活化部分凝血活酶时间(APTT)测定
文件编号:SJ/QS-26-OP-XY-059
版本版次:A/01
生效日期:2005.01.01
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活化部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time,APTT)
2.1手术前的检测
2.2 DIC的协诊
2.3抗凝药物治疗监测
2.4凝血因子检查
2.5循环血液中抗凝物质和一些疾病协诊等
:
3.1检测原理:全自动血凝仪测定,散射光凝固法检测——确定量的血浆样本(50μl)经过一定时间(3min)温育后,加入部分凝血活酶时间反应试剂(50μl),加温1min,加入0.025MCaCl50μl,加2
温4min,采用波长660nm的光照射反应物,通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程(纤维蛋白原
转化为纤维蛋白)中的浊度变化,从散射光光强度的测定可得凝集曲线,反应物凝固的时间即活化部分凝
血活酶时间。
3.2反应方法学溯源:37?条件下,以鞣花酸激活因子?和?,以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板,在2+Ca参与下,观察贫血小板血浆凝固所需时间,即为活化部分凝血活酶时间,是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验.
4.1重复性:CV?2%
4.2
和计算参数:
单位 秒(S)
4.3样本量:50ul,试剂量:50ul激活剂,50ul CaCl 2
4.4检验时间:在最长检验时间之内测出结果,标准设置最长检验时间:190秒 4.5精密度范围:1.3~6.0%
:
血浆
容器采用真空负压专用抗凝管,添加剂类型为0.109M枸橼酸钠
7.1激活剂:Cephaloplastin试剂(Dade Actin Activated Cephaloplastin Reagent)
7.1.1商标:德灵(DADE BEHRING)
7.1.2包装规格:10×2ml
7.1.3货号:B4218-1
7.1.4成分:脑磷脂(从干燥兔脑粉中提取)加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的鞣花酸溶液
7.1.5使用方法:液体试剂,直接使用
1
7.1.6储存:未开封试剂2~8?贮存到说明书上有效期,开盖后2~8?有效期7天,不能冰冻。未被污染的试剂稳定期是:2~8?3年、18~25?1年、37?2天;
7.2氯化钙溶液(Calcium Chloride Solution)
7.2.1商标:德灵(DADE BEHRING)
7.2.2包装规格:10×15ml
7.2.3货号:ORHO37
7.2.4成分:0.025mol/L的氯化钙溶液
7.2.5使用方法:液体试剂,直接使用.
7.2.6储存:没开盖试剂放2~8?存放至试剂瓶上有效期.开盖后2~8?有效期7天. 7.3清洗液(Clean I):用于测定过程中的吸样针冲洗
7.3.1商标:希森美康(Sysmex)
7.3.2包装规格:50ml
7.3.3货号:GSA500A
7.3.4成分:1%次氯酸钠及活性成分
7.3.5使用方法;液体试剂,直接使用
7.3.6储存:没开盖试剂放2~8?存放至包装有效期,开盖后放于仪器内有效期仅存4小时 7.4校准质控血浆(Ci-Trol)
7.4.1商标: 德灵(DADE BEHRING)
7.4.2货号:Level 1(Normai),291070 10×1ml
Level 2(Abnormal),291071 10×1ml
Level 3(Abnormal),291072 10×1ml
7.4.3使用方法:1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用
7.4.4储存:室温:2h, 2~8?:4h,冷冻分装保存:-20?<2周,-70?<6个月
:仪器的验证和光路系统校正
仪器的验证由生产商、代理商指定工程师和我科共同完成.灯泡大约半年更换一次,光路系统的校正
由代理商完成.
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9.1标本采集与要求
9.1.1标本采集:
抽取静脉血1.8ml,加入到含0.2ml109mmol/L(1:9)的枸橼酸钠溶液抗凝真空试管中,并轻轻颠倒
10次使之充分混匀,不得有凝块、不得形成泡沫,总量不得超过2.0?0.2ml,并在试管上做好标识.
采血应避免溶血和脂血,故患者应尽量空腹和避免在输入脂肪乳过程中或其后8小时内采血.采血
后2小时内送到检验科,需要运输时应在低温条件下运输.采集标本时宜“一针见血”,以防止组织
损伤,外源性凝血因子进入针管,最好不与其它实验一起采集,否则由于标本的分配、分装而使血液
停留在针管的时间延长.
9.1.2不合格标本的处理
对凝固、有凝块、严重溶血、重度黄疸、脂血、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标
本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》
处理
9.1.3标本保存
检测应在标本采集后2小时内完成,2~8?保存不超过4小时,分离后的血浆-20?以下密封可保存
2周.需长期保存的标本在-70?下不超过6个月,且只能冻融1次,分析前在37?迅速解冻,以减
低凝血因子的消耗,解冻后立即测试。分析后的标本不保存.
2
9.2检测前准备
采样后应尽快分离血浆(60分钟内进行),将标本1500×g(3000r/min)离心10分钟,务使血小板去除;.
在进行质控物和病人标本分析检测前,进行仪器状态和试剂检查,确保准备完好后才能进行分析.并
将检查结果记录在相应的仪器设备使用记录表上.
9.3病人标本的检测
9.3.1开机:开CA1500仪器左侧电源?开机后仪器进行自检、预热,当屏幕上显示Ready时可以进行试
验
9.3.2每日针冲洗:在主屏幕上选Rinse Probe,然后按下Execute进行针冲洗 9.3.3准备试剂:按照仪器试剂位置设定,把上述每项的试剂准备好,放在相应的位置 9.3.4准备反应杯:打开仪器顶部反应杯储存槽,查看反应杯是否足够,需及时添加 9.3.5准备标本;将离心好的样本放在相应的样本架上(一个架子可放10个样本),准备好放在进样器上 9.3.6输入试验项目:按下主菜单上的Work List键,在试验项目键点击APTT,使APTT项目下显示“-”
变为“?”,按“?”或“?”将需要测试标本如上操作选择;
9.3.7输入样本号:按下ID No.Entry,按顺序输入样本的序号或病人的病历号 9.3.8开始检测:待一切准备工作就绪,按下屏幕右上角START键,仪器开始检测„ 9.3.9查看结果:返回主屏幕,检测的项目如果由“◎”变为“?”表明此试验已经完成,然后按下Stored
Date(储存结果)键,屏幕会换到结果显示界面,按下边第一个菜单Graph,查看凝集曲线、吸光度、
结果等,检查是否有Error错误信息,有错误报警的标本需考虑重测
9.3.10关机前冲洗针:关机前需要洗针,按下Rinse Probe,然后按下Execute
9.3.11关机:回到主屏幕下,切断仪器电源.
:.
10.1质控物准备
用1ml蒸馏水溶解一瓶Dade Control质控血浆,轻轻颠倒混匀约5秒,置于室温30分钟,用前摇匀即可,不要剧烈振摇.将未用完的质控血浆在室温保存2小时、2~8?4小时、-20?以下冰箱中可保存24小时
10.2上机检测
将质控标本加入样品杯,上机检测.具体操作详见CA1500血液凝固分析仪作业指导书 10.3质控规则
10.3.1质控图正常分布规律
各点应分布在均值的两侧,95.45%数据落在x?2s内,99.73%数据落在x?3s内. 10.3.2质控图失控规则
a)一个质控物的测定结果超过x?3s(1
规则); 3s
b) 一个质控物的测定结果连续2次超过x+2s或x-2s(2规则) 2s
C) 一个质控物的测定结果连续2次测定其中1次超过x+2s另1次超过x-2s(R规则) 4s
d) 一个质控物的测定结果连续4次超过x+1s或x-1s(4规则) 1s
e)连续10次质控物结果都在均数的同一侧(10规则) x
f)连续5次测定结果渐增或渐减(5规则) T
10.4室内质控分析与失控处理
10.4.1质控结果分析
检测人员对质控结果进行分析,在发现质控数据违背质控规则后,通知组长,协助处理.组长分析该失控信号的真伪,并做出是否发出与测定质控品相关的那批病人标本检验报告的决定,必要时由检验科主任处理.检测人员填写失控报告.
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10.4.2失控原因分析极其处理过程
失控信号的出现受多种因素的影响,包括操作上的失误,试剂、校准品或质控品的失效,仪器维护不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数等.解冻的质控血浆一定要先混匀再吸
出至样品杯中,操作时间严格按作业指导书进行.所以,室内质控失效时.首先要查明失控原因,然后随机挑选出一定比例的病人标本进行重新测定,对失控做出恰当的判断.失控的处理原则见程序文件《内部质
量控制管理程序》
10.5质控标本检测完毕后,及时将质控血浆放回冰箱,-20?以下密封保存24小时.
多种药物如双香豆素、链激酶、尿酶、口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等可影响PT
结果,如出现异常结果,需做进一步实验以确定导致异常的原因,溶血、黄疸、脂血标本或混浊样本
影响结果,应重新采血.血标本与抗凝剂比例不当也影响检测结果.当红细胞比积过大(>0.55)或过
小(<0.20)可影响测定结果,这时枸橼酸钠的用量为V=0.00185×V×(1.00-α)×100 1
(注:V-枸橼酸钠用量, V-血量ml,α-红细胞比积) 1
有下列浓度的物质存在时,对APTT的干扰小于10%
标本类型 甘油三酯(mg/dL) 血色素(mg/dL) 结合胆红素(mg/dL)
正常 ?780 ?505 ?36
不正常 ?605 ?208 ?10 由仪器测定反应物凝固的时间即为活化部分凝血活酶时间
: 21.1-36.5 S(患者结果超过正常对照10S上有临床意义)
21~124秒
APTT:?20S 或?80S
16.1APTT常用于内源性凝血系统(因子)的筛选及肝素抗凝治疗的监测
16.2 APTT延长:见于先天性凝血因子缺乏(如血友病甲、乙,接触因子?、?缺乏、VWF等);多种凝
血因子缺乏(如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等);血液中有抗凝物质存在如凝血因
子抑制物、狼疮抗凝物、华法林或肝素水平增高,F?、F?及F?、F?缺乏,大量输入库血。 16.3 APTT缩短:见于DIC高凝期和妊娠高血压综合症等高凝状态以及血栓前状态、血栓性疾病。 16.4 是监测肝素治疗的首选指标。要注意APTT测定结果必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系,
否则不宜使用。一般在肝素治疗期间,APTT维持在正常对照的1.5~3.0倍为宜. 16.5对内源凝血途径因子(?、?、?)缺乏较CT敏感(血小板异常不影响APTT)能检出?:C小于25%
的轻型血友病.对凝血酶原、纤维蛋白原缺乏则不够敏感,故APTT延长的最常见疾病为血友病.此时
可进一步做纠正试验,即于患者血浆中加入1/4量的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆或正常血清(试
剂参见凝血酶原消耗试验的纠正试验),再做APTT,如正常血浆和吸附血浆能纠正延长的结果而血清
不能纠正,则为因子?缺乏;如吸附血浆不能纠正,其余两者都能纠正,则为因子?缺乏;如三者都不能
纠正,则为病理性循环抗凝物质。
17.
17.1在操作仪器时应按照仪器作业指导书进行操作,防止受伤、触电等
17.2在进行维护和检查工作时,请带上橡胶手套,使用专用的工具和部件,在工作完成后,用消毒液清洗
双手,以免发生感染
17.3在处理血样时应小心谨慎,应始终戴上橡胶手套,以避免发生细菌感染,若样本溅入眼睛或者伤口,
4
须用大量清水冲洗,并立即就诊
17.4在处理废液以及装卸相关部件时,请勿接触废液.如果其中包含血样,可能导致感染发生.如果无意
接触血液,首先用消毒液清洗,然后用肥皂清洗
17.5在处理试剂时:如果试剂不慎落入眼睛,立即用大量清水冲洗,并接受治疗;如果不慎吞入试剂,立
即向医生求助,喝入大量清水,并尽量呕出吞入试剂;如果试剂沾上皮肤或者手,用大量清水冲洗;在
丢弃废液和消耗品时,请按照处理医疗、传染性、工业性废水的步骤进行处理,如果其中含有血样,
可能导致细菌感染.
18.
18.1冷冻血浆可减低APTT对狼疮抗凝物以及对?、?、HMWK、PK缺乏的灵敏度;室温下,F?易失去
活性,因此恰当的标本处理非常重要。
18.2高脂血症可使APTT延长
18.3抗凝剂:草酸盐、EDTA、肝素不适用于APTT检查
18.4标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀,出现凝块,有组织液混入,混匀时过分用力使标本溶
血,造成结果变异。如果抽血过慢或不太顺利,可能激活凝血系统,试验结果将会显示凝血因子活性
增高,如果采血时产生泡沫,可能导致纤维蛋白原和V因子及?因子变性. 18.5纤溶药物的影响(如双香豆素、链激酶、尿酶等),超剂量使用肝素。 18.6FDP增加使凝固时间延长。
18.7其他药物的影响(如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等)。 18.8所有与标本接触的试管、吸管等均采用塑料或硅化处理的
.
19.1 叶应妩.王毓三等《全国临床检验
》第三版,东南大学出版社. 19.2 Sysmex公司《Sysmex CA-1500全自动血凝仪操作
》 1998.6修订本. 19.3熊立凡主编《临床检验基础》第三版,人民卫生出版社
19.4APTT试剂使用说明书,
20.
20.1CA1500常规操作
20.2APTT试剂使用说明书
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