 。 峰浓度 峰时间半衰期 “ 平均驻留时间 . 时间平均驻留时间 一时间平均驻留时间 ? 凰 一时间平均驻留时间 生物利用度 高效液相色谱法 髓变异系数温州医学院硕士学位论文 附录: 已发表的论文 .甲磺酸酚妥拉明口服液的人体生物等效性研究,中国药学杂志,,: ?第一作者 .冰片对卡马西平在家兔体内药代动力学的影响 中国药理学通报, :?第三 .纳洛酮对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤血浆?和的影响 中国药理学通 报,:?第三 ,:? .醒脑静注射液促记忆作用的研究 中药药理与临床 第三 .不放中心实验室,提高实验室的综合效益中国医学理论与实践, :第二 参加的课题: .毒鼠强的毒代动力学研究和二巯基丙璜钠促排作用 编号温州市 科技局 排名第一 .抗缺血、缺氧性脑损伤及机制研究编号温州市科技局 排 名第二 .一苹果酸的结构改造及其促记忆作用研究 编号省卫生厅 排名第三 .缺氧缺血性脑损伤内源性神经递质的变化及药物干预 温州市科技局 编号 排名第三 获奖情况 抗缺血、缺氧性脑损伤及机制研究 获浙江省医药卫生科技创新奖三 等奖 排名第二温州医学院硕士学位论文 致谢 衷心感谢我的导师胡国新教授三年来对我学业、科研上的教导与鼓励。导 师严谨的治学态度、实事求是的作风及平和谦虚待人处事的态度使我受益匪 浅 衷心感谢河南科技大学医学院邱相君老师的大力支持和帮助 衷心感谢朱桐君教授、陈醒言教授、潘建春教授多年来给我的指导、关心、 帮助和支持 衷心感谢药理教研室全体老师的帮助和支持衷心感谢分析测试中心全体 同仁的理解和鼓励温州医学院硕士学位论文 综述 一肾上腺素受体阻滞剂用于男性性功能障碍治疗的研究进展 肾上腺素受体阻滞剂是作用于自主神经系统药物,随着其在嗜铬细胞瘤、前 列腺增生等疾患的应用,其药理学及临床应用不断深入及拓展。 一、肾上腺素受体家族、相应药物名称及其组织分布 属于蛋白耦联受体,根据其药理学特征、耦联的蛋白性质及选择性 配体种类,用技术己克隆出个亚型:..、。 、。、。、。、 ,、 、。。,.亚型进一步分为,野生型, : 。。。变异 型种次亚型。,信号转导效应是活化磷脂酶、、:,开放通道。 的作用是抑制环化酶,活化磷脂酶、:、抑制’通道,开放通道,起负 反馈作用。 激动剂是去甲肾上腺素,阻滞剂是酚苄明、酚妥拉明。.激 动剂是去氧肾上腺素苯肾上腺素,阻滞剂是特拉畔嗪、阿呋唑 嗪、多沙唑嗪、哌唑嗪、乌拉地尔、萘哌 地尔;“阻滞剂是;..及.。阻滞剂坦索罗辛 ;:激动剂是可乐定、氯压定及右美托咪定 ,阻滞剂是育享宾及阿替美唑 畸】 成人前列腺组织中含有丰富的肾上腺素能神经纤维,其中大部分存在于前列 腺基 质平滑肌中。实验证实,良性前列腺增生症, 组织的基质成分以及。受体密度较正常前列腺组织明显增加。目前认为,基 质 组织中含有三种不同的.受体亚型,分别为。.。和?,其中..约占%。 在下常前列腺组织与组织中,各种受体亚型所占的比例各不相同“。另外, 研究发现在前列腺腺管上皮中也存在.受体,其中以.。为主要成分“,由于目 前尚未发现前列腺腺管上皮中存在肾上腺素能神经纤维,因此该受体存在意 义及 其功能尚有待于进一步研究。 前列腺组织的收缩功能主要是由。受体介导的,但其他亚型也起着不可忽 视的作用。最近,等”发现前列腺组织中尚存在一种对哌哗嗪亲和力 较低的.受体亚型??,。受体亚型。目前这种亚型尚未被克隆,其功能有待于 进一步研究。 临床实验表明,多沙畔嗪及特拉哗嗪等.受体阻滞剂可以诱导上皮及 基质组织细胞凋亡,抑制良、恶性前列腺组织的增殖,而坦索罗辛却无上述作用。 同时研究表明,这种诱导细胞凋亡作用与阻滞。受体介导无关”。多沙唑嗪及