【2017年整理】人1抗胰蛋白酶活性检测(1-AT)酶联免疫分析

【2017年整理】人1抗胰蛋白酶活性检测(1-AT)酶联免疫分析 人α1抗胰蛋白酶活性检测(α1-AT)酶联免疫分析 试剂盒使用说明 本试剂盒仅供研究使用 产品编号:CSB-E11719h 检测范围:31.2 ng/ml -2000 ng/ml 最低检测限:7.8 ng/ml 特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的人α1-AT，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期:6个月 预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中α1-AT含量。 说明 1(试剂盒保存:-20?(较长时间不用时);2-8?(频繁使用时)。 2(浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3(中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4(刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造 成任何影响。 概述 α1-抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,α1-AT)主要是由肝细胞合成的一种丝氨酸蛋白酶抑制剂 弹性蛋白(serineproteaseinhibitor,serpin)，能抑制多种丝氨酸内切肽酶(serineendopeptidase)—酶、胰蛋白酶、血浆素、凝血酶等蛋白酶的活性，在电泳中，其迁移位点位于α1蛋白带，因而又被称为α1-蛋白酶抑制剂(α1-proteaseinhibitor,α1-PI)。α1-AT具有较强的血管透通性，在肺组织中的浓度较其它serpins或α2-巨球蛋白的浓度高，而且对弹性蛋白酶的专一性更强，因而它更主要的生理功能在于抑制肺脏弹性蛋白酶的活性，保护肺部不受弹性蛋白酶的酶解损伤。α1-AT为单链糖蛋白，肽链由394个氨基酸残基组成，肽链中含有43个Asn/Asp残基，但仅在Asn46、Asn83、Asn247上连接有寡糖链，其中一个糖链为三叉寡糖链，另外两个双叉寡聚糖链，糖含量约为12%。正常人血浆中α1-AT含量为(2.90?0.45)g/L，体内半衰期为6天。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗α1-AT抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗α1-AT抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的α1-AT呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。 2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。 3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。 4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。 5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。 6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100) 7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100) 8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N HSO4)。 2 需要而未提供的试剂和器材 1. 标准规格酶标仪 2. 高速离心机 3. 电热恒温培养箱 4. 干净的试管和Eppendof管 5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4?过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可 检测，或将标本放于-20?或-80?保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8?C 1000 g离心15 分钟，或将标本放于-20?或-80?保存，但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放 于-20?或-80?保存，但应避免反复冻融。 注:标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 标本的稀释原则: 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则:2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000 ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释2000 ng/ml，1000 ng/ml，500 ng/ml，250 ng/ml，125 ng/ml，62.5 ng/ml，31.2 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制1000 ng/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)2000 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则: 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则: 临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加 标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触 及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37?反应120分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl(取1μl生物素标记 抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制)， 37?,60分钟。 3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩 干。 4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液) 100μl，37?， 60分钟。 5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩 干。 6. 依序每孔加底物溶液90μl，37?避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4 孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔显色不明显，即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量 与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入 终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟以内 进行检测。 注: 1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。 2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N HSO4。2 测量时先用此孔调OD值至零。 3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8?保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过 氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准 品、生物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板:如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算 以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。 2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 3. 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 7. 底物请避光保存。 8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 运动与健康 题目:体育锻炼对运动系统的影响 指导老师:欧阳靜仁 班级:热能092班 姓名:林灿雄 学号:200910814223 摘要: 这篇文章通过对人体运动系统组成的介绍，以及体育锻炼对运 动系统的作用和影响的一点点描述，给平时不重视锻炼的人说明了体 育锻炼的好处，希望能够有更多的人重视体育锻炼。 本文部分地方参考相关文件，可信度在一定程度上得到提高，同时也 未免有疏落之处，请指正。 参考: 关键词: 骨，骨连接，骨骼肌，支架作用、保护作用和运动作用，合理的体育 锻炼，三磷酸腺苷(ATP)酶 前言 体育锻炼与我们息息相关，在我们的身边，无时无刻都有人在运动，各种球类运动、跑步、游泳等等...大家都知道体育锻炼对人体是有好处的，然而具体有些什么好处呢,这个答案有多少人知道。通过这篇文章，希望可以增加大家对体育锻炼的认识。 体育锻炼既可增强关节的稳固性，又可提高关节的灵活性。 体育锻炼可使肌纤维变粗，肌肉体积增大，因而肌肉显得发达、结实、健壮、匀称而有力。 体育锻炼有助于增强肌肉的耐力。 体育锻炼能保持肌肉张力，减小肌萎缩和肌肉退行性变化，保持韧带的弹性和关节的灵活性，使脊柱的外形保持正常，从而能够减少和防止骨骼、肌肉、韧带、关节等器官的损伤和退化。 一、人体运动系统的组成 人体运动系统的组成包括骨、骨连接和骨骼肌。骨以不同形式(不动、微动或可动)的骨连接联合在一起，构成骨骼，形成了人体体形的基础，并为肌肉提供了广阔的附着点。肌肉是运动系统的主动动力装置，在神经支配下，肌肉收缩，牵拉其所附着的骨，以可动的骨连接为枢纽，产生杠杆运动。 (一)骨的组成部分: 骨bone是以骨组织为主体构成的器官，是在结缔组织或软骨基础上经过较长时间的发育过程(骨化)形成的。成人骨共206块，依其存在部位可分为颅骨、躯干骨和四肢骨。各部分骨的名称、数目见下页。 骨的形状: 人体的骨由于存在部位和功能不同，形态也各异。按其形态特点可概括为下列四种 : 1、长骨 long bone 主要存在于四肢，呈长管状。可分为一体两端。 两端较体又叫骨干，其外周部骨质致密，中央为容纳骨髓的骨髓腔。膨大，称为骺。骺的表面有关节软骨附着，形成关节面，与相邻骨的关节面构成运动灵活的关节，以完成较大范围的运动。 2、短骨 short bone 为形状各异的短柱状或立方形骨块，多成群分 布于手腕、足的后半部和脊柱等处。短骨能承受较大的压力，常具有多个关节面与相邻的骨形成微动关节，并常辅以坚韧的韧带，构成适于支撑的弹性结构。 3、扁骨 flat bone 呈板状，主要构成颅腔和胸腔的壁，以保护内部的脏器，扁骨还为肌肉附着提供宽阔的骨面，如肢带骨的肩胛骨和髋骨。 4、不规则骨 irregular bone 形状不规则且功能多样，有些骨内还生有含气的腔洞，叫做含气骨，如构成鼻旁窦的上颌骨和蝶骨等。 (二)骨连接 1、韧带连接 两骨之间靠结缔组织直接连结的叫韧带连接。韧带ligament多呈膜状、扁带状或束状，由致密结缔组织构成。肉眼观呈白色，有光泽，附着于骨的地方与骨膜编织在一起，很难剥除，有的韧带由弹性结缔组织构成，肉眼观呈淡黄色，叫做黄韧带(如项韧带)。一般的韧带连接允许两骨间有极微的动度。但有些骨与骨之间，两直线缘相对或互以齿状缘相嵌，中间有少量结缔组织纤维穿入两侧的骨质中，使连结极为紧密，叫做缝，如颅骨的冠状缝和人字缝。 2、软骨结合 相邻两骨之间以软骨相连接叫软骨结合。软骨组织属结缔组织 的一种，呈固态有弹性，由大量的软骨细胞和间质构成，由于间质的成分不同，又有透明软骨、纤维软骨和弹力软骨的区分。第一助骨连于胸骨的软骨属透明软骨，而相邻椎骨椎体之间的椎间盘则由纤维软骨构成。由于软骨具有一定弹性，所以能做轻微的活动。有的软骨结合保持终生，而大部分软骨结合在发育过程中骨化变为骨结合。 3、骨结合 由软骨结合经骨化演变而成，完全不能活动，如五块骶椎以骨结合融为一块骶骨。 (三)骨骼肌 骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种。 肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多岩细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带(I带)及暗带(A带)。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个z线之间的区段，叫做一个肌节，长约1.5~2.5微米。 相邻的各肌原纤维，明带均在一个平面上，暗带也在一个平面上，因而使肌纤维显出明暗相间的横纹。骨骼肌细胞构成骨骼肌组织，每块骨骼肌主要由骨骼肌组织构成，外包结缔组织膜、内有神经血管分布。骨骼肌收缩受意识支配，故又称“随意肌”。收缩的特点是快而有力，但不持久。 运动系统的肌肉属于横纹肌，由于绝大部分附着于骨，故又名 骨骼肌。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉具有一定的弹性，被拉长后，当拉力接触时可自动恢复到原来的程度。肌肉的弹性可以减缓外力对人体的冲击。肌肉内还有感受本身体位和状态的感受器，不断将冲动传向中枢，反射性地保持肌肉的紧张度，以维持体姿和保障运动时的协调。 二、体育锻炼对运动系统的作用 运动系统主要起支架作用、保护作用和运动作用。人体的运动系统是否强壮、坚实、完善，对人的体质强弱有重大影响。例如，骨架和肌肉对人体起着支撑和保护作用。它不仅为内脏器官，如心、肺、肝、肾以及脑、脊髓等的健全、生长发育提供了可能，而且能保护这些器官使之不易受到外界的损伤。骨、软骨、关节、骨骼肌是人体运动器官，骨的质量，关节连接的牢固性、灵活性，肌肉收缩力量的大小和持续时间的长短等，在很大程度上决定了人体的运动能力。 合理的体育锻炼能促进骨的血液循环，增加对骨的血液供应，使正处旺盛造骨时期的骨组织能获得更多造骨原料，加速造骨过程，加快骨的生长。增强骨的抗折抗弯抗压扭曲等能力，使骨更坚固。还能预防关节的变形，保持骨的弹性，延缓骨的老年性退行性变化。除此之外，体育锻炼还有助于增强韧带的弹性，增加关节的稳固性，提高关节的灵活性。 通过体育锻炼，可以使肌肉体积增大，肌肉中脂肪含量减少，肌肉内结缔组织增多，肌肉内化学成分发生变化，肌肉毛细血管增多。 体育锻炼时，由于肌肉的活动，促使肌肉内毛细血管大量开放，这样肌肉可获得比平时多得多的氧气及养料，大力促进肌肉的生长，使差价活动的肌纤维数量增加。 三、体育锻炼对运动系统的影响 体育锻炼既可增强关节的稳固性，又可提高关节的灵活性。关节稳固性的加大，主要是增强了关节周围肌肉力量的结果，同时与关节和韧带的增厚也有密切的关系。关节灵活性的提高，主要是关节囊韧带和关节周围肌肉伸展性加大的结果。人体的柔韧性提高了，肌肉活动的协调性加强了，就有助于适应各种复杂劳动动作的要求。 体育锻炼可使肌纤维变粗，肌肉体积增大，因而肌肉显得发达、结实、健壮、匀称而有力。正常人的肌肉约占体重的35,,40,，而经常从事体力劳动和体育锻炼的人，肌肉可占体重的45,,55,。 体育锻炼可使肌肉组织的化学成分发生变化，如肌肉中的肌糖原、肌球蛋白、肌动蛋白和肌红蛋白等含量都有所增加。肌球蛋白、肌动蛋白是肌肉收缩的基本物质，这些物质增多不仅能提高肌肉收缩的能力，而且还使三磷酸腺苷(ATP)酶的活性增强，供给肌肉的能量增多。肌红蛋白具有与氧结合的作用，肌红蛋白含量增加，则肌肉内的氧储备量也增加，有利于肌肉在氧供应不足的情况下继续工作。 体育锻炼有助于增强肌肉的耐力。因为体育锻炼可使肌纤维内线粒体的大小和数量成倍增加，同时在锻炼时还使肌肉中的毛细血管大量开放(安静时肌肉每平方毫米内开放的毛细血管不过80条左右，剧烈运动时开放数可增加到2000,3000条)从而产生更多的能量。因 此，长期坚持锻炼，可使肌肉的毛细血管形态结构发生变化，出现囊泡状，增加肌肉的血液供应量。 体育锻炼能保持肌肉张力，减小肌萎缩和肌肉退行性变化，保持韧带的弹性和关节的灵活性，使脊柱的外形保持正常，从而能够减少和防止骨骼、肌肉、韧带、关节等器官的损伤和退化。 讨论:太极拳对运动系统的作用。 总的来说，太极拳是技击与健身相结合的古老拳术。要求心境意导，呼吸自然，思想专一，心理安静，意念引导动作，呼吸要求自然平稳，并与动作相配合。中正安舒，松柔连贯;圆括自然，周身协调;刚柔相济。 太极拳运动是一种有氧运动，是神经系统与运动系统，心血管系统，呼吸系统充分协调的全身运动。太极拳运动是一种神经系统协调下的全身运动，在运动中使全身各种细胞，器官同时平均发展为原则。练太极拳可以“蠕筋骨，利关节”，有抗老防衰之功效。俗话说，人老腿先老。而太极拳重视下肢运动，练太极拳腿部肌肉发达，血管丰满，这样就增加了血液输送与回流的泵力。另外，虚实转换能锻炼两腿的耐力，对维持人体的平衡大有好处。即使运动时全身之肌肉虽已成疲劳不堪的状态，而心脏的搏动并不失常，呼吸并不困难，相反的在运动后，尚能感到比运动前呼吸轻松舒畅。太极拳运动要求松靜与运动相结合，松靜反应主要表现为副交感神经兴奋，使心跳平稳，呼吸匀长，微血管扩张，腺体分泌增加。而且练太极拳对许多慢性而服药不易见效的疾病会产生显著疗效。 综上所述，我们应该重视体育锻炼，只有积极参加体育锻炼， 才能拥有强健的体魄以及良好的心态，才能更好的进行学习及工作， 完成我们的理想。