【doc】 自噬／溶酶体途径在多巴胺神经元变性中的作用

【doc】 自噬／溶酶体途径在多巴胺神经元变性中的作用 自噬,溶酶体途径在多巴胺神经元变性中 的作用 中国药理通讯2005年第二十二卷第三 它具有一分泌酶抑制剂作用本研究观察apidaecin对CHO细胞Ap1—42,Ap1—40生成的影响.:用api- daeci作用CHO细胞48小时后收集各孔细胞,利用酶联免疫吸附方法,按人AI31—42,1—40分光光度试剂盒测定 AI31—42,AIM一40的浓度用M1TI’法测定apidaecin作用CHO细胞48小时后的毒性作用.结果:使用apidaecin 0.1,1,t0ug/ml剂量的CHO细胞中AIM一42生成量与对照组相比分别减少115%,570%,585%,具有显着性差异. 而相同剂量的apidaecin对CHO细胞中A{31—40的生成与对照组比都没有显着差异.同时0.1,1,10,38.77ug/ml 剂量的apidaecin对CHO细胞生长存活没有明显影响,明apidaecin在抑制AI31—42的同时无明显的细胞毒性作 用.结论apidaecin有一定的抑制一分泌酶的作用. THPBs同类物对多巴胺D1,D2,D3受体的作用特性 孙佩华和友俞蕾萍施卫星金国章 新药研究国家重点实验室中国科学院上海药物研究所 中国科学院上海生命科学研究院上海201203 目的:左旋千金藤啶碱(1一SPD)是四氢原小檗碱同类物(THPBs)的先导化合物,本课题组已证明其具有D1受 体激动和D2受体阻滞的双重作用,并积极倡导D1激动一D2阻滞双重作用与精神分裂症病因相匹配治疗的设想. 新近又发现SPD对D3受体有较强的亲和力,因此本文研究SPD的更理想的结构关系.国际上新发现D3受体与 精神分裂症,帕金森病和药物成瘾的发病过程均有密切关系.方法:利用体外基因表达技术,构建了表达D1受体, D2受体,D3受体的Sf9细胞和稳定表达D3受体的NG108细胞.采用同位素配基受体竞争结合方法检测药物对受 体的亲和力;同位素cAMP方法及EFC(EnzymeFragmentComplementation)cAMP化学发光方法检测药物对受体的 激动阻滞特性.结果:1.以[3H]SCH23390为配体竞争结合D1R,[H]Spiprone配体竞争结合D2R和D3R,从一系 列THPBs同类物中筛选比较对三种多巴胺受体的亲和力.结果显示THPBs同类物对D1R,D2R,D3R亲和力的改 变有一定规律性,在SPD特定位点用卤素取代后可以增强它们对以上3个受体的亲和力.2.从上述结果中选优秀 者进行cAMP信号转导实验,以测试其激动或阻滞的特性.证实被卤素取代的SPD同类物依然具有D1激动一D2 阻滞的双重作用特性.3.用EFCcAMP化学发光方法,发现在稳定表 达D3R的NG108细胞中SPD能有效抑制 Forskolin引起的cAMP增加(InhibitionofForskolin—StimulatedcAMPaccumulation),并且D3R的阻滞剂能翻转SPD 的这种作用.结论:SPD对多巴胺D3受体有激动作用. 自噬/溶酶体途径在多巴胺神经元变性中的作用 梁中琴韩蓉秦正红 苏州大学医学院药理学教研室苏州215007 目的:探索自噬/溶酶体途径是否参与了帕金森病(Parkinsondisease,PD)病人及PD动物模型黑质多巴胺神 经元损伤机制.方法:取PD病人中脑切片,用免疫荧光双标记观察黑质细胞溶酶体蛋白酶B和L(CathepsinBand L)的表达;用立体定位技术将6一羟基多巴(6一OHDA)81xg,/41~l 注射到大鼠右侧黑质致密部(Substantianigrapars compacta.SNp()制作PD大鼠模型,I)NA凝胶电泳及TUNEL法检测DA神经元的变性,免疫组化法检测多巴胺神 经元cathepsinB及eathepsinL,溶酶体相关膜糖蛋白一1(LAMP一1)的表达,预先给于溶酶体酶抑制剂3一MA, FUNEL法及免疫荧光双标记观察黑质细胞凋亡与CathepsinL的关系.结果正常人SNpc脑切片中仅有少量的酪 氨酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase,TH)阳性细胞表达CathepsinL,但PD病人SNpc脑切片中TH阳性细胞虽然较 少,但大多数TH阳性细胞均表达CathepsinL;大鼠注射6一OHDA12h后,可观察到SNpcTUNEL阳性细胞的增 加,表现为明显的时间依赖性;在凝胶成像系统观察下,正常对照组大鼠SNpcDNA无凋亡条带;6一OHDA模型组 中呈180bp及其倍数的DNA断裂片断出现,较对照组相比DNALadder条带明显增多,3一MA(500nmo1)预防性给 药组DNALadder条带明显减弱;6一OHDA注射24h后TH阳性细胞开始减少,注射4天后,大多数DA神经元死 亡.直至损伤8—32天,未见TH阳性细胞增加;免疫荧光双标记观察发现,6一OHDA注射24h后,随着损伤侧TH 阳性细胞的减少,CathepsinL及cathepsinB表达增加,与此同时,上调LAMP一1的表达,预先给予溶酶体抑制剂3 32 中国药理通讯2005年第二十二卷第三期 一 MA,不但能抑制CathepsinL的表达,而且使TUNEL阳性细胞显着减少.结论:PD病人SNpc中多数残存的TH 阳性细胞表达CathepsinL;大鼠SNpc注射6一OHDA可诱导多巴胺神经元迅速变性,致使多巴胺神经元凋亡,上调 CathepsinL,cathepsinB及LAMP一1的表达,3一MA可明显减弱6一OHDA引起的DNA凋亡条带,在抑制Cathep— sinL表达的同时保护了多巴胺神经元;本研究结果首次表明,6一 OHDA引起的神经元变性可能与自噬体的增多和 溶酶体的激活有关.提示自噬/溶酶体途径很可能参与了PD的病理 过程. Timecoursesofvascularendothelialgrowthfactorandintercellular adhesionmolecule-—1expressionsinaortasofatheroscleroticrats ‘Peng—YuanYangYao—ChengRui DepartmentofPharmacology,SchoolofPharmacy,SecondMilitaryMedical University,Shanghai200433 AIM:Moreandmorestudieshavefocusedontheexpressionsofgrowthfactorsandadhesionmoleeulesinatherosele— roticlesions,whichareconfirmedtoplaycentralrolesinangiogenesisandendothelialdysfunction,includingvascularen— dothelialgrowthfactor(VEGF)andIntercellularadhesionmolecule—l(ICA M—1).However,thediffereneeof.h factorandadhesionmoleculeexpressiontimecourseshasnotbeendeterminedinvivo.Thisstudyaimedtodeterminethe expressionpatternsandexpressioncu~esofICAM—landVEGFinatheroscl eroticratsduringthetimecourse.RESUIS: Anexperimentatheroscleroticmodelinratswasestablishedbycombiningthehighfat/cholesteroldietswithinjectionofvi— taminD3.Insituhybridizationwasusedtodeterminetheexpressionpatternso fVEGFandICAM—linaortasofnormalor atheroscleroticratsin8weeks.TherewasamassiveincreaseinreactivityforbothICAM—landVEGFinatherosclerotic plaques.Northernblot,WesternblotandEUSAanalysiswereusedtoquantifyVEGFandICAM—lexpressionsintime course.Inrataorta,theexpressioncurvesintimecourseshowedthatICAM—l ,notVEGF,wasup—regulatedinmRNA levelssignificantlyin2weeks;whileVEGFexpressionwashysteresisthanICAM—1.whichshowedm~imumexpression levelin8weeks.CONCLUSION:OurresultsprovidetheevidenceofVEGFandICAM—lexDressioneuresintimecourse inatheroscleroticrats,whichindicateddifferentregulatorymechanismsofVEGFandICAM—lexpressioninatherogenese. 13一淀粉样肽(25-35)对PC12细胞par一4和bcl一2基因表达的 影响 梅寒芳曲喜英祝其锋 广东医学院生物化学与分子生物学教研室湛江524023 目的:观察13一amyloidpeptide25—35(Ap2,)对PC12细胞par一4 和bcl一2基因表达的影响.方法:采用终 浓度分别为0,5,10,20p~mol/L的Ap25处理PC12细胞24h,用M1Tr 比色法细胞存活率;Hoechst33258一PI荧 光染色观察细胞核凋亡的形态学改变;RT—PCR检测par一4和bcl 一2基因mRNA表达变化;Westemblot检测Par 一 4和Bcl一2蛋白表达变化.结果随着A剂量的增加,PC12细胞存活率降低,凋亡明显增加,且par一4基因 表达增加,bcl一2基因表达降低.结论:Ap诱导PC12细胞凋亡可能与上调Par一4表达和下调Bcl一2表达 有关. 姜黄素影响A一诱导去血清培养PC12细胞周期变化 与细胞凋亡的可能机制 谢朝阳梅寒芳祝其锋 广东医学院生物化学与分子生物学研究所湛江524023 目的:探讨姜黄素(Curcumin,Cur)对A1325-35诱导体外去血清培养PC12细胞周期异常与细胞凋亡的可能影 33